版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
發(fā)布發(fā)布內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局2023-01-082022-12-08ICS67.120.01CCSICS67.120.01CCSB45內(nèi) 蒙 古 自 治 區(qū) 地 方 標 準DB15/T2833—2022PCRReal-timePCRmethodfordetectionofcanislupus-derivedmaterialsDB15/T2833—2022DB15/T2833—2022II前 言本文按GB/T1.1—2020《準工導(dǎo)則 第部分標化件結(jié)和起規(guī)》起草。本文件由中華人民共和國呼和浩特海關(guān)提出并歸口。本文件起草單位:中華人民共和國二連海關(guān)。本文件主要起草人:王伊琴、陳少博、包勇敢、楊帆、荊文魁、蘇日娜、張志峰、常鴻、寇福軍、趙治國。DB15/T2833—2022DB15/T2833—2022DB15/T2833—2022DB15/T2833—2022115 下列縮略語適用于本文件。CTAB:十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrithylammoniumbromide)DNA:脫氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)FAM:6-羧基熒光素(6-carboxyfluorescein)PCR(polymerasechainreaction)TAMRA:(carboxy-tetramethyl-rhodamine)Tris:三(羥甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]4 縮略語Ct值 cyclethreshold每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。實時光 PCRreal-timePCR在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號的積累實時監(jiān)控整個PCR擴增過程。下列術(shù)語和定義適用于本文件。狼源性成分檢測實時熒光PCR法范圍本文件規(guī)定了動物源性產(chǎn)品中狼源性成分實時熒光PCR檢測方法。(0.15ng/L。(GB/T6682 GB/T27403 22DNA提取DNADNADNAA260/A280在1.7~1.9PCR實時熒光PCR檢測7.2.1 反應(yīng)體系體積為25.0L,見表1。實時熒光PCR儀(加熱速率10℃/s以上)。高速臺式離心機(最高轉(zhuǎn)速12000rpm)。(3000rpm)天平(感量0.01g)。單孔道微量移液器:0.5L~10L、10L~100L、20L~200L、100L~1000L。7 GB/T6682上游:5′-CCGTACTCTAGCTTACATA-3′;下游:5′-GAGACCTTCCAGATGAAA-3′;5′-(FAM)-TACCTCACATTAGCCAAGAAGCCA-(TAMRA)-3′。DNA。Tris-HCl(pH8.0NaCl。。K20mg/mL)75PCRDNA,B。DNA。ddH2O。6 表1 狼源成實光PCR檢測法反體系試劑名稱貯備液濃度mol/L反應(yīng)體系體積LPCR反應(yīng)預(yù)混合液—12.5上游引物(F)10.01.0下游引物(R)10.01.0探針(P)10.01.0模板—2.0ddH2O—補足至總體積為25.0檢測過程分別設(shè)陰性對照、陽性對照和空白提取對照。7.2.2 94℃,3min94℃,1060℃,1060℃時收質(zhì)量控制質(zhì)控對照應(yīng)滿足以下條件,否則應(yīng)重新實驗:Ct35.0;Ct35.0;Ct28.0。結(jié)果判定,2Ct28.0,2Ct28.01Ct28.0~35.0DNAPCRCtCt28.0結(jié)果表述檢測過程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的規(guī)定執(zhí)行。3444000rpm/min~5000r/min離心10min。1m)EP2m管0301200rm10min。600L~650LEP2CTAB1min。12000rpm離心10min350的1.2mol/LNaCl(2350L溶液。加入350L30min12000rpm10min。EP0.20min,12000rpm離心10min500L7512000rpm10min。,6015s~20s(。100LTEbuffer或DEPC附錄A(資料性)溶液配制及提取方法CTAB將5gCTAB,20.45gNaCl,3.03gTris,1.86gNa2-EDTA溶于200mL水中,用鹽酸調(diào)pH8.0后,定容至250mL,115℃高壓15min。CTAB稱0.2gCTAB,0.234gNaCl,定容至100mL,115℃高壓15min。1.2mol/LNaCl稱取28gNaCl,定容至400mL,115℃高壓15min。DNA0.5g~11.5mL~3.5mLCTAB12L~20L根據(jù)CTAB265℃至少1h(CTAB,1mL10。55附錄B(規(guī)范性)狼源性成分的目標擴增序列142bpCCGTACTCTAGCTTACATAACTCAG
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 托班襪子配對課程設(shè)計
- 幼兒園壘球課程設(shè)計
- 報檢實務(wù)課程設(shè)計
- 呼吸燈課程設(shè)計csdn
- 天津市stem課程設(shè)計大賽
- 微機跑馬燈課課程設(shè)計
- 體育專業(yè)課課程設(shè)計
- android驅(qū)動課程設(shè)計
- 工作分析課程設(shè)計內(nèi)容
- 幼兒中醫(yī)課程設(shè)計
- 《回收式自身輸血》課件
- 英語演講智慧樹知到課后章節(jié)答案2023年下重慶大學(xué)
- 自主實習(xí)申請表
- 教科版小學(xué)科學(xué)一年級上冊期末測試試卷有答案
- 政府數(shù)據(jù)信息保密協(xié)議范本
- 單位工程竣工驗收證明書(標準格式)-揚州市
- 自身免疫性多內(nèi)分泌綜合征
- 《新能源汽車》課程說課PPT
- 租賃經(jīng)營合作協(xié)議書
- FREE高考英語核心詞匯1783
- 武松人物介紹
評論
0/150
提交評論