實驗四+高等植物光合色素含量的測定

實驗四高等植物光合色素含量測定實

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景K652=34.5實驗?zāi)康恼莆沼梅止夤舛扔嫓y定葉綠素含量的方法。實驗原理

混合液中的兩個或多各組分，只要它們的光譜吸收峰不互相重疊，仍然可以根據(jù)Lambert-Beer定律（A=kLC）求出各組分含量。Lambert定律：A=kL；Beer定律A=kC。葉綠素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分別為663nm、645nm，由此得出：見推導(dǎo)過程Ca=12.7A663–2.69A645；Cb=22.9A645–4.68A663Ca+b=8.02A663+20.20A645實驗儀器及藥品實驗材料：植物葉片A663=Ca.ka1+Cb.kb1A645=Cb.kb2+Ca.ka2分光光度計測出，故求二元一次方程組可得到此公式。k——比吸收系數(shù)。即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物質(zhì)的濃度(C)為1g/L(0.1%)，比色皿的直徑(光徑，L)為1cm時所測出的吸光度即為比吸收系數(shù)。故其單位為：ε——摩爾吸收系數(shù)。即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物質(zhì)的濃度(C)為1mol/L，比色皿的直徑(光徑，L)為1cm時所測出的吸光度即為摩爾吸收系數(shù)。故其單位為：由于k是一個常數(shù)，而A可以通過返回方法及步驟方法一：快速測定法由于葉綠素a、b在652nm處有共同吸收，k=34.5Lg-1.cm-1。可直接用便攜式葉綠素測定儀測定植物葉片的葉綠素含量，最后濃度單位為mg/dm2方法二:分光光度計法色素提?。簩⑸鲜鲋参锶~片洗凈并用濾紙吸干，準確稱取已知Φ的葉圓片0.05g左右，加入少許CaCO3和石英砂及80%丙酮2ml，充分研磨，轉(zhuǎn)入離心管中（離心機使用），再用5ml

80%丙酮洗研缽，轉(zhuǎn)入離心管中，平衡，5000rpm離心10min，上清液定容至10ml備用。測定：以1cm比色皿分別測定A663、A645。使A控制在0.1~0.8之間。結(jié)果與討論1、根據(jù)原理中計算出三類色素的濃度（mg/L）。

2、根據(jù)公式分別計算出各種植物葉片色素含量。思考題1、一般正常的植物葉片，Chla/Chlb=3/1，你所測定的結(jié)果符合此比例嗎？為什么？2、兩種測定方法含量有何不同？為什么？3、怎樣把方法一中的葉綠素含量mg/dm2轉(zhuǎn)換為方法二中的mg/gFW？怎樣測定不同形態(tài)的植物葉片的葉面積？Chlcontent=

(mg.g-1FW)附1.葉面積的計算選取單位面積重量是一個常數(shù)的打印紙如A4或16K。一般A4打印紙為70~105GSM（g/m2）。用鉛筆輕輕地沿著葉緣在A4紙上劃線。用剪刀沿著葉緣剪下A4紙。稱所剪下的A4紙的重量W(g)。計算：附2.高速冷凍離心機的使用方法溫度調(diào)節(jié)1、插上電源插座2、按T接通電源3、按功能鍵調(diào)節(jié)溫度上限4、按功能鍵調(diào)節(jié)溫度下限5、按功能鍵顯示目前溫度4、按