各類臨床微生物標(biāo)本規(guī)范操作流程

各類臨床微生物標(biāo)本規(guī)范操作流程目錄血培養(yǎng)操作流程尿培養(yǎng)操作流程痰培養(yǎng)操作流程糞便培養(yǎng)操作流程皮膚膿腫，抽吸液等培養(yǎng)操作流程當(dāng)微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時(shí)形成菌血癥或真菌血癥血培養(yǎng)常見菌：革蘭陰性菌主要包括大腸桿菌，肺炎克雷伯菌，陰溝腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，傷寒沙門菌，綠膿桿菌，鮑曼不動(dòng)桿菌等；革蘭陽(yáng)性菌主要包括金黃色葡萄球菌，凝固酶陰性葡萄球菌，念珠菌屬等。菌血癥是臨床醫(yī)學(xué)急癥，引起菌血癥的細(xì)菌通常是多重耐藥菌，盡快采集血液進(jìn)行培養(yǎng)(血培養(yǎng))和準(zhǔn)確的抗生素敏感試驗(yàn)報(bào)告對(duì)危重患者感染的診斷，治療和預(yù)后有重要的臨床意義，血培養(yǎng)是把靜脈穿刺獲得的血液接種到一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)瓶中，用來(lái)發(fā)現(xiàn)、識(shí)別細(xì)菌或其它可培養(yǎng)分離的微生物。血培養(yǎng)操作流程臨床知識(shí)當(dāng)微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時(shí)形成菌血癥或真菌血癥血培養(yǎng)常見菌：革蘭陰性菌主要包括大腸桿菌，肺炎克雷伯菌，陰溝腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，傷寒沙門菌，綠膿桿菌，鮑曼不動(dòng)桿菌等；革蘭陽(yáng)性菌主要包括金黃色葡萄球菌，凝固酶陰性葡萄球菌，念珠菌屬等。菌血癥是臨床醫(yī)學(xué)急癥，引起菌血癥的細(xì)菌通常是多重耐藥菌，盡快采集血液進(jìn)行培養(yǎng)(血培養(yǎng))和準(zhǔn)確的抗生素敏感試驗(yàn)報(bào)告對(duì)危重患者感染的診斷，治療和預(yù)后有重要的臨床意義，血培養(yǎng)是把靜脈穿刺獲得的血液接種到一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)瓶中，用來(lái)發(fā)現(xiàn)、識(shí)別細(xì)菌或其它可培養(yǎng)分離的微生物。血培養(yǎng)操作流程臨床知識(shí)二、血標(biāo)本采集和運(yùn)送1．采血指征：一般患者出現(xiàn)以下一種體癥時(shí)可作為采血的重要指征：發(fā)熱(≥38℃)或低溫(≤36℃)，寒戰(zhàn)，白細(xì)胞增多(計(jì)數(shù)大1×109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞)，皮膚粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低，CRP升高及呼吸快，特殊患者(如血液病)出現(xiàn)粒細(xì)胞減少(成熟的多形核白細(xì)胞<1000×109/L)，血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體癥的臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng)。新生兒菌血癥，應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。對(duì)入院危重感染患者在未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時(shí)采集血培養(yǎng)。2．皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行以下三步法：1）70％酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上。2)1％～2％碘酊作用30s或10％碘伏60s，從穿刺點(diǎn)向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上。3)70％酒精脫碘。3．培養(yǎng)瓶消毒程序1)70％酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s。血培養(yǎng)操作流程4．靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序1)用注射器無(wú)菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養(yǎng)瓶，2)血標(biāo)本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。5．采血量

成人采血量是8～l0ml，兒童l～5ml。血液和肉湯之比為1：5～l：10。6．血培養(yǎng)份數(shù)和采血時(shí)間

采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在24h內(nèi)采集2～3份血培養(yǎng)(一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng))。對(duì)間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前0.5～1h采血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后lh進(jìn)行。特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議：1)可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎，應(yīng)在不同部位采集2～3份血標(biāo)本。2)不明原因發(fā)熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱，先采集2～3份血標(biāo)本，24～36h后估計(jì)體溫升高之前(通常在下午)再采集2份以上。3)可疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，在l～2h內(nèi)采集3份血標(biāo)本，如果24h后陰性，再采集3份以上的血標(biāo)本。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)三天，每天采集2份。選用可中和或吸附抗菌藥物的培養(yǎng)基。7．標(biāo)本運(yùn)送

采血后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置35℃～37℃孵箱中，切勿冷藏。血培養(yǎng)操作流程三、標(biāo)本驗(yàn)收

1．血培養(yǎng)瓶驗(yàn)收

1)檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染。

2)檢查瓶子上的標(biāo)簽與申請(qǐng)單是否相符。

3)檢查血液標(biāo)本是否適量，并在申請(qǐng)單上注明采血量。

4)對(duì)于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長(zhǎng)可視信號(hào)：培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等。如發(fā)現(xiàn)可視信號(hào)提示有微生物生長(zhǎng)，應(yīng)該立即直接涂片鏡檢和劃線轉(zhuǎn)種。

2．不合格血培養(yǎng)標(biāo)本的處理1)拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報(bào)告拒收的具體理由。2)補(bǔ)做培養(yǎng)瓶：血標(biāo)本采集后放置12h以上(手工法除外)，用不適當(dāng)類型的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，用過(guò)期的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，采血量不足等。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報(bào)告標(biāo)本不合格的具體理由，建議補(bǔ)做血培養(yǎng)。血培養(yǎng)操作流程四、結(jié)果報(bào)告1．陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告初級(jí)報(bào)告：陽(yáng)性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報(bào)告給醫(yī)生，包括：革蘭染色特性和形態(tài)，血培養(yǎng)陽(yáng)性的瓶數(shù)和其它的鑒定信息(如革蘭陽(yáng)性球菌疑似為葡萄球菌等)。報(bào)告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期標(biāo)本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來(lái)源。同時(shí)記錄報(bào)告的日期，時(shí)間，內(nèi)容以及接受報(bào)告人的姓名。中級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果和細(xì)菌種屬的初步鑒定結(jié)果最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬名和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果2．陰性報(bào)告：

普通血培養(yǎng)3天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)可（電話）報(bào)告為：“72h培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7/5天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，可發(fā)補(bǔ)充/最終報(bào)告。培養(yǎng)至所須時(shí)間仍為陰性，應(yīng)轉(zhuǎn)種巧克力平板/血平板。某些特殊致病菌培養(yǎng)時(shí)間需延長(zhǎng)血培養(yǎng)操作流程四、結(jié)果報(bào)告1．陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告初級(jí)報(bào)告：陽(yáng)性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報(bào)告給醫(yī)生，包括：革蘭染色特性和形態(tài)，血培養(yǎng)陽(yáng)性的瓶數(shù)和其它的鑒定信息(如革蘭陽(yáng)性球菌疑似為葡萄球菌等)。報(bào)告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期標(biāo)本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來(lái)源。同時(shí)記錄報(bào)告的日期，時(shí)間，內(nèi)容以及接受報(bào)告人的姓名。中級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果和細(xì)菌種屬的初步鑒定結(jié)果最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬名和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果2．陰性報(bào)告：

普通血培養(yǎng)3天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)可（電話）報(bào)告為：“72h培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7/5天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，可發(fā)補(bǔ)充/最終報(bào)告。培養(yǎng)至所須時(shí)間仍為陰性，應(yīng)轉(zhuǎn)種巧克力平板/血平板。某些特殊致病菌培養(yǎng)時(shí)間需延長(zhǎng)血培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識(shí)

(一)概述尿道感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。從腎臟排泌出來(lái)的尿液正常情況下是無(wú)菌的。如果在尿液中分離出細(xì)菌(排除污染因素)即稱為菌尿，同時(shí)伴有感染癥狀者稱為尿路感染。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合癥。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染(腎盂腎炎)及下尿路感染(膀胱炎)，男性還可出現(xiàn)前列腺炎。不同部位同時(shí)感染也很常見。

(二)易感人群尿路感染是最常見的感染之一，可發(fā)生于各個(gè)年齡段的人群，好發(fā)女性，男：女比為1：10。

(三)發(fā)病機(jī)理及常見致病菌

1、上行感染：腸道菌群逆行感染是泌尿系感染最常見的方式。女性尿道寬而短，且尿道口距肛門較近而常被糞便細(xì)菌污染，故更易感染；此外，女性陰道菌群也是尿路感染病原菌的又一個(gè)主要來(lái)源。這種方式引起的感染多為單一細(xì)菌感染，大腸埃希菌是主要致病菌，其次是克雷伯菌屬和變形桿菌屬(后兩者遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于前者)，有時(shí)也會(huì)發(fā)生混合感染。

2、泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染：如留置導(dǎo)尿管，腎盂造瘺術(shù)，尿路結(jié)石，尿路重建、前列腺肥大，膀胱排空能力受損等，不僅有利于微生物的粘附和侵入，使感染易發(fā)，而且改變了尿路感染的致病菌范圍，其感染菌除上述的大腸埃希菌、克雷伯菌屬和變形桿菌屬以外，其他革蘭陰性桿菌如腸桿菌屬，普羅威登菌屬、沙雷菌屬、不動(dòng)桿菌屬、假單胞菌屬也是常見的致病菌；此外，由血漿凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌和酵母菌等引起的感染也很常見；并且容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認(rèn)為標(biāo)本污染。

3、血行感染：是一種比較少見的感染方式。菌血癥病人，血液中的細(xì)菌可通過(guò)血流進(jìn)入腎臟，引起感染。常見的病原菌有葡萄球菌、傷寒沙門菌、念珠菌和結(jié)核分枝桿菌等。

4、直接感染：外傷或腎周圍器官發(fā)生感染時(shí)，細(xì)菌可直接侵入腎臟引起感染。尿培養(yǎng)操作流程尿培養(yǎng)檢查的臨床指征(有下列情況之一者，應(yīng)進(jìn)行尿培養(yǎng))

(1)有典型的尿路感染癥狀；

(2)肉眼膿尿或血尿；

(3)尿常規(guī)：白細(xì)胞和／或亞硝酸鹽陽(yáng)性；

(4)不明原因的發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；

(5)留置導(dǎo)尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱；

(6)膀胱排空功能受損；(7)泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。尿培養(yǎng)操作流程二、標(biāo)本采集和運(yùn)送

(一)容器：

l、由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成；

2、潔凈、無(wú)菌、加蓋、密封、防滲漏；

3、不含防腐劑和抑菌劑，一次性使用；

4、容積應(yīng)>50ml、開口—直徑應(yīng)>4cm、具有較寬的底部、盒蓋易于開啟。

(二)標(biāo)本采集方法注意盡量采集晨尿標(biāo)本，應(yīng)保證尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上。

1、清潔中段尿是最常用獲得尿培養(yǎng)標(biāo)本的方法(該方法很難使尿標(biāo)本做到不被污染，需對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià))。留取標(biāo)本前須向病人詳細(xì)說(shuō)明標(biāo)本留取的方法和注意事項(xiàng)：

(1)睡前少飲水，以免稀釋尿液

(2)女性病人用手分開大陰唇，男性病人翻上包皮，用肥皂將會(huì)陰部仔細(xì)清洗，然后以清水沖洗尿道口周圍。

(3)前段尿排去，將中段尿約10/20ml直接排入專用的無(wú)菌容器中。

2、恥骨上膀胱穿刺法嚴(yán)格按無(wú)菌操作，使用注射器直接從恥骨上經(jīng)皮穿入膀胱，吸取尿液。該方法是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

尿培養(yǎng)操作流程三、實(shí)驗(yàn)室檢查

(一)標(biāo)本的驗(yàn)收

1、工作人員應(yīng)首先檢查化驗(yàn)單所提供的信息，信息應(yīng)包括：標(biāo)本收集時(shí)間、標(biāo)本收集方式、病人是否已使用抗生素等。對(duì)信息不全者應(yīng)設(shè)法和臨床醫(yī)師取得聯(lián)系，在沒(méi)有獲得可靠信息之前，任何標(biāo)本都不能隨意丟棄。

2、根據(jù)標(biāo)本采集時(shí)間、所用容器確定標(biāo)本是否合格。

3、對(duì)不合格的標(biāo)本注明原因，退回，并做記錄。

(二)培養(yǎng)基選擇和標(biāo)本接種根據(jù)標(biāo)本來(lái)源及臨床診斷選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

1、一般培養(yǎng)：將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)或無(wú)菌微量加樣器取尿液0.00lml接種于血平板和麥康凱平板或中國(guó)蘭平板，35-37℃培養(yǎng)18～24h。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺、已使用抗生素治療的病人的標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)0.01ml接種量。

2、特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛氧菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶颖?，加種一塊巧克力平板，置5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。對(duì)臨床要求真菌、淋病奈瑟菌及結(jié)核桿菌培養(yǎng)者，可參照有關(guān)章節(jié)選擇接種相應(yīng)的特殊培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

3、經(jīng)18～24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng)者，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。尿培養(yǎng)操作流程(三)結(jié)果觀察和結(jié)果解釋

1、菌落計(jì)數(shù)：(1)采用0.001ml接種量者，將平板菌落數(shù)乘以103(CFU／m1)；(2)采用0.01m1接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102(CFU／m1)。

2、一般解釋標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)畏N細(xì)菌苗落數(shù)>105CFU／ml可能為感染；<104CFU／ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)估。3、不同來(lái)源標(biāo)本結(jié)果解釋(見表1)表l不同來(lái)源標(biāo)本結(jié)果解釋及實(shí)驗(yàn)室處理方法注：清潔中段尿和導(dǎo)尿的標(biāo)本有4種以上微生物生長(zhǎng)均報(bào)告標(biāo)本污染。需重新送檢。尿培養(yǎng)操作流程標(biāo)本來(lái)源菌落數(shù)CFU／m1結(jié)果解釋及實(shí)驗(yàn)室處理清潔中段尿<5×104無(wú)明確意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)，5-10×104純培養(yǎng)有意義，需進(jìn)行鑒定和藥敏；混合菌生長(zhǎng)無(wú)明確意義僅做革蘭染色鏡檢>105純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng)某一種菌落數(shù)≥105者有意義需進(jìn)行鑒定和藥敏，導(dǎo)尿>1033種菌以內(nèi)都有意義需進(jìn)行鑒定和藥敏，恥骨上膀胱穿刺任意數(shù)目所有細(xì)菌都有意義需做鑒定和藥敏，

(五)結(jié)果報(bào)告

l、初步報(bào)告：在分離出細(xì)菌后，根據(jù)其在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)結(jié)果，做革蘭染色，并做出初步報(bào)告。

2、最終報(bào)告：實(shí)驗(yàn)室結(jié)果報(bào)告應(yīng)準(zhǔn)確反映標(biāo)本的處理及細(xì)菌生長(zhǎng)情況，以使臨床醫(yī)師能根據(jù)具體情況做出合理判斷

(1)陰性結(jié)果報(bào)告：應(yīng)報(bào)告“接種0.001m1無(wú)菌生長(zhǎng)(<100CFU／m1)”，或“接種0.01m1無(wú)菌生長(zhǎng)(<1000CFU／m1)”。僅報(bào)告“無(wú)菌生長(zhǎng)”是不正確的。

(2)無(wú)明確意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告：報(bào)告菌落數(shù)、革蘭染色形態(tài)特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)。

(3)有意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告：報(bào)告菌落計(jì)數(shù)、細(xì)菌種名及藥敏結(jié)果。尿培養(yǎng)檢驗(yàn)中常見的錯(cuò)誤：以下是尿培養(yǎng)檢驗(yàn)中經(jīng)常容易出現(xiàn)的錯(cuò)誤。

1、將尿液標(biāo)本接種于增菌液中。

2、將尿液標(biāo)本離心后取沉渣進(jìn)行培養(yǎng)。

3、使用留取時(shí)間超過(guò)2小時(shí)，或冷藏時(shí)間超過(guò)8小時(shí)的標(biāo)本進(jìn)行接種。

4、直接用導(dǎo)尿管頭劃線培養(yǎng)。

5、用中段尿做厭氧菌培養(yǎng)尿培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識(shí)臨床通常將正常人喉以上部位稱之為上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而氣管以下包括氣管、支氣管和肺泡稱下呼吸道，通常無(wú)菌。下呼吸道感染包括急性氣管-支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、支氣管擴(kuò)張繼發(fā)感染及肺實(shí)質(zhì)感染(肺炎、肺膿腫)等。病原體有細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體、真菌、立克次體和原蟲等。社區(qū)獲得性肺炎常見的病原菌有肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、卡他莫拉菌、肺炎克雷伯菌、軍團(tuán)菌、肺炎支原體，肺炎衣原體等。醫(yī)院獲得性肺炎常見的病原菌有銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌、克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌、念球菌等。

臨床呼吸道標(biāo)本中常見分離細(xì)菌見表下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)操作流程革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌韋榮球菌表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、其他葡萄球菌

腦膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌微球菌、消化鏈球菌、消化球菌、

卡他莫拉菌腸球菌

肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌真桿菌、丙酸桿菌、乳酸桿菌

沙雷菌、變形桿菌放線菌、奴卡菌、結(jié)核分枝桿菌

大腸埃希菌及其它腸桿菌科細(xì)菌白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌

百日咳鮑特菌、不動(dòng)桿菌念珠菌

銅綠假單胞菌及其他假單胞菌屬細(xì)菌、

嗜肺軍團(tuán)菌、氣單胞菌

流感嗜血桿菌、副流感嗜血桿菌

擬桿菌、梭桿菌二、標(biāo)本采集

(一)采集方法1．自然咳痰法以晨痰為佳，采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開水漱口或牙刷清潔口腔和牙齒，有假牙者應(yīng)取下假牙。盡可能在用抗菌藥物之前采集標(biāo)本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無(wú)菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標(biāo)本量應(yīng)≥lml?？忍道щy者可用霧化吸入加溫至45℃的100g／LNaCl水溶液，使痰液易于排出。標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存≤2h。2．支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫(yī)生按相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意采集標(biāo)本時(shí)盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。3．小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)操作流程

(二)標(biāo)本驗(yàn)收 遇有不合格標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系，報(bào)告不合格標(biāo)本拒收的具體理由。下呼吸道標(biāo)本驗(yàn)收與拒收見表2。表2下呼吸道細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)標(biāo)本驗(yàn)收與拒收下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)操作流程厭氧菌培養(yǎng)呼吸道定植有大量的正常菌群，咽試子、咳痰、吸出的分泌物厭氧菌培養(yǎng)無(wú)意義。標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤申請(qǐng)單必須填寫應(yīng)完整。標(biāo)本標(biāo)識(shí)必須唯一，并與申請(qǐng)單相符，未標(biāo)明采集時(shí)間、部位或檢驗(yàn)要求等拒收。肉眼觀察痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣，拒收。標(biāo)本涂片細(xì)胞學(xué)檢查白細(xì)胞數(shù)<10／低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)>25/低倍鏡，提示該標(biāo)本已污染正常菌群，建議重送標(biāo)本。容器不符合規(guī)定標(biāo)本容器必須符合規(guī)定，溢漏、無(wú)蓋者拒收。運(yùn)送不符合規(guī)定標(biāo)本采集后送檢時(shí)間超過(guò)2h拒收。雙份標(biāo)本同時(shí)同部位或同一天兩份相同檢測(cè)的標(biāo)本(應(yīng)與申請(qǐng)醫(yī)師協(xié)商處理)。三、實(shí)驗(yàn)室檢查(一)肉眼觀察觀察痰液的顏色、粘度、有無(wú)血絲和是否呈膿性，如見有顆粒存在，則應(yīng)注意可能與放線菌屬及奴卡菌屬感染有關(guān)。(二)顯微鏡檢查下呼吸道細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)本均需涂片進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)顯微鏡檢查，其目的是判別送檢標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，并初步判定有否病原菌、病原菌的數(shù)量及其類別，有助于初步報(bào)告、選擇培養(yǎng)基(如真菌)和對(duì)培養(yǎng)結(jié)果的綜合分析。合格的標(biāo)準(zhǔn)見表3。

痰涂片顯微鏡細(xì)胞學(xué)檢查判別標(biāo)本合格的標(biāo)準(zhǔn)

近年來(lái)推薦簡(jiǎn)單的方法是痰標(biāo)本涂片鏡檢>10個(gè)白細(xì)胞／低倍鏡時(shí)，就可判斷是合格并可用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本，尤其是白細(xì)胞減少的患者一。2．細(xì)菌涂片染色檢查挑取痰液中膿性或帶血部份涂成均勻薄片，革蘭染色后鏡檢，油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)，排列和染色性，可初步推定菌屬(或種)，涂片中所見細(xì)菌的量及吞噬細(xì)胞內(nèi)是否有細(xì)菌等。如發(fā)現(xiàn)酵母樣菌或菌絲或孢子，應(yīng)做出相應(yīng)報(bào)告和真菌學(xué)檢查。下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)操作流程四、分離培養(yǎng)1．痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理不含或含粘液很少的標(biāo)本，可直接接種，遇有含大量粘液的標(biāo)本，應(yīng)加入等量的液化劑(如pH7.6的10g/L胰酶溶液等)，放置35℃待充分液化再行接種。亦可加液化劑后用旋轉(zhuǎn)混勻器攪拌混勻，3000r／rain離心l0min，棄上清液，取沉淀物接種培養(yǎng)基。

2．一般細(xì)菌培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基選擇

1)血平板適用于分離肺炎鏈球菌和其他細(xì)菌。

2)加抗生素的巧克力平板適用于分離嗜血桿菌。

3)麥康凱／中國(guó)蘭平板適用于分離革蘭陰性桿菌。

(2)分離培養(yǎng)將處理后痰標(biāo)本分別劃區(qū)接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板／中國(guó)蘭平板，35℃孵育，血平板和巧克力平板需置5％CO2環(huán)境，(3)結(jié)果分析痰及下呼吸道分泌物標(biāo)本易受到定植在上呼吸道的正常菌群污染，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)時(shí)通常可從送檢的標(biāo)本中分離出多種細(xì)菌，確定哪一種分離細(xì)菌是引起下呼吸道感染的病原菌，這對(duì)臨床診斷與治療感染性疾病至關(guān)重要。在實(shí)際工作中，有時(shí)也由于細(xì)菌生長(zhǎng)速度不一，如肺炎鏈球菌可能被生長(zhǎng)速度快的細(xì)菌(包括正常菌群)菌落掩蓋，不仔細(xì)觀察就會(huì)忽略檢驗(yàn)。當(dāng)在同一培養(yǎng)基上分離出1種以上的病原菌（復(fù)合菌）時(shí)，應(yīng)主動(dòng)與臨床醫(yī)師聯(lián)系，結(jié)合患者的臨床癥狀、痰涂片染色顯微鏡鏡檢及近期細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果(如近期同一病人多次分離培養(yǎng)出同一種菌)等綜合判斷所分離的多種細(xì)菌中哪一種菌可能為致病菌，通常為優(yōu)勢(shì)菌，即分離培養(yǎng)的某一種細(xì)菌的相似菌落計(jì)數(shù)為多數(shù)或純菌落。當(dāng)分離優(yōu)勢(shì)菌與涂片染色顯微鏡鏡檢結(jié)果相符時(shí)，優(yōu)勢(shì)菌必需進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。若分離培養(yǎng)結(jié)果與涂片染色顯微鏡鏡檢結(jié)果不相符時(shí)，可不進(jìn)行藥敏試驗(yàn)(以免誤導(dǎo))，僅報(bào)告分離細(xì)菌鑒定結(jié)果。下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識(shí)急性感染性腹瀉可以由細(xì)菌、病毒及原蟲引起，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查是細(xì)菌培養(yǎng)。每種感染性腹瀉的致病菌因其獨(dú)特的致病機(jī)理而引起一系列不同的典型癥狀，這些癥狀和詳細(xì)的病史能為診斷腹瀉疾病類型提供依據(jù)。因此，為了查找腹瀉病因，必須了解患者的病史：癥狀、發(fā)病時(shí)間、年齡、旅游史、進(jìn)食情況和使用抗生素情況。沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌和鄰單胞菌應(yīng)作為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)的主要腹瀉病原菌。培養(yǎng)病原菌的種類也應(yīng)結(jié)合地域情況來(lái)確定，如沿海地區(qū)可以增加弧菌常規(guī)培養(yǎng)。秋冬季，兒童(2歲以內(nèi))腹瀉多以病毒性腸炎為主，應(yīng)在腹瀉病毒篩選陰性之后，再考慮做細(xì)菌培養(yǎng)。氣單胞菌引起的水樣腹瀉與飲用不潔水有關(guān)。如果病人病史或臨床癥狀提示水源性感染則考慮氣單胞菌。鄰單胞菌是引起胃腸炎的最可疑病原菌，其感染與飲用不潔水、吃生海鮮尤其是生蠔(牡蠣)或異地旅游尤其是到美國(guó)中部或亞洲南部旅游有關(guān)。住院3天以上發(fā)生腹瀉的患者進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)意義不大，可以進(jìn)行艱難梭菌的培養(yǎng)和毒素檢測(cè)。糞便培養(yǎng)操作流程二、標(biāo)本采集與運(yùn)送：

1．送檢指征當(dāng)腹瀉患者出現(xiàn)以下任何一種情況時(shí)建議采集糞便標(biāo)本，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)：(1)糞便涂片鏡檢白細(xì)胞>5／HP；(2)重癥腹瀉；(3)體溫大于38.5℃；(4)血便；(5)便中有膿液；(6)未經(jīng)抗菌藥物治療的持續(xù)性腹瀉患者；(7)來(lái)自疫區(qū)的患者。

2．標(biāo)本采集

(1)標(biāo)本采集盡可能在發(fā)病早期和使用抗菌藥物治療之前。在不同的時(shí)間采集2～3個(gè)標(biāo)本可以提高致病菌的分離率。

(2)自然排便采集糞便標(biāo)本時(shí)，取有膿血、粘液、組織碎片部分的糞便1～3g。液體糞便則取絮狀物，一般取l～3ml，直接裝入糞便容器或保存液或運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢。

(3)直腸拭子采集糞便標(biāo)本，適于排便困難患者或嬰幼兒?？捎梅试硭畬⒏亻T周圍洗凈，用無(wú)菌鹽水、保存液或增菌液濕潤(rùn)的棉拭子插入肛門，成人約4～5cm，兒童約2～3cm，與直腸粘膜表面接觸，輕輕旋轉(zhuǎn)，必須將拭子置于適當(dāng)?shù)倪\(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。

(4)容器應(yīng)是清潔、帶蓋、廣口的(不宜使用紙盒)、送檢的標(biāo)本中不能加入防腐劑。

3．標(biāo)本運(yùn)送

(1)糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，室溫條件下不能超過(guò)2h。糞便培養(yǎng)操作流程三、細(xì)菌培養(yǎng)及培養(yǎng)基的選擇

1．腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng)腹瀉病原菌種類繁多，實(shí)驗(yàn)室不可能對(duì)所有可能引起腹瀉的病原菌都進(jìn)行培養(yǎng)。為保證獲得較高的檢出率，可以對(duì)患者進(jìn)行腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng)，包括沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌，也包括可引起菌群失調(diào)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和酵母菌。糞便標(biāo)本至少應(yīng)接種SS、EMB(或MAC或中國(guó)蘭)等培養(yǎng)基，必要時(shí)加血平皿(表2)。例如，血平皿+SS+MAC用于糞便常規(guī)培養(yǎng)。

EMB:伊紅美藍(lán)平板MAC：麥康凱平板

糞便細(xì)菌常規(guī)培養(yǎng)方法糞便培養(yǎng)操作流程病原菌種類培養(yǎng)基選擇及培養(yǎng)方法沙門氏菌SS、EMB，置35℃培養(yǎng)18～24h志賀氏菌XLD、EMB，置35℃培養(yǎng)18～24h氣單胞菌血平皿和MAC，置35℃培養(yǎng)18～24h鄰單胞菌血平皿和MAC，置35℃培養(yǎng)18～24h弧菌血平皿和TCBS，置35℃培養(yǎng)18～24h銅綠假單胞菌血平皿，置35℃培養(yǎng)18～24h金黃色葡萄球菌血于皿和高鹽甘露醇培養(yǎng)基或高鹽卵黃瓊脂平皿，置35C培養(yǎng)18～24h四、結(jié)果報(bào)告陽(yáng)性：報(bào)告細(xì)菌種名(血清型)和藥敏結(jié)果。陰性：(1)常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陰性應(yīng)報(bào)告“未檢出沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌。未檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及酵母菌過(guò)度生長(zhǎng)?！?2)特殊細(xì)菌培養(yǎng)陰性時(shí)應(yīng)報(bào)告相應(yīng)細(xì)菌的陰性篩選結(jié)果，如“彎曲菌培養(yǎng)陰性”。當(dāng)檢查水樣便，發(fā)現(xiàn)動(dòng)力及制動(dòng)試驗(yàn)均為陽(yáng)性或分離菌對(duì)01群或0139抗血清凝集實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性時(shí)均應(yīng)立即與主管醫(yī)生聯(lián)系并上報(bào)衛(wèi)生防疫部門。當(dāng)培養(yǎng)出沙門氏菌、志賀氏菌少見血清型時(shí)應(yīng)向衛(wèi)生防疫部門申請(qǐng)鑒定。糞便培養(yǎng)操作流程二、標(biāo)本采集與運(yùn)