月季的花藥培養(yǎng)

月季的花藥培養(yǎng)花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

2021/4/272知識回顧單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體翻倍植株（2N）特點：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）2021/4/273花的結(jié)構(gòu)一、課題背景2021/4/274花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識2花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.2021/4/275花粉發(fā)育過程2021/4/276小孢子母細(xì)胞花粉母細(xì)胞小孢子減數(shù)分裂有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核有分絲裂精子1個營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞4個4個4個4個4個8個（小孢子四分體時期單核居中期單核靠邊期雙核期）2021/4/277雌蕊的結(jié)構(gòu)2021/4/278活動1：閱讀“被子植物的花粉發(fā)育”，回答下列問題：

1．花粉是___倍體的_______細(xì)胞.

被子植物的花粉是在

中由

經(jīng)過

分裂形成的。

2．花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時期：

減數(shù)單生殖（

）分裂（

）分裂小孢子母細(xì)胞（2n）（

）時期（n）單核（

）期（n）雙核期（）細(xì)胞核（n）（

）細(xì)胞核（n）（

）細(xì)胞（n）（）細(xì)胞（n）（

）個精子(n)單核（

）期（n）（）分裂減數(shù)小孢子四分體靠邊有絲居中生殖營養(yǎng)花粉管2生殖有絲花藥花粉母細(xì)胞基礎(chǔ)知識2021/4/279（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比2021/4/2710①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，給材料消毒帶來困難困難；③挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開放的花蕾，菌少，易消毒。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇：⑴不同種類植物的誘導(dǎo)成功率不同。⑵同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導(dǎo)成功率有直接影響。⑶合適的花粉發(fā)育時期：花期早期時的花藥最佳。⑷選擇最合適的花粉發(fā)育時期2021/4/2711花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調(diào)節(jié)劑的水平和配比起決定作用。⑴誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA；⑵誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA代之。親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理、接種密度等對誘導(dǎo)成功率都有一定的影響。2、培養(yǎng)基的組成：3、其他因素：2021/4/2712為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？討論：2021/4/27131.選擇花藥一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。2.最常用的方法：某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青—鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。三、實驗操作（一）材料的選取醋酸洋紅法2021/4/2714花蕾無菌水清洗吸干表面水分0.1％的氯化汞溶液2-4min無菌水清洗3-5次70％的酒精浸泡30s1.將花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30s2.無菌水清洗3.無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4.放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4min（也可用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5.無菌水沖洗3~5次（二）材料的消毒2021/4/2715

滅菌后花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。

在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（三）接種和培養(yǎng)2021/4/2716

經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。

每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。2021/4/2717

對培養(yǎng)出來的植株做進一步的鑒定和篩選。因為在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化。2021/4/2718四、結(jié)果分析與評價1、選材是否恰當(dāng)

選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。應(yīng)學(xué)會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。

2、無菌技術(shù)是否過關(guān)

如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說明某些操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。3、接種是否成功

如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。2021/4/2719基礎(chǔ)知識實驗操作被子植物的花粉發(fā)育花粉其他因素影響因素花粉發(fā)育經(jīng)歷的時期月季的花藥培養(yǎng)材料與培養(yǎng)基材料的選取產(chǎn)生途徑結(jié)果分析與評價消毒接種和培養(yǎng)課堂小結(jié)2021/4/2720植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。2021/4/2721自主測評7．基因型為AaBb的水稻（24條染色體）的花藥通過無菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)形成試管苗。（1）愈傷組織是花粉細(xì)胞不斷分裂后形成的不規(guī)則的細(xì)胞團，愈傷組織形成中，必須從培養(yǎng)基中獲得

、

和小分子有機物等營養(yǎng)物質(zhì)。（2）要促進花粉細(xì)胞分裂生長，培養(yǎng)基中應(yīng)有

和

兩種激素。（3）愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，再由芽發(fā)育成葉和莖。這一過程必須給予光照，其原因是①_________________

②

。（4）試管苗的細(xì)胞核中含有

條脫氧核苷酸鏈。（5）培育成的試管苗可能出現(xiàn)的基因型有。

水無機鹽細(xì)胞分裂素試管苗的生長發(fā)育所需營養(yǎng)來自葉綠體利用光能制造的有機物24AB、Ab、aB、ab生長素葉綠素的形成需要光2021/4/2722下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，請據(jù)圖回答有關(guān)問題：課堂練習(xí):2021/4/2723(1)選用的材料合適與否是成功誘導(dǎo)出花粉植株的重要因素，一般來說選用

期的花粉可提高成功率。選擇花粉時，一般要通過

來確定花粉是否處于合適的發(fā)育期，這時需要對花粉的細(xì)胞核進行染色，常用的染色劑是

。(2)上圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中

。

(3)胚狀體與愈傷組織在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別在于愈傷組織的細(xì)胞排列疏松無規(guī)則，是一種高度

的薄壁細(xì)胞，胚狀體與

發(fā)育