標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 14926.55-2001 實(shí)驗(yàn)動物 免疫酶組織化學(xué)法》作為一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),為實(shí)驗(yàn)動物研究中的免疫酶組織化學(xué)技術(shù)提供了詳細(xì)的操作規(guī)范和要求。與未明確提及的前一版標(biāo)準(zhǔn)或同類方法相比,該標(biāo)準(zhǔn)引入了多項(xiàng)改進(jìn)和更新,以提升實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。以下幾點(diǎn)概括了其主要變更內(nèi)容:
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技術(shù)細(xì)節(jié)優(yōu)化:標(biāo)準(zhǔn)細(xì)化了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備步驟,包括樣本固定、脫水、包埋及切片等預(yù)處理過程的具體操作指南,旨在減少因技術(shù)差異導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)變異性。
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試劑與抗體選擇指導(dǎo):新增了關(guān)于抗體特異性和工作濃度選擇的推薦指導(dǎo),以及酶標(biāo)二抗的選擇原則,幫助研究人員更科學(xué)地選擇實(shí)驗(yàn)材料,提高檢測靈敏度和特異性。
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染色與顯色條件:對染色步驟進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)定,包括底物顯色時(shí)間、溫度控制等,確保染色結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。同時(shí),引入了優(yōu)化的對照組設(shè)置要求,以便于結(jié)果的準(zhǔn)確判讀。
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結(jié)果評價(jià)與記錄:標(biāo)準(zhǔn)明確了結(jié)果觀察與評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn),包括如何通過顯微鏡下觀察判斷陽性信號的強(qiáng)度和分布,以及如何進(jìn)行客觀量化分析。同時(shí),強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)記錄的完整性,要求詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)條件和步驟,便于復(fù)核和追蹤。
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質(zhì)量控制與實(shí)驗(yàn)室管理:增加了質(zhì)量控制方面的內(nèi)容,如定期校準(zhǔn)儀器、使用標(biāo)準(zhǔn)化陽性及陰性對照等,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和實(shí)驗(yàn)室間的可比性。此外,對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、人員培訓(xùn)等方面也提出了具體要求。
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安全與倫理考量:雖然未直接提及與前標(biāo)準(zhǔn)的對比,但該標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)操作過程中的生物安全和個(gè)人防護(hù)措施,以及遵循實(shí)驗(yàn)動物倫理原則的重要性,體現(xiàn)了對科研活動人文關(guān)懷的提升。
這些變更綜合反映了實(shí)驗(yàn)動物免疫酶組織化學(xué)領(lǐng)域方法學(xué)的最新進(jìn)展,旨在促進(jìn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)過程的規(guī)范化。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2001-08-29 頒布
- 2002-05-01 實(shí)施
文檔簡介
ICS65.020.30B44中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.55-2001實(shí)驗(yàn)動物免疫酶組織化學(xué)法Laboratory2001-08-29發(fā)布2002-05-01實(shí)施中華民:共和玉發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局
GB/T14926.55-2001前本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫酶組織化學(xué)法所用試劑、器材和操作步驛等.本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部提出并歸口,本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:賀爭鳴。
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動物免疫酶組織化學(xué)法GB/T14926.55—2001Laboratoryanimal-lmmunohistochemistry(IH)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫酶組織化學(xué)法(IH)所用試劑、器材和操作步驃等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)動物病毒抗原的檢測,2原理用已知的特異性抗體與標(biāo)本中待測抗原反應(yīng),如待測抗原是特異性抗體的相應(yīng)抗原則形成抗原抗體復(fù)合物。此抗原抗體復(fù)合物仍保持其抗原活性,可與相應(yīng)的第二抗體酶結(jié)合物結(jié)合,遇酶底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)。在普通顯微鏡下,根據(jù)顏色的反應(yīng)判定結(jié)果。主要試劑與器材3.1試劑3.1.1抗病毒單克隆抗體或抗血清3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴1gG抗體標(biāo)記辣根過氧化物酶3.1.3PBS(0.01mol/L.pH7.6)氯化鈉8.5g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·2H.O)0.20g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·12H.O)3.12g蒸餡水加至1000mL3.1.4底物溶液33,3-二胺基聯(lián)苯胺鹽酸鹽(DAB)40mgPBS100mL丙酮5mL3%過氧化氫0.1mL3.2器材3.2.1石蠟切片機(jī)或冰凍切片機(jī)3.2.2載玻片及蓋玻片。3.2.3普通顯微鏡4操作步驥4.1冰凍切片風(fēng)干后用丙酮固定10~15min,石蠟切片,常規(guī)脫蠟至PBS(切片應(yīng)用白膠或鉻礬明膠做粘合劑,以防脫片)。4.2去內(nèi)源酶用0.3%過氧化氫甲醇溶液或1%鹽酸酒精37C作用30min.
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