各類臨床微生物標本規(guī)范操作流程

各類臨床微生物標本規(guī)范操作流程目錄血培養(yǎng)操作流程尿培養(yǎng)操作流程痰培養(yǎng)操作流程糞便培養(yǎng)操作流程皮膚膿腫，抽吸液等培養(yǎng)操作流程當微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時形成菌血癥或真菌血癥血培養(yǎng)常見菌：革蘭陰性菌主要包括大腸桿菌，肺炎克雷伯菌，陰溝腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，傷寒沙門菌，綠膿桿菌，鮑曼不動桿菌等；革蘭陽性菌主要包括金黃色葡萄球菌，凝固酶陰性葡萄球菌，念珠菌屬等。菌血癥是臨床醫(yī)學急癥，引起菌血癥的細菌通常是多重耐藥菌，盡快采集血液進行培養(yǎng)(血培養(yǎng))和準確的抗生素敏感試驗報告對危重患者感染的診斷，治療和預后有重要的臨床意義，血培養(yǎng)是把靜脈穿刺獲得的血液接種到一個或多個培養(yǎng)瓶中，用來發(fā)現(xiàn)、識別細菌或其它可培養(yǎng)分離的微生物。血培養(yǎng)操作流程臨床知識當微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時形成菌血癥或真菌血癥血培養(yǎng)常見菌：革蘭陰性菌主要包括大腸桿菌，肺炎克雷伯菌，陰溝腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，傷寒沙門菌，綠膿桿菌，鮑曼不動桿菌等；革蘭陽性菌主要包括金黃色葡萄球菌，凝固酶陰性葡萄球菌，念珠菌屬等。菌血癥是臨床醫(yī)學急癥，引起菌血癥的細菌通常是多重耐藥菌，盡快采集血液進行培養(yǎng)(血培養(yǎng))和準確的抗生素敏感試驗報告對危重患者感染的診斷，治療和預后有重要的臨床意義，血培養(yǎng)是把靜脈穿刺獲得的血液接種到一個或多個培養(yǎng)瓶中，用來發(fā)現(xiàn)、識別細菌或其它可培養(yǎng)分離的微生物。血培養(yǎng)操作流程臨床知識二、血標本采集和運送1．采血指征：一般患者出現(xiàn)以下一種體癥時可作為采血的重要指征：發(fā)熱(≥38℃)或低溫(≤36℃)，寒戰(zhàn)，白細胞增多(計數(shù)大1×109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細胞)，皮膚粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低，CRP升高及呼吸快，特殊患者(如血液病)出現(xiàn)粒細胞減少(成熟的多形核白細胞<1000×109/L)，血小板減少等，或同時具備上述幾種體癥的臨床可疑菌血癥應采集血培養(yǎng)。新生兒菌血癥，應該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。對入院危重感染患者在未進行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應及時采集血培養(yǎng)。2．皮膚消毒程序：嚴格執(zhí)行以下三步法：1）70％酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上。2)1％～2％碘酊作用30s或10％碘伏60s，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達3cm以上。3)70％酒精脫碘。3．培養(yǎng)瓶消毒程序1)70％酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s。血培養(yǎng)操作流程4．靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序1)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養(yǎng)瓶，2)血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。5．采血量

成人采血量是8～l0ml，兒童l～5ml。血液和肉湯之比為1：5～l：10。6．血培養(yǎng)份數(shù)和采血時間

采血培養(yǎng)應該盡量在使用抗菌藥之前進行，在24h內(nèi)采集2～3份血培養(yǎng)(一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應視為單份血培養(yǎng))。對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5～1h采血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后lh進行。特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議：1)可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎，應在不同部位采集2～3份血標本。2)不明原因發(fā)熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱，先采集2～3份血標本，24～36h后估計體溫升高之前(通常在下午)再采集2份以上。3)可疑細菌性心內(nèi)膜炎，在l～2h內(nèi)采集3份血標本，如果24h后陰性，再采集3份以上的血標本。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)三天，每天采集2份。選用可中和或吸附抗菌藥物的培養(yǎng)基。7．標本運送

采血后應該立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置35℃～37℃孵箱中，切勿冷藏。血培養(yǎng)操作流程三、標本驗收

1．血培養(yǎng)瓶驗收

1)檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染。

2)檢查瓶子上的標簽與申請單是否相符。

3)檢查血液標本是否適量，并在申請單上注明采血量。

4)對于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長可視信號：培養(yǎng)瓶內(nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等。如發(fā)現(xiàn)可視信號提示有微生物生長，應該立即直接涂片鏡檢和劃線轉(zhuǎn)種。

2．不合格血培養(yǎng)標本的處理1)拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標識與化驗申請單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告拒收的具體理由。2)補做培養(yǎng)瓶：血標本采集后放置12h以上(手工法除外)，用不適當類型的培養(yǎng)瓶收集標本，用過期的培養(yǎng)瓶收集標本，采血量不足等。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告標本不合格的具體理由，建議補做血培養(yǎng)。血培養(yǎng)操作流程四、結(jié)果報告1．陽性結(jié)果報告初級報告：陽性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應該立即口頭報告給醫(yī)生，包括：革蘭染色特性和形態(tài)，血培養(yǎng)陽性的瓶數(shù)和其它的鑒定信息(如革蘭陽性球菌疑似為葡萄球菌等)。報告之前，應該回顧一下患者近期標本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來源。同時記錄報告的日期，時間，內(nèi)容以及接受報告人的姓名。中級報告：報告直接抗菌藥物敏感試驗結(jié)果和細菌種屬的初步鑒定結(jié)果最終報告：報告細菌種屬名和標準抗菌藥物敏感試驗結(jié)果2．陰性報告：

普通血培養(yǎng)3天無細菌生長可（電話）報告為：“72h培養(yǎng)未見細菌生長”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7/5天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長，可發(fā)補充/最終報告。培養(yǎng)至所須時間仍為陰性，應轉(zhuǎn)種巧克力平板/血平板。某些特殊致病菌培養(yǎng)時間需延長血培養(yǎng)操作流程四、結(jié)果報告1．陽性結(jié)果報告初級報告：陽性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應該立即口頭報告給醫(yī)生，包括：革蘭染色特性和形態(tài)，血培養(yǎng)陽性的瓶數(shù)和其它的鑒定信息(如革蘭陽性球菌疑似為葡萄球菌等)。報告之前，應該回顧一下患者近期標本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來源。同時記錄報告的日期，時間，內(nèi)容以及接受報告人的姓名。中級報告：報告直接抗菌藥物敏感試驗結(jié)果和細菌種屬的初步鑒定結(jié)果最終報告：報告細菌種屬名和標準抗菌藥物敏感試驗結(jié)果2．陰性報告：

普通血培養(yǎng)3天無細菌生長可（電話）報告為：“72h培養(yǎng)未見細菌生長”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7/5天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長，可發(fā)補充/最終報告。培養(yǎng)至所須時間仍為陰性，應轉(zhuǎn)種巧克力平板/血平板。某些特殊致病菌培養(yǎng)時間需延長血培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識

(一)概述尿道感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。從腎臟排泌出來的尿液正常情況下是無菌的。如果在尿液中分離出細菌(排除污染因素)即稱為菌尿，同時伴有感染癥狀者稱為尿路感染。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合癥。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染(腎盂腎炎)及下尿路感染(膀胱炎)，男性還可出現(xiàn)前列腺炎。不同部位同時感染也很常見。

(二)易感人群尿路感染是最常見的感染之一，可發(fā)生于各個年齡段的人群，好發(fā)女性，男：女比為1：10。

(三)發(fā)病機理及常見致病菌

1、上行感染：腸道菌群逆行感染是泌尿系感染最常見的方式。女性尿道寬而短，且尿道口距肛門較近而常被糞便細菌污染，故更易感染；此外，女性陰道菌群也是尿路感染病原菌的又一個主要來源。這種方式引起的感染多為單一細菌感染，大腸埃希菌是主要致病菌，其次是克雷伯菌屬和變形桿菌屬(后兩者遠遠少于前者)，有時也會發(fā)生混合感染。

2、泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染：如留置導尿管，腎盂造瘺術(shù)，尿路結(jié)石，尿路重建、前列腺肥大，膀胱排空能力受損等，不僅有利于微生物的粘附和侵入，使感染易發(fā)，而且改變了尿路感染的致病菌范圍，其感染菌除上述的大腸埃希菌、克雷伯菌屬和變形桿菌屬以外，其他革蘭陰性桿菌如腸桿菌屬，普羅威登菌屬、沙雷菌屬、不動桿菌屬、假單胞菌屬也是常見的致病菌；此外，由血漿凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌和酵母菌等引起的感染也很常見；并且容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認為標本污染。

3、血行感染：是一種比較少見的感染方式。菌血癥病人，血液中的細菌可通過血流進入腎臟，引起感染。常見的病原菌有葡萄球菌、傷寒沙門菌、念珠菌和結(jié)核分枝桿菌等。

4、直接感染：外傷或腎周圍器官發(fā)生感染時，細菌可直接侵入腎臟引起感染。尿培養(yǎng)操作流程尿培養(yǎng)檢查的臨床指征(有下列情況之一者，應進行尿培養(yǎng))

(1)有典型的尿路感染癥狀；

(2)肉眼膿尿或血尿；

(3)尿常規(guī)：白細胞和／或亞硝酸鹽陽性；

(4)不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀；

(5)留置導尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱；

(6)膀胱排空功能受損；(7)泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。尿培養(yǎng)操作流程二、標本采集和運送

(一)容器：

l、由不與尿液成份發(fā)生反應的惰性材料制成；

2、潔凈、無菌、加蓋、密封、防滲漏；

3、不含防腐劑和抑菌劑，一次性使用；

4、容積應>50ml、開口—直徑應>4cm、具有較寬的底部、盒蓋易于開啟。

(二)標本采集方法注意盡量采集晨尿標本，應保證尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上。

1、清潔中段尿是最常用獲得尿培養(yǎng)標本的方法(該方法很難使尿標本做到不被污染，需對結(jié)果進行評價)。留取標本前須向病人詳細說明標本留取的方法和注意事項：

(1)睡前少飲水，以免稀釋尿液

(2)女性病人用手分開大陰唇，男性病人翻上包皮，用肥皂將會陰部仔細清洗，然后以清水沖洗尿道口周圍。

(3)前段尿排去，將中段尿約10/20ml直接排入專用的無菌容器中。

2、恥骨上膀胱穿刺法嚴格按無菌操作，使用注射器直接從恥骨上經(jīng)皮穿入膀胱，吸取尿液。該方法是評估膀胱內(nèi)細菌感染的“金標準”。

尿培養(yǎng)操作流程三、實驗室檢查

(一)標本的驗收

1、工作人員應首先檢查化驗單所提供的信息，信息應包括：標本收集時間、標本收集方式、病人是否已使用抗生素等。對信息不全者應設(shè)法和臨床醫(yī)師取得聯(lián)系，在沒有獲得可靠信息之前，任何標本都不能隨意丟棄。

2、根據(jù)標本采集時間、所用容器確定標本是否合格。

3、對不合格的標本注明原因，退回，并做記錄。

(二)培養(yǎng)基選擇和標本接種根據(jù)標本來源及臨床診斷選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

1、一般培養(yǎng)：將收集標本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)或無菌微量加樣器取尿液0.00lml接種于血平板和麥康凱平板或中國蘭平板，35-37℃培養(yǎng)18～24h。對導尿、恥骨上膀胱穿刺、已使用抗生素治療的病人的標本應增加一個0.01ml接種量。

2、特殊培養(yǎng)：對懷疑有苛氧菌感染者應采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶颖?，加種一塊巧克力平板，置5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。對臨床要求真菌、淋病奈瑟菌及結(jié)核桿菌培養(yǎng)者，可參照有關(guān)章節(jié)選擇接種相應的特殊培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

3、經(jīng)18～24h培養(yǎng)無菌生長者，應將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。尿培養(yǎng)操作流程(三)結(jié)果觀察和結(jié)果解釋

1、菌落計數(shù)：(1)采用0.001ml接種量者，將平板菌落數(shù)乘以103(CFU／m1)；(2)采用0.01m1接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102(CFU／m1)。

2、一般解釋標準：單種細菌苗落數(shù)>105CFU／ml可能為感染；<104CFU／ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)進行評估。3、不同來源標本結(jié)果解釋(見表1)表l不同來源標本結(jié)果解釋及實驗室處理方法注：清潔中段尿和導尿的標本有4種以上微生物生長均報告標本污染。需重新送檢。尿培養(yǎng)操作流程標本來源菌落數(shù)CFU／m1結(jié)果解釋及實驗室處理清潔中段尿<5×104無明確意義，僅報告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長，5-10×104純培養(yǎng)有意義，需進行鑒定和藥敏；混合菌生長無明確意義僅做革蘭染色鏡檢>105純培養(yǎng)或混合菌生長某一種菌落數(shù)≥105者有意義需進行鑒定和藥敏，導尿>1033種菌以內(nèi)都有意義需進行鑒定和藥敏，恥骨上膀胱穿刺任意數(shù)目所有細菌都有意義需做鑒定和藥敏，

(五)結(jié)果報告

l、初步報告：在分離出細菌后，根據(jù)其在培養(yǎng)基中的生長結(jié)果，做革蘭染色，并做出初步報告。

2、最終報告：實驗室結(jié)果報告應準確反映標本的處理及細菌生長情況，以使臨床醫(yī)師能根據(jù)具體情況做出合理判斷

(1)陰性結(jié)果報告：應報告“接種0.001m1無菌生長(<100CFU／m1)”，或“接種0.01m1無菌生長(<1000CFU／m1)”。僅報告“無菌生長”是不正確的。

(2)無明確意義的陽性結(jié)果報告：報告菌落數(shù)、革蘭染色形態(tài)特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長。

(3)有意義的陽性結(jié)果報告：報告菌落計數(shù)、細菌種名及藥敏結(jié)果。尿培養(yǎng)檢驗中常見的錯誤：以下是尿培養(yǎng)檢驗中經(jīng)常容易出現(xiàn)的錯誤。

1、將尿液標本接種于增菌液中。

2、將尿液標本離心后取沉渣進行培養(yǎng)。

3、使用留取時間超過2小時，或冷藏時間超過8小時的標本進行接種。

4、直接用導尿管頭劃線培養(yǎng)。

5、用中段尿做厭氧菌培養(yǎng)尿培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識臨床通常將正常人喉以上部位稱之為上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而氣管以下包括氣管、支氣管和肺泡稱下呼吸道，通常無菌。下呼吸道感染包括急性氣管-支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、支氣管擴張繼發(fā)感染及肺實質(zhì)感染(肺炎、肺膿腫)等。病原體有細菌、病毒、衣原體、支原體、真菌、立克次體和原蟲等。社區(qū)獲得性肺炎常見的病原菌有肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、卡他莫拉菌、肺炎克雷伯菌、軍團菌、肺炎支原體，肺炎衣原體等。醫(yī)院獲得性肺炎常見的病原菌有銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌、克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌、念球菌等。

臨床呼吸道標本中常見分離細菌見表下呼吸道標本培養(yǎng)操作流程革蘭陽性菌革蘭陰性菌草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌韋榮球菌表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、其他葡萄球菌

腦膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌微球菌、消化鏈球菌、消化球菌、

卡他莫拉菌腸球菌

肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌真桿菌、丙酸桿菌、乳酸桿菌

沙雷菌、變形桿菌放線菌、奴卡菌、結(jié)核分枝桿菌

大腸埃希菌及其它腸桿菌科細菌白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌

百日咳鮑特菌、不動桿菌念珠菌

銅綠假單胞菌及其他假單胞菌屬細菌、

嗜肺軍團菌、氣單胞菌

流感嗜血桿菌、副流感嗜血桿菌

擬桿菌、梭桿菌二、標本采集

(一)采集方法1．自然咳痰法以晨痰為佳，采集標本前應用清水、冷開水漱口或牙刷清潔口腔和牙齒，有假牙者應取下假牙。盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標本量應≥lml?？忍道щy者可用霧化吸入加溫至45℃的100g／LNaCl水溶液，使痰液易于排出。標本應盡快送檢，不能及時送檢的標本，室溫保存≤2h。2．支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫(yī)生按相應操作規(guī)程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。3．小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。下呼吸道標本培養(yǎng)操作流程

(二)標本驗收 遇有不合格標本，應及時與臨床聯(lián)系，報告不合格標本拒收的具體理由。下呼吸道標本驗收與拒收見表2。表2下呼吸道細菌學培養(yǎng)標本驗收與拒收下呼吸道標本培養(yǎng)操作流程厭氧菌培養(yǎng)呼吸道定植有大量的正常菌群，咽試子、咳痰、吸出的分泌物厭氧菌培養(yǎng)無意義。標識錯誤申請單必須填寫應完整。標本標識必須唯一，并與申請單相符，未標明采集時間、部位或檢驗要求等拒收。肉眼觀察痰標本呈水樣或唾液樣，拒收。標本涂片細胞學檢查白細胞數(shù)<10／低倍鏡和鱗狀上皮細胞數(shù)>25/低倍鏡，提示該標本已污染正常菌群，建議重送標本。容器不符合規(guī)定標本容器必須符合規(guī)定，溢漏、無蓋者拒收。運送不符合規(guī)定標本采集后送檢時間超過2h拒收。雙份標本同時同部位或同一天兩份相同檢測的標本(應與申請醫(yī)師協(xié)商處理)。三、實驗室檢查(一)肉眼觀察觀察痰液的顏色、粘度、有無血絲和是否呈膿性，如見有顆粒存在，則應注意可能與放線菌屬及奴卡菌屬感染有關(guān)。(二)顯微鏡檢查下呼吸道細菌學檢驗的標本均需涂片進行細胞學和細菌學顯微鏡檢查，其目的是判別送檢標本是否適合做細菌培養(yǎng)，并初步判定有否病原菌、病原菌的數(shù)量及其類別，有助于初步報告、選擇培養(yǎng)基(如真菌)和對培養(yǎng)結(jié)果的綜合分析。合格的標準見表3。

痰涂片顯微鏡細胞學檢查判別標本合格的標準

近年來推薦簡單的方法是痰標本涂片鏡檢>10個白細胞／低倍鏡時，就可判斷是合格并可用于細菌培養(yǎng)的標本，尤其是白細胞減少的患者一。2．細菌涂片染色檢查挑取痰液中膿性或帶血部份涂成均勻薄片，革蘭染色后鏡檢，油鏡下觀察細菌形態(tài)，排列和染色性，可初步推定菌屬(或種)，涂片中所見細菌的量及吞噬細胞內(nèi)是否有細菌等。如發(fā)現(xiàn)酵母樣菌或菌絲或孢子，應做出相應報告和真菌學檢查。下呼吸道標本培養(yǎng)操作流程四、分離培養(yǎng)1．痰標本培養(yǎng)前處理不含或含粘液很少的標本，可直接接種，遇有含大量粘液的標本，應加入等量的液化劑(如pH7.6的10g/L胰酶溶液等)，放置35℃待充分液化再行接種。亦可加液化劑后用旋轉(zhuǎn)混勻器攪拌混勻，3000r／rain離心l0min，棄上清液，取沉淀物接種培養(yǎng)基。

2．一般細菌培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基選擇

1)血平板適用于分離肺炎鏈球菌和其他細菌。

2)加抗生素的巧克力平板適用于分離嗜血桿菌。

3)麥康凱／中國蘭平板適用于分離革蘭陰性桿菌。

(2)分離培養(yǎng)將處理后痰標本分別劃區(qū)接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板／中國蘭平板，35℃孵育，血平板和巧克力平板需置5％CO2環(huán)境，(3)結(jié)果分析痰及下呼吸道分泌物標本易受到定植在上呼吸道的正常菌群污染，進行細菌學檢驗時通?？蓮乃蜋z的標本中分離出多種細菌，確定哪一種分離細菌是引起下呼吸道感染的病原菌，這對臨床診斷與治療感染性疾病至關(guān)重要。在實際工作中，有時也由于細菌生長速度不一，如肺炎鏈球菌可能被生長速度快的細菌(包括正常菌群)菌落掩蓋，不仔細觀察就會忽略檢驗。當在同一培養(yǎng)基上分離出1種以上的病原菌（復合菌）時，應主動與臨床醫(yī)師聯(lián)系，結(jié)合患者的臨床癥狀、痰涂片染色顯微鏡鏡檢及近期細菌培養(yǎng)結(jié)果(如近期同一病人多次分離培養(yǎng)出同一種菌)等綜合判斷所分離的多種細菌中哪一種菌可能為致病菌，通常為優(yōu)勢菌，即分離培養(yǎng)的某一種細菌的相似菌落計數(shù)為多數(shù)或純菌落。當分離優(yōu)勢菌與涂片染色顯微鏡鏡檢結(jié)果相符時，優(yōu)勢菌必需進行藥敏試驗。若分離培養(yǎng)結(jié)果與涂片染色顯微鏡鏡檢結(jié)果不相符時，可不進行藥敏試驗(以免誤導)，僅報告分離細菌鑒定結(jié)果。下呼吸道標本培養(yǎng)操作流程一、相關(guān)臨床知識急性感染性腹瀉可以由細菌、病毒及原蟲引起，實驗室常規(guī)檢查是細菌培養(yǎng)。每種感染性腹瀉的致病菌因其獨特的致病機理而引起一系列不同的典型癥狀，這些癥狀和詳細的病史能為診斷腹瀉疾病類型提供依據(jù)。因此，為了查找腹瀉病因，必須了解患者的病史：癥狀、發(fā)病時間、年齡、旅游史、進食情況和使用抗生素情況。沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌和鄰單胞菌應作為實驗室常規(guī)培養(yǎng)的主要腹瀉病原菌。培養(yǎng)病原菌的種類也應結(jié)合地域情況來確定，如沿海地區(qū)可以增加弧菌常規(guī)培養(yǎng)。秋冬季，兒童(2歲以內(nèi))腹瀉多以病毒性腸炎為主，應在腹瀉病毒篩選陰性之后，再考慮做細菌培養(yǎng)。氣單胞菌引起的水樣腹瀉與飲用不潔水有關(guān)。如果病人病史或臨床癥狀提示水源性感染則考慮氣單胞菌。鄰單胞菌是引起胃腸炎的最可疑病原菌，其感染與飲用不潔水、吃生海鮮尤其是生蠔(牡蠣)或異地旅游尤其是到美國中部或亞洲南部旅游有關(guān)。住院3天以上發(fā)生腹瀉的患者進行常規(guī)培養(yǎng)意義不大，可以進行艱難梭菌的培養(yǎng)和毒素檢測。糞便培養(yǎng)操作流程二、標本采集與運送：

1．送檢指征當腹瀉患者出現(xiàn)以下任何一種情況時建議采集糞便標本，進行細菌培養(yǎng)：(1)糞便涂片鏡檢白細胞>5／HP；(2)重癥腹瀉；(3)體溫大于38.5℃；(4)血便；(5)便中有膿液；(6)未經(jīng)抗菌藥物治療的持續(xù)性腹瀉患者；(7)來自疫區(qū)的患者。

2．標本采集

(1)標本采集盡可能在發(fā)病早期和使用抗菌藥物治療之前。在不同的時間采集2～3個標本可以提高致病菌的分離率。

(2)自然排便采集糞便標本時，取有膿血、粘液、組織碎片部分的糞便1～3g。液體糞便則取絮狀物，一般取l～3ml，直接裝入糞便容器或保存液或運送培養(yǎng)基中送檢。

(3)直腸拭子采集糞便標本，適于排便困難患者或嬰幼兒?？捎梅试硭畬⒏亻T周圍洗凈，用無菌鹽水、保存液或增菌液濕潤的棉拭子插入肛門，成人約4～5cm，兒童約2～3cm，與直腸粘膜表面接觸，輕輕旋轉(zhuǎn)，必須將拭子置于適當?shù)倪\送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。

(4)容器應是清潔、帶蓋、廣口的(不宜使用紙盒)、送檢的標本中不能加入防腐劑。

3．標本運送

(1)糞便標本應盡快送檢，室溫條件下不能超過2h。糞便培養(yǎng)操作流程三、細菌培養(yǎng)及培養(yǎng)基的選擇

1．腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng)腹瀉病原菌種類繁多，實驗室不可能對所有可能引起腹瀉的病原菌都進行培養(yǎng)。為保證獲得較高的檢出率，可以對患者進行腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng)，包括沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌，也包括可引起菌群失調(diào)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和酵母菌。糞便標本至少應接種SS、EMB(或MAC或中國蘭)等培養(yǎng)基，必要時加血平皿(表2)。例如，血平皿+SS+MAC用于糞便常規(guī)培養(yǎng)。

EMB:伊紅美藍平板MAC：麥康凱平板

糞便細菌常規(guī)培養(yǎng)方法糞便培養(yǎng)操作流程病原菌種類培養(yǎng)基選擇及培養(yǎng)方法沙門氏菌SS、EMB，置35℃培養(yǎng)18～24h志賀氏菌XLD、EMB，置35℃培養(yǎng)18～24h氣單胞菌血平皿和MAC，置35℃培養(yǎng)18～24h鄰單胞菌血平皿和MAC，置35℃培養(yǎng)18～24h弧菌血平皿和TCBS，置35℃培養(yǎng)18～24h銅綠假單胞菌血平皿，置35℃培養(yǎng)18～24h金黃色葡萄球菌血于皿和高鹽甘露醇培養(yǎng)基或高鹽卵黃瓊脂平皿，置35C培養(yǎng)18～24h四、結(jié)果報告陽性：報告細菌種名(血清型)和藥敏結(jié)果。陰性：(1)常規(guī)細菌培養(yǎng)陰性應報告“未檢出沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌。未檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及酵母菌過度生長?！?2)特殊細菌培養(yǎng)陰性時應報告相應細菌的陰性篩選結(jié)果，如“彎曲菌培養(yǎng)陰性”。當檢查水樣便，發(fā)現(xiàn)動力及制動試驗均為陽性或分離菌對01群或0139抗血清凝集實驗陽性時均應立即與主管醫(yī)生聯(lián)系并上報衛(wèi)生防疫部門。當培養(yǎng)出沙門氏菌、志賀氏菌少見血清型時應向衛(wèi)生防疫部門申請鑒定。糞便培養(yǎng)操作流程二、標本采集與運