GB/T 21752-2008化學(xué)品嚙齒動(dòng)物28天重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)方法

犐犆犛１３．３００；１１．１００

犃８０

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２１７５２—２００８

化學(xué)品嚙齒動(dòng)物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口

毒性試驗(yàn)方法

犆犺犲犿犻犮犪犾狊—犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳狉犲狆犲犪狋犲犱犱狅狊犲２８犱犪狔狅狉犪犾狋狅狓犻犮犻狋狔狊狋狌犱狔犻狀狉狅犱犲狀狋狊

２００８０５１２發(fā)布２００８０９０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)等同采用經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（ＯＥＣＤ）化學(xué)品測(cè)試指南Ｎｏ．４０７（２００５年）《嚙齒動(dòng)物２８天

重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)》（英文版）。

本標(biāo)準(zhǔn)作了下列編輯性修改：

———增加了范圍部分；

———計(jì)量單位改成我國(guó)法定計(jì)量單位；

———?jiǎng)h除ＯＥＣＤ的參考文獻(xiàn)部分。

本標(biāo)準(zhǔn)附錄Ａ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（ＳＡＣ／ＴＣ２５１）提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草單位：廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局、深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：許崇輝、侯粉霞、謝建軍、劉麗。

Ⅰ

書

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犗犈犆犇引言

１．１９９８年，ＯＥＣＤ啟動(dòng)了一項(xiàng)具有高度優(yōu)先權(quán)的活動(dòng)，即，修訂現(xiàn)存指南、建立用于篩查和檢測(cè)潛

在內(nèi)分泌干擾物的新指南。其中一項(xiàng)工作就是修訂嚙齒動(dòng)物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)（ＯＥＣＤ

ＴＧ４０７），在其中增添適用于檢測(cè)受試物內(nèi)分泌活性的評(píng)價(jià)指標(biāo)。為了驗(yàn)證所增添的這些新指標(biāo)與內(nèi)

分泌的相關(guān)性及其可操作性，在國(guó)際范圍內(nèi)開展了廣泛的驗(yàn)證性研究。選用一些具有雌激素、抗雌激

素、雄激素、抗雄激素、甲狀腺素、抗甲狀腺素活性的化學(xué)品進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定這些新指標(biāo)，證明這些指標(biāo)與

內(nèi)分泌功能的相關(guān)性，比較測(cè)定結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間的可重復(fù)性，說明修訂前的ＯＥＣＤ４０７中要

求測(cè)定的指標(biāo)對(duì)新增添的指標(biāo)的影響。在上述研究中使用的化學(xué)品包括炔雌醇（ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、金

雀異黃酮（ｇｅｎｉｓｅｉｎ）、壬基苯酚（ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ）、它莫西芬（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ＣＧＳ１８３２０Ｂ、甲基睪酮（ｍｅｔｈｙｌ

ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、氟他胺（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）、丙硫氧嘧啶（ｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）和

１甲狀腺素（１ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ）。所獲得的大量研究數(shù)據(jù)已經(jīng)被匯總到一起、ＯＥＣＤ的一份綜合性報(bào)告對(duì)這

些研究結(jié)果進(jìn)行了詳細(xì)的評(píng)價(jià)。該修訂后的ＴＧ４０７是上述國(guó)際范圍內(nèi)驗(yàn)證試驗(yàn)得出的經(jīng)驗(yàn)和結(jié)果的

結(jié)晶。新ＴＧ４０７允許在評(píng)價(jià)其他毒理學(xué)效應(yīng)時(shí)同時(shí)評(píng)價(jià)內(nèi)分泌介導(dǎo)的毒性效應(yīng)。

２．在ＯＥＣＤＴＧ４０７中增添用于檢測(cè)內(nèi)分泌介導(dǎo)的毒性效應(yīng)指標(biāo)的合理性在ＯＥＣＤ專論中進(jìn)行

了論述。該專論中列出了主要的修訂內(nèi)容，其中大部分修訂內(nèi)容的合理性在國(guó)際性驗(yàn)證研究的第一階

段使用氟他胺和丙硫氧嘧啶進(jìn)行了驗(yàn)證。在第一階段還使用了更多的化合物進(jìn)行了驗(yàn)證，但是后來開

展的這些研究沒有對(duì)前版本ＴＧ４０７要求的所有觀察終點(diǎn)進(jìn)行觀察，比如ＦＯＢ或運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)，有些

研究也沒有很充分地報(bào)道，有些與前版本ＴＧ４０７的要求相比使用劑量太低。根據(jù)第一階段驗(yàn)證試驗(yàn)

對(duì)新增添評(píng)價(jià)指標(biāo)測(cè)定時(shí)所獲得的有關(guān)其測(cè)定的可操作性、重復(fù)性和靈敏性等方面的資料，來決定應(yīng)選

擇其中的哪些評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行國(guó)際范圍內(nèi)的第二階段驗(yàn)證試驗(yàn)?，F(xiàn)行ＴＧ４０７是在第二階段驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)

果的基礎(chǔ)上形成的。

３．本試驗(yàn)作為一種體內(nèi)試驗(yàn)方法，可提供關(guān)于多種內(nèi)分泌機(jī)制及其效應(yīng)的數(shù)據(jù)，可在“ＯＥＣＤ內(nèi)分

泌干擾物測(cè)定與評(píng)價(jià)的概念框架”（附錄Ａ）中看到。在該概念性框架中，ＴＧ４０７被包含在第４級(jí)。該試

驗(yàn)除了可獲得原版本可能提供的信息外，還提供多種內(nèi)分泌機(jī)制及其效應(yīng)的相關(guān)數(shù)據(jù)、并說明這種多種

內(nèi)分泌機(jī)制效應(yīng)是否存在劑量反應(yīng)關(guān)系。

４．國(guó)際范圍內(nèi)對(duì)ＴＧ４０７的驗(yàn)證研究結(jié)果表明，該ＴＧ４０７在要求的靈敏度范圍內(nèi)，檢測(cè)出了已知

的具有強(qiáng)內(nèi)分泌活性作用的化學(xué)品，包括（抗）雌激素類化學(xué)品、（抗）雄激素類化學(xué)品或（抗）甲狀腺素類

化學(xué)品。用甲基睪酮和二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）進(jìn)行的試驗(yàn)表明，該試驗(yàn)程序也可用于檢測(cè)對(duì)

甲狀腺產(chǎn)生微弱作用的化學(xué)品。關(guān)于金雀異黃酮（植物雌激素）、壬基苯酚（弱雌激素作用）、狆，狆’ＤＤＥ

（弱的抗雄性激素作用）等測(cè)試物，其產(chǎn)生的內(nèi)分泌活性作用與其產(chǎn)生的其他毒性效應(yīng)相比太弱了，即使

在高劑量組也檢測(cè)不到內(nèi)分泌相關(guān)指標(biāo)的明顯改變，另一種情況是，各實(shí)驗(yàn)室得出的試驗(yàn)結(jié)果都具有不

確定性（指異黃酮的試驗(yàn)結(jié)果）。

５．通過對(duì)國(guó)際范圍內(nèi)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果的詳盡分析，認(rèn)為需要對(duì)ＴＧ４０７進(jìn)行進(jìn)一步修訂以提高試驗(yàn)

的靈敏度，特別是檢測(cè)弱雌激素類物質(zhì)和（抗）雄性激素類物質(zhì)的靈敏度。推薦在試驗(yàn)中進(jìn)行雌性和雄

性動(dòng)物乳腺的組織病理學(xué)檢查、評(píng)價(jià)雌性生殖器官的組織病理學(xué)改變（應(yīng)特別注意雌性生殖器官組織結(jié)

構(gòu)與發(fā)情周期（陰道涂片檢查）同步性的改變）。這些方面的測(cè)定內(nèi)容未包含在提供給參與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室

的研究程序中。

６．國(guó)際范圍內(nèi)驗(yàn)證研究的結(jié)果不能明確說明是否需要在ＴＧ４０７中加入甲狀腺激素的測(cè)定，但是

明確提示甲狀腺激素（Ｔ４、Ｔ３）和促甲狀腺素（ＴＳＨ）應(yīng)作為更新指標(biāo)加入到ＴＧ４０７的試驗(yàn)程序中。

Ⅱ

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７．國(guó)際范圍內(nèi)的驗(yàn)證研究的結(jié)果表明，ＴＧ４０７驗(yàn)證試驗(yàn)中數(shù)據(jù)的質(zhì)量主要依賴于實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)，

特別是實(shí)驗(yàn)室在檢查雌性生殖器官組織結(jié)構(gòu)周期性改變方面的經(jīng)驗(yàn)以及在分離和稱量激素依賴性小器

官的重量時(shí)所具有的經(jīng)驗(yàn)。因此，建議各實(shí)驗(yàn)室在按照ＴＧ４０７進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制。

８．該ＴＧ４０７是經(jīng)過兩次會(huì)議討論后的產(chǎn)物，一次是哺乳動(dòng)物試驗(yàn)方法確認(rèn)管理小組／內(nèi)分泌干擾

物測(cè)試與評(píng)估任務(wù)組于２００６年４月在華盛頓召開的，另一次是ＯＥＣＤ于２００６年４月在斯德哥爾摩召

開的。新版ＴＧ４０７是在國(guó)際范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行方法驗(yàn)證的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的。

９．由于按照ＴＧ４０７進(jìn)行試驗(yàn)需要花費(fèi)大量動(dòng)物、很多費(fèi)用、很長(zhǎng)時(shí)間，因此，如果對(duì)ＴＧ４０７進(jìn)行

像體外試驗(yàn)方法驗(yàn)證要求的那樣進(jìn)行全面的方法驗(yàn)證，則無論是過去還是現(xiàn)在看來都不太合適。無論

從動(dòng)物福利還是從經(jīng)濟(jì)方面考慮都不應(yīng)開展這種全面的驗(yàn)證試驗(yàn)。根據(jù)對(duì)ＴＧ４０７中某些評(píng)價(jià)指標(biāo)的

驗(yàn)證結(jié)果，認(rèn)識(shí)到需要對(duì)某些評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和優(yōu)化。在新版ＴＧ４０７的應(yīng)用過程中，將會(huì)

獲得更多的有關(guān)這些評(píng)價(jià)指標(biāo)的經(jīng)驗(yàn)。

１０．該ＴＧ４０７在今后的幾年里可用于測(cè)定受試物重復(fù)經(jīng)口染毒所引起的毒性作用，包括對(duì)內(nèi)分泌

系統(tǒng)的作用。在該試驗(yàn)程序經(jīng)世界范圍內(nèi)的應(yīng)用而進(jìn)一步取得經(jīng)驗(yàn)后，應(yīng)召集專家對(duì)ＴＧ４０７進(jìn)行進(jìn)

一步的修改、提煉和認(rèn)可。今后在對(duì)ＴＧ４０７進(jìn)行修改時(shí)，必要時(shí)應(yīng)重點(diǎn)對(duì)那些目前尚不能明確其價(jià)值

的一些觀察終點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如，乳腺的組織病理學(xué)檢查、雌性生殖器官組織結(jié)構(gòu)周期性變化與動(dòng)情周期

的一致性測(cè)定、甲狀腺相關(guān)激素的測(cè)定等。

１１．對(duì)化學(xué)品進(jìn)行毒性特征評(píng)價(jià)時(shí)，可在獲得最初的急性毒性資料后進(jìn)行重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)。

該試驗(yàn)可提供在一個(gè)相對(duì)有限的時(shí)間內(nèi)重復(fù)染毒受試物可能產(chǎn)生的健康危害效應(yīng)資料，包括對(duì)內(nèi)分泌

系統(tǒng)的毒性作用。該試驗(yàn)作為一種重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)，可在未要求進(jìn)行９０天重復(fù)染毒試驗(yàn)時(shí)（如，受試

物的產(chǎn)量未超過規(guī)定的限值）進(jìn)行或作為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)來開展。染毒期限應(yīng)為２８天。

１２．該修改后的ＴＧ４０７增加了用于檢測(cè)化學(xué)品對(duì)甲狀腺生理功能影響和對(duì)雄性和（或）雌性生殖

器官影響的評(píng)價(jià)指標(biāo)，同時(shí)仍然保留修改前的ＴＧ４０７中的所有毒理學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)。根據(jù)驗(yàn)證試驗(yàn)的數(shù)

據(jù)資料，必須強(qiáng)調(diào)的是該試驗(yàn)程序的敏感性尚不足以檢測(cè)出所有的（抗）雄激素類物質(zhì)或（抗）雌激素類

物質(zhì)。用于ＴＧ４０７試驗(yàn)的動(dòng)物未處于對(duì)內(nèi)分泌干擾物最敏感的年齡。該ＴＧ４０７可檢測(cè)出強(qiáng)的或中

等程度的內(nèi)分泌活性物質(zhì)，但是，在多數(shù)情況下，檢測(cè)不出弱的內(nèi)分泌活性物質(zhì)。因此，不能把該試驗(yàn)當(dāng)

作內(nèi)分泌干擾作用的篩選試驗(yàn)。

１３．因此，未檢測(cè)出內(nèi)分泌效應(yīng)時(shí)并不能據(jù)此認(rèn)為化學(xué)品對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)無影響。按照內(nèi)分泌介導(dǎo)

的效應(yīng)對(duì)受試物進(jìn)行分類時(shí)，不能僅依賴該ＴＧ４０７的結(jié)果，而是應(yīng)該對(duì)現(xiàn)有的可反映受試物潛在內(nèi)分

泌活性的所有資料進(jìn)行證據(jù)權(quán)重分析后再進(jìn)行分類。當(dāng)要制定化學(xué)品內(nèi)分泌活性（化學(xué)品分類）相關(guān)的

管理決策時(shí)，應(yīng)依據(jù)上述經(jīng)證據(jù)權(quán)重分析后的結(jié)果，而不是僅僅依賴于該ＴＧ所獲得的結(jié)果。

１４．該ＴＧ４０７是為了根據(jù)試驗(yàn)所觀察到的毒性效應(yīng)，包括內(nèi)分泌影響效應(yīng)，來檢測(cè)受試物可能的

危害作用。也就是說，根據(jù)該ＴＧ４０７的結(jié)果可對(duì)受試物進(jìn)行危害識(shí)別和危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)。有關(guān)內(nèi)分泌評(píng)

價(jià)指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果可參見“ＯＥＣＤ內(nèi)分泌干擾化學(xué)品測(cè)定與評(píng)價(jià)的概念框架”（附錄Ａ）。

１５．眾所周知，所有涉及到動(dòng)物的操作都應(yīng)當(dāng)符合當(dāng)?shù)氐膭?dòng)物保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)；下面所述的動(dòng)物保護(hù)和處

理要求是最低要求，當(dāng)?shù)氐膭?dòng)物保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)高于此要求。ＯＥＣＤ另外還有一項(xiàng)關(guān)于“人道對(duì)待動(dòng)物”的

規(guī)范。

Ⅲ

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化學(xué)品嚙齒動(dòng)物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口

毒性試驗(yàn)方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嚙齒動(dòng)物２８ｄ重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)的范圍、術(shù)語和定義、試驗(yàn)基本原則、試驗(yàn)方