實驗一還原性糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定

實驗一還原性糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定第一頁，共十六頁，2022年，8月28日一、實驗原理可溶性還原糖＋蛋白質(zhì)＋脂肪＋斐林試劑雙縮脲試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液橘黃色紅色紫色顏色反應(yīng)第二頁，共十六頁，2022年，8月28日二、幾種重要的試劑斐林試劑甲液（0.1g/mL的NaOH溶液）乙液（0.05g/mL的CuSO4溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用混合均勻雙縮脲試劑A液（0.1g/mL的NaOH溶液）B液（0.01g/mL的CuSO4溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用先加A液再加B液蘇丹Ⅲ（Ⅳ）染液：用來鑒定脂肪的存在第三頁，共十六頁，2022年，8月28日四、實驗方法與步驟1、可溶性還原糖的鑒定(1)制備組織樣液：蘋果洗凈、去皮、切塊→取5g加少許石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏斗墊紗布后過濾，得到樣液(2)鑒定樣液：取2mL樣液于試管中→注入2mL剛配制的斐林試劑，振蕩混合（淡藍色）→水浴煮沸2min左右，觀察溶液顏色變化（先變?yōu)樽厣?，再變?yōu)榇u紅色）第四頁，共十六頁，2022年，8月28日制備生物組織樣液取材、研磨、過濾取樣取2ml組織樣液注入試管注入試管中注入試劑向試管中注入2ml剛配制的斐林試劑加熱和觀察(將4—5滴乙液滴入2ml甲液中)第五頁，共十六頁，2022年，8月28日2、脂肪的鑒定(1)切片制作(2)染色：在花生子葉切片上滴2～3滴蘇丹Ⅲ染液→2～3min中后，吸去染液→滴體積分數(shù)為50％的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精，再滴1～2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片(3)鏡檢鑒定：在低倍物鏡下觀察，找到花生子葉切片的最薄處，移至視野中央→轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，換用高倍物鏡觀察（脂肪滴:橘黃色的圓形小顆粒）第六頁，共十六頁，2022年，8月28日制備實驗材料去種皮、削平面、切片染色滴2—3滴蘇丹Ⅲ染液染色2—3分鐘去浮色在玻片上滴1—2滴體積分數(shù)為50%酒精溶液，洗去浮色制作臨時裝片放在顯微鏡下觀察（先低倍后高倍）第七頁，共十六頁，2022年，8月28日2、蛋白質(zhì)的鑒定(1)制備組織樣液：浸泡黃豆1～2d→去皮、切成薄片，加少許石英砂及5mL水研磨→漏斗墊紗布后過濾，得到樣液（用蛋清要稀釋10倍以上，否則實驗后黏住試管壁不易洗凈）(2)鑒定樣液：取2mL樣液于試管Ⅰ中→加入

2mL雙縮脲試劑A液搖勻（造成一個堿性環(huán)境）→加入雙縮脲試劑B液3～4滴，搖勻，注意顏色變化（溶液變?yōu)樽仙?。另?/p>

清水于試管Ⅱ中→加入

搖勻→

顏色變化，作為

。2mL（A液、B液）無對照第八頁，共十六頁，2022年，8月28日制備生物組織樣液取材研磨過濾或制備蛋清液注入組織樣液取一支試管注入黃豆組織液（或蛋清液）2ml注入試劑A加入2ml雙縮尿試劑A加入雙縮尿試劑B觀察顏色變化第九頁，共十六頁，2022年，8月28日五、注意事項[1]斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05g/ml的硫酸銅溶液）分別配制、儲存，使用時再臨時配制，將4—5滴乙液滴入2ml甲液中，配完后立即使用。[2]雙縮尿試劑的使用，應(yīng)先加A（0.1g/ml的NaOH溶液），造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加B液（0.01g/ml的硫酸銅溶液）。第十頁，共十六頁，2022年，8月28日[5]在鑒定脂肪的實驗中，若用花生作實驗材料，必須提前浸泡3—4個小時，浸泡時間短，不易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成型，染色時間不易過長。[4]在蛋白質(zhì)的鑒定試驗中，若用蛋白質(zhì)作實驗材料，必須稀釋，以免實驗后粘住試管，不易洗刷。[3]在鑒定可溶性還原糖的實驗中，對試管中的溶液進行加熱時，試管底部不要觸及燒杯底部，另外，試管口不要朝向?qū)嶒炚?，以免沸騰的熔液沖出試管，造成燙傷。第十一頁，共十六頁，2022年，8月28日課堂練習(xí)1、用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，

溶液顏色的變化過程是（）A、無色→磚紅色（沉淀）B、淺藍色→磚紅色（沉淀）C、淺藍色→藍色→磚紅色（沉淀）D、淺藍色→棕色→磚紅色（沉淀）D第十二頁，共十六頁，2022年，8月28日2、在用雙縮尿試劑鑒定蛋白質(zhì)實驗時，正確的操作是（）

A、2ml蛋白質(zhì)稀釋液先加0.1g/ml的NaOH，再加3—4滴0.01g/ml

CuSO4溶液。

B、2ml蛋白質(zhì)稀釋液先加3—4滴0.01g/ml

CuSO4溶液，再加0.1g/ml的NaOH

C、2ml蛋白質(zhì)稀釋液，同時加3—4滴0.01g/ml

CuSO4和0.1g/ml的NaOH混合液。

D、在NaOH和CuSO4混合液中加入蛋白質(zhì)稀釋液。A第十三頁，共十六頁，2022年，8月28日3、用蘇丹Ⅲ染液對脂肪組織進行染色時，可用來沖洗浮色的藥品是（）

A、HCI；B、H2O；

C、50%的酒精；D、無水酒精。4、下列哪個實驗用到顯微鏡（）

A、可溶性還原糖的鑒定；B、蛋白質(zhì)的鑒定；C、脂肪的鑒定；D、淀粉的鑒定。CC第十四頁，共十六頁，2022年，8月28日5、下列哪種試劑在使用過程中，必須經(jīng)過加熱（）

A、斐林試劑鑒定可溶性還原糖的過程中；

B、蘇丹Ⅲ

在鑒定動物組織中的脂肪時；

C、雙縮尿試劑鑒定蛋白質(zhì)時；

D、碘化鉀溶液鑒定淀粉時。6、下列糖中能與斐林試劑反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀的是（）A、淀粉；B、果糖；C、蔗糖；D、纖維素。AB第十五頁，共十六頁，2022年，8月28日在蛋白質(zhì)鑒定實驗中，必須先加A液再加B液的原因是:

為什么加入3—4滴B液而不能過量？