細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)Dr.上新生

何為層流技術(shù)及其在FCM成要滿足雷諾數(shù)Re=——<2300。層流是液體穩(wěn)定流動的必要條件，為細(xì)胞分析提供技術(shù)所獲得的FSC信號差別很大。側(cè)向角散射光信號（SCC）：信號強(qiáng)弱與細(xì)胞內(nèi)顆粒多少相關(guān)。細(xì)胞凋亡時(shí)其SCC常變大，同時(shí)FSC常減小等高線圖(ContourPlot)：在一條等高線上細(xì)胞數(shù)相同，不同的等高線上細(xì)胞數(shù)不同二維密度圖(DensityPlot)假三維圖(Pseudo3DPlot)：Z為細(xì)2.）0.50.1%；胰蛋0.25%(1-10μg/mlDNase10-15ml酶，加入少量以減弱酶對細(xì)胞的不利影響；通過反復(fù)離心漂洗，移去酶消化液，徹底終止酶消化過程等。收獲率是指分離后所得的細(xì)胞亞群數(shù)占原細(xì)胞樣品中該亞群細(xì)胞數(shù)的百分比。純度是指分離后的樣品中該亞群細(xì)胞所占的百分比。細(xì)胞樣品技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)及注意事3.）酶學(xué)法，化學(xué)法對實(shí)體組織的分散效果較理想，但會造成所測化學(xué)成分的不良影響。FCM所測細(xì)胞是單個(gè)分散狀態(tài)；細(xì)胞團(tuán)塊，細(xì)胞DNA含量分布線性直方圖的分析1.）PIDNA，AnnexinV2.）X軸為AnnexinV‐FITC，Y軸表3.）LL：正常細(xì)胞，PIAnnexinLR:早期凋亡細(xì)胞，AnnexinV（+），PI（‐）UR：晚期凋亡細(xì)胞，AnnexinV（+），PI（+）朗玻－定律（吸收光度測量術(shù)）一束平行的單色光透過嗜色液體時(shí)，其光強(qiáng)度隨該液體中嗜色物質(zhì)的濃度與光程呈指數(shù)形式衰減，即II。*e-簡述共聚焦的原 （光源點(diǎn),物點(diǎn),像點(diǎn)，三點(diǎn)共軛）（完整版學(xué)橫斷面，分辨率提1.4；可無損傷地對樣品作層掃描和熒光強(qiáng)度測量,重建后能得到樣品的三維立體結(jié)構(gòu)。 熒光信號被PMT或cCCD探測器接收 的簡述顯微圖像分析處理的基本過程,圖像分析處理能解決哪些生物醫(yī)學(xué)測量問題?:即電子射線，電流通過電鏡鏡筒頂部的電子槍內(nèi)的燈絲時(shí)釋放電子，電子在柵極和陽極的作用下形成短波長高能。電子束帶負(fù)電荷，具有光的波動性和可折射性，電鏡就是利用作為“光源”來實(shí)現(xiàn)成像的。:用深如果你的課題中需要了解細(xì)胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)變化，請問你應(yīng)選擇哪種類型的電鏡，為保證樣品良好的超微結(jié)構(gòu)，在樣本取材及固定時(shí)應(yīng)注意什么？如果是培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量一定要達(dá)到多少？了解細(xì)胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)變化應(yīng)選擇TEM要想獲得一張理想的電鏡，每個(gè)制樣環(huán)節(jié)都很重要，尤其是取材和固定極為關(guān)鍵。在透射電鏡樣本取材時(shí)，樣本不可大于1mm3，并在1分鐘以內(nèi)完成固定。請問如果組織塊過大會出現(xiàn)什么？沒有及時(shí)固定的組織電鏡下會出現(xiàn)何種改變？掃描電鏡用于觀察組織表面形貌，取材時(shí)必需要充分組織的表面結(jié)構(gòu)，請問取材時(shí)注意事項(xiàng)有哪些什么是血管灌注固定？為什么腦、心肌、腎臟等組織要進(jìn)行灌注固定取材？在樣品過程中為什么要進(jìn)行半薄切片定位半薄切片的意義在于：1取超薄切片的部超薄切片的面積一般要小于0.5mm2，要經(jīng)過半薄切片來選取有意義的部位。2同一3用于圖像分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。如何描述一張電鏡 放 成像 樣品制成超薄切片等，過程復(fù)雜 應(yīng) 變性、復(fù)性、探針、靶分子（分單cDNA、RNA和寡核苷酸三種。簡述ABC胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。PAP法（過氧化物酶-抗過氧化物酶復(fù)合物法） 一抗與組織抗原特異結(jié)合，二抗又將PAP復(fù)合物與一抗連接在一起，然后加入HRP的天然底物H2O2和捕捉底物DAB；光鏡-棕黃色反應(yīng)產(chǎn)物(組織抗原的定位)，電鏡-與鋨酸反應(yīng)，呈高電子密度鋨黑（超微結(jié)構(gòu)定位抗特點(diǎn)：介質(zhì)為密度梯度溶液，且密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度pm)；等密度離心法（isodensity特點(diǎn)：介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度pm)。所需的力場通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速離心。特征：失去原有形態(tài)分化特性減弱；光光光光1.轉(zhuǎn)錄因子就是調(diào)控蛋白，通過與DNA上調(diào)控序列結(jié)合，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激光掃描共焦顯微鏡：是在顯微鏡基