安捷倫液相色譜儀講座

安捷倫科技液相色譜基本維護故障診斷交流講座

2Agilent1100系列HPLC工作原理日常維護故障診斷技術(shù)支持＆服務(wù)流程安捷倫科技有限公司生命科學與化學分析儀器部1100HPLCMaintenance&Troubleshooting31100HPLCMaintenance&Troubleshooting1.在線脫氣機(G1322A/G1379A)2.四元／二元/單元泵(G1311A/G1312A/G1310A)3.自動進樣器(G1313A)4.二極管陣列檢測器(G1315B)5.可變波長紫外檢測器（G1314A)4Agilent1100系列HPLC5Agilent1100在線脫氣機-在線脫氣機(G1322A/G1379A)6工作原理Agilent1100在線脫氣機-在線脫氣機(G1322A/G1379A)7何時需要使用Agilent1100在線脫氣機Agilent1100在線脫氣機-在線脫氣機(G1322A/G1379A)8Agilent1100在線脫氣機-在線脫氣機(G1322A/G1379A)

脫氣機的操作：操作泵之前，用至少兩個體積（標準脫氣機30ml，對微脫氣機10ml）沖洗真空脫氣機，特別是當泵關(guān)閉了一段時間后（例如，過夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時。標準脫氣機（G1322A).

標準脫氣機每個通道體積為12ml

建議排液操作：5ml/min排液6min以上。

微脫氣機（G1379A).微脫每個通道體積為1ml

建議排液操作：2ml/min排液5min。

切勿用5ml/min流速去排液。9使用Agilent1100在線脫氣機須知溶劑

用棕色玻璃瓶裝水溶液，可以避免藻類的生長。

過濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細管。避免使用下述可腐蝕鋼鐵的溶劑：

堿金屬鹵化物及其酸溶液(如：碘化鋰、氯化鉀等)。

高濃度無機酸，如硝酸、硫酸.

可能含有過氧化物的色譜純醚(如THF、二氧六環(huán)、二丙基乙醚)。這些在使用前必須用干燥氧化鋁過濾除去過氧化物。

含強絡(luò)合劑的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。

四氯化碳與2-異丙醇或四氫呋喃的混合液。Agilent1100在線脫氣機-在線脫氣機(G1322A/G1379A)10防止堵塞溶劑過濾器及真空腔污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵的運行。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH

4至7)中尤其如此。下列建議將會延長溶劑過濾器的使用壽命并維持泵的運行。使用滅過菌的溶劑瓶來減緩藻類生長。使用新鮮配制的流動相，特別是水溶劑或鹽緩沖液（建議不超過兩天）。如果應(yīng)用許可，在溶劑中加人0.0001－0.001

M的疊氮化鈉。避免溶劑瓶暴露在直射陽光下。用氬氣置換流動相上層的空氣。長期不用時用水清洗水溶液通道并置換為甲醇Agilent1100在線脫氣機日常維護,故障診斷11Agilent1100在線脫氣機日常維護,故障診斷檢查溶劑過濾器－擰開脫氣機出口或比例閥入口管線，并使液面高于出口30cm此時溶劑會因為重力流出，脫氣機或溶劑過濾頭堵塞時，溶劑會流出不暢或不流出。－查看過濾器是否變色．－臨時取下過濾器，檢查柱前壓力是否正常．清潔溶劑過濾器將堵塞的溶劑過濾器從瓶頭組件中拿下。先用水沖洗殘留之溶劑，然后將過濾器放在裝有濃硝酸（35％）的燒杯里浸一小時。用二次蒸餾水徹底沖洗過濾器。建議不使用超聲波清洗機清洗。將過濾器重新裝好。建議定期清洗溶劑過濾器及溶劑瓶，每三個月至少清洗一次。注意：不要使用沒有安裝溶劑過濾器的系統(tǒng)．可能會嚴重堵塞系統(tǒng)12Agilent1100在線脫氣機日常維護Question?1.如何簡單判斷脫氣機脫氣是否正常？2.如何簡單判斷脫氣機腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？3.如何防止及解決脫氣機腔體或溶劑過濾頭堵塞？13Agilent1100在線脫氣機日常維護Question?1.如何簡單判斷脫氣機脫氣是否正常？

打開Purge閥，設(shè)定泵的流速2ml/min，提起當前所使用溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭，使之脫離液面一小段時間，此時溶劑傳送管內(nèi)會產(chǎn)生一小段氣泡，放下過濾頭，讓此段氣泡通過脫氣機，如果脫氣機正常，氣泡應(yīng)消失或縮小。2.如何簡單判斷脫氣機腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？

關(guān)閉泵，擰開脫氣機出口或比例閥入口管線,此時溶劑會因為重力流出，脫氣機或溶劑過濾頭堵塞時，溶劑會流出不暢或不流出。14Agilent1100四元泵(G1311A)15Agilent1100四元泵工作原理16Agilent1100泵頭(PumpHead)結(jié)構(gòu)圖Agilent1100泵17Agilent1100泵頭(PumpHead)結(jié)構(gòu)圖Pumpheadscrews18Agilent1100泵頭(PumpHead)結(jié)構(gòu)圖

19Agilent1100泵頭(PumpHead)結(jié)構(gòu)圖OutletBallValvePurgeValve234567ActiveInletValve(commontoallexcept1050)Cartridge

8newstyle1oldstyle20Agilent1100系列密封墊沖洗－SealWash(

可選)當流動相中鹽濃度>0.01M時，可以減小密封墊的磨損。對于Agilent1100系列泵為可選件。用10%異丙醇水溶液沖洗WasherSupportsealassemblySealAgilent1100系列泵21帶有SealWash的泵頭結(jié)構(gòu)圖

22如何更換溶劑出口過濾芯Agilent四元／二元/單元泵日常維護

23嚴重污染的溶劑出口過濾芯Agilent四元／二元/單元泵日常維護24如何更換活塞桿密封圈Agilent四元／二元/單元泵日常維護

25Agilent1100系列泵使用須知Agilent四元／二元/單元泵日常維護

26多通道梯度閥（MCGV）操作要點當鹽溶液和有機溶劑混合時，鹽溶液可能與有機溶劑完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在梯度閥的混合點，重力作用有可能使鹽顆粒沉淀下來。通常，閥的A通道用于水相/鹽溶液，而泵的B通道用于有機溶劑。如果使用的是這樣的配置，鹽將落回到鹽溶液中，并被溶解。當泵使用的不同配置（例如，D-鹽溶液，A-有機溶劑）時，鹽可能會落到有機溶劑中，從而出現(xiàn)問題。

Agilent1100四元泵中使用鹽溶液和有機溶劑時，建議將鹽溶液接到下面的口上，有機溶劑接到上面的梯度閥口上。有機溶劑通道最好直接在鹽溶液通道的上面。建議定期用水沖洗所有MCGV通道，以去除在閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。Agilent四元／二元/單元泵日常維護

27更好地使用四元泵

將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面(或較高處)。當在四元泵上使用鹽溶液或有機溶劑時，建議將鹽溶液接在底部得梯度閥口上，將有機溶劑接在上面得梯度閥口上。有機通道最好在鹽溶液通道得上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出得鹽結(jié)晶。操作泵之前，用至少兩個體積（標準脫氣機30ml，對微脫氣機10ml）沖洗真空脫氣機，特別是當泵關(guān)閉了一段時間后（例如，過夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時。防止溶劑過濾器堵塞及長菌。當慮器表面有黑色或黃色污染層說明慮器發(fā)生了堵塞，請立即清洗或更換之。定期檢查排液閥的慮芯。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動相，流速5ml/min，若壓力大于10bar,則須立即更換。

Agilent四元／二元/單元泵日常維護

28Agilent1100系列泵的使用須知更好地使用泵當使用低流速時（不高于0.2

ml/min）檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測試或漏液測試）。每當更換泵密封圈時排液閥慮芯也應(yīng)更換。更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。使用緩沖溶液時，關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當需要長時間使用0.1摩爾或更高濃度得緩沖液時，最好選用密封墊清洗附件，以減少對密封墊及活塞桿的磨損。更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對其進行磨合，但磨合不適用于正相密封墊。29Agilent1100系列泵的使用須知

更好地使用泵

當泵頭安裝有沖洗附件時，由于該附件中也有密封墊，這樣就會增加活塞桿運動時的阻力。所以開泵前一定要用10％異丙醇，并將其流速調(diào)至約20滴/分鐘使這溶液流過沖洗裝置。

10％異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。最好不要用其它溶劑代替。

當泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10％異丙醇，會使密封墊及活塞桿的壽命減短。30Agilent1100系列泵的使用須知密封墊磨合操作：1.以異丙醇作為溶劑并將其管道直接連接到主動閥(四元泵需一接頭，部件號0100－1847）。2.連接阻尼管（部件號5022－2159）于排液閥的出口，阻尼管的另一端置于廢液瓶中。3.打開排液閥，并用異丙醇以2ml/min的流速沖洗系統(tǒng)10分鐘。4.關(guān)閉排液閥，設(shè)置流速使壓力達到350bar，并使系統(tǒng)在此壓力下保持15分鐘。5.關(guān)閉泵，緩慢打開排液閥釋放壓力，重新連接管路，然后沖洗系統(tǒng)中的異丙醇。注意，只有反相密封墊（5063－6589）才需此操作而正相密封墊（0905－1420）因其最高只耐受200bar,所以此操作會損害它。31Agilent四元／二元/單元泵日常維護1.更換排液閥慮芯2.清洗,更換主動閥閥芯3.清洗球形單向閥4.更換密封墊，活塞桿32Question?1.如何簡單判斷比例閥是否內(nèi)漏？2.何時應(yīng)該更換Purge閥內(nèi)的過濾白頭？3.泵壓力不正?？赡苡赡切┰蛞?？Agilent1100泵的日常維護33Question?1.如何簡單判斷比例閥是否內(nèi)漏？

設(shè)定泵使用一個單獨通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動，正常時均不應(yīng)流動。2.何時應(yīng)該更換Purge閥內(nèi)的過濾白頭？

使用純水作流動相，打開Purge閥，流速5ml/min，觀察系統(tǒng)壓力，如果超過10bar，應(yīng)該更換。3.泵壓力不正?？赡苡赡切┰蛞穑?/p>

氣泡，主動閥故障，出口閥故障，密封墊或柱塞桿磨損，滲漏或堵塞，比例閥故障，傳感器故障，使用比例閥混合時鹽濃度太高Agilent1100系列泵的日常維護34Agilent1100自動進樣器(G1313A)35Agilent1100自動進樣器工作原理36Agilent1100自動進樣器工作原理37Agilent1100自動進樣器結(jié)構(gòu)38Agilent1100自動進樣器結(jié)構(gòu)39Agilent1100自動進樣器結(jié)構(gòu)40Agilent1100自動進樣器使用須知41Agilent1100自動進樣器使用須知使用自動洗針功能自動洗針功能可以把程序設(shè)置為“帶有洗針的進樣”,或?qū)⒆詣酉瘁樄δ馨谶M樣器程序中。當使用自動洗針功能時，進樣針在取樣后會轉(zhuǎn)移到洗針步驟。造成攜留效應(yīng)的主要原因是殘留在進樣針外的少量樣品。通過進樣后的洗針功能可以立即洗去針外表面上殘留的樣品。當進樣閥轉(zhuǎn)回到主流路時，定量管和針內(nèi)所有的樣品都被沖洗到色譜柱中。這種結(jié)合洗針和沖洗管路的設(shè)計可以把攜留效應(yīng)減低到最小的程度。去掉洗滌瓶蓋為了獲得最佳的分析結(jié)果，裝有溶劑的洗滌瓶是不加蓋的，而且洗滌瓶中的溶劑對樣品組分有較好的溶解作用。如果洗滌瓶有蓋將會有少量樣品留在密封墊上，這樣會把殘留的樣品帶到下一個樣品中。帶有洗針的進樣程序進樣程序中包括了NEEDLEWASH（洗針）命令，當這一命令設(shè)置在進樣程序中時，則在進樣前會進入指定的洗滌瓶中洗針。[例]1DRAW5μL（抽取5μL樣品）

2NEEDLEWASHvial7（洗針到7號瓶）

3INJECT（進樣）42Agilent1100自動進樣器使用須知43Agilent1100自動進樣器使用須知提高進樣量的精度進樣體積小于2

μL當進樣閥切換到BYPASS（旁路）位置時，在定量管內(nèi)的流動相壓力降低。當進樣針抽取樣品時，流動相進一步降低壓力。如果流動相沒有充分脫氣，在進樣時定量管內(nèi)就會產(chǎn)生小氣泡。在進樣體積小于

2

μL時這些小氣泡就會影響到進樣體積的精密度。為了使進樣體積小于

2

μL時有最佳的進樣精密度，建議使用Agilent

1100系列真空脫氣機，確保流動相充分脫氣。也可以在進樣間隙自動洗針，從而進一步提高進樣體積的精密度。44Agilent1100自動進樣器使用須知提高進樣量精度抽樣速度對粘稠的樣品，計量部件從樣品瓶抽取樣品的速度會影響取樣體積的精密度。如取樣速度太快，在樣品塞中會帶有氣泡，從而影響進樣體積。抽樣速度的默認值是200

μL/min(范圍：10-1000

μL/min)，這一速度適合于大多數(shù)樣品的取樣要求。但是對于粘稠的樣品要得到最佳的結(jié)果，設(shè)定的抽樣速度要低于

200

μL/min。進樣器程序中的“DRAW”命令行也用于抽樣速度的設(shè)定，這是為自動進樣器設(shè)置的。推樣速度默認的推樣速度為200

μL/min(范圍：10-1000

μL/min)，當進行大體積進樣時，就要設(shè)定為較大的推樣速度，加快進樣周期。這就是縮短計量器具從進樣周期開始（當注射器活塞回到起始位置時）到推出溶劑所需的時間。進樣器程序中的“EJECT”命令行也用于推樣速度的設(shè)定，這是為自動進樣器設(shè)置的。較快的推樣速度可以加快進樣器程序所需的時間。對于粘稠的樣品要避免使用過快的推樣速度。當使用多次抽樣功能時，推樣速度控制著樣品進入針座毛細管擴大體積部分的速度，對粘稠的樣品要避免使用過快的推樣速度。45Agilent1100自動進樣器使用須知轉(zhuǎn)子密封墊的選擇VespelTM密封墊標準的密封墊是由Vespel密封材料制成的。Vespel適用于pH范圍為2.3～9.5的流動相。Vespel適合于大多數(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，但是當pH低于2.3或高于9.5時，Vespel密封墊會很快地損壞，縮短其使用壽命。TefzelTM密封墊在流動相的pH低于2.3或高于9.5時，或者在會很快降低Vespel密封墊的使用壽命的情況下，可以使用由Tefzel制成的密封墊。Tefzel是較Vespel更耐極端pH范圍的材料，但是Tefzel較為柔軟。通常Tefzel密封墊的理論使用壽命小于Vespel密封墊。但對于pH很低或很高的流動相，Tefzel密封墊的使用壽命會更長一些。46Agilent1100自動進樣器日常維護1定期檢查各傳動桿是否足夠潤滑，必要時先用酒精棉球擦拭干凈后再給這些桿涂抹少量液體潤滑油，臟的傳動桿使阻力增大從而造成自動進樣器在取樣過程中由于馬達過熱導致出錯。檢查取樣爪子的綠色膠套時否損壞，如果是請更換之，否則會使樣品放置位置不正確而導致如針，針座等損壞。用酒精棉簽擦拭針座防止灰塵污染堵塞針與針座。若場地確實灰塵較多，建議購買自動進樣器門，棕色門還可以幫助防止見光敏感的樣品。47Agilent1100自動進樣器常見故障漏液

針座磨損

轉(zhuǎn)子磨損

進樣量不準轉(zhuǎn)子磨損計量泵故障抽樣速度太快機械臂移動故障-抓不準樣品瓶傳感器故障周圍環(huán)境差樣品瓶不標準

48Question?1.樣品量太少（某些離心處理的樣品），無法過濾，為了盡量避免堵塞，可以采取什么措施？

Agilent1100自動進樣器日常維護49Question?1.樣品量太少（某些離心處理的樣品），無法過濾，為了盡量避免堵塞，可以采取什么措施？

在自動進樣器設(shè)置中，適當抬高進樣針抽樣時的位置。Agilent1100自動進樣器日常維護50Agilent1100自動進樣器日常維護Question?2.怎樣判斷自動進樣器的轉(zhuǎn)子墊圈磨損？51Agilent1100自動進樣器日常維護Question?2.怎樣判斷自動進樣器的轉(zhuǎn)子墊圈磨損？

將第四號管（排液的細塑料管）提起，正常情況下應(yīng)沒有液體滴出，如有則轉(zhuǎn)子墊圈已磨損。

色譜現(xiàn)象：壓力不穩(wěn)，保留時間面積重復(fù)性差，殘留嚴重。52Agilent1100自動進樣器日常維護更換轉(zhuǎn)子密封圈更換針及針座53Agilent1100手動進樣器（G1328A,G1328B)54Agilent1100手動進樣器操作原理55Agilent1100手動進樣器操作原理56Agilent1100手動進樣器使用須知

為了防止虹吸應(yīng)注意使第五第六號放空管的出口與進樣口保持在同一平面57Agilent1100手動進樣器使用須知

為了更好的重現(xiàn)性，應(yīng)進行滿閥進樣，進樣體積最好是樣品環(huán)的5~6倍。2手動進樣器預(yù)裝Vespel轉(zhuǎn)子墊圈，請參考自動進樣章節(jié)選擇轉(zhuǎn)子墊圈。一定要使用合規(guī)格的進樣器，規(guī)格為外徑0.028英寸，長2英寸的平頭針。一定不能使用尖針！它會嚴重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈。58Agilent1100手動進樣器日常維護進完樣后一定要及時沖洗進樣器，特別是用鹽或緩沖液作流動相。由于這些溶液會形成結(jié)晶從而磨損墊圈。沖洗方法：

A.將進樣器轉(zhuǎn)至Inject位置，利用液相泵輸送高純水沖洗(這時是沖洗樣品環(huán)及溝槽）.

B.用閥清洗接頭和注射器沖洗。59Agilent1100手動進樣器日常維護

當用注射器及接頭清洗時，應(yīng)注意不要太靠近進樣器并戴防護眼鏡，防止溶劑濺入眼睛。經(jīng)常用濕潤的軟布清潔進樣器，特別是進樣口周圍。請仔細閱讀進樣器說明書，上面有詳細使用及其它信息。60Agilent1100手動進樣器日常維護Question如何判斷手動進樣器的密封圈漏？61Agilent1100手動進樣器日常維護Question.如何判斷手動進樣器的密封圈漏？通常結(jié)合兩方面：從進樣器觀察，進樣后將針拔出，若從進樣口或排空管有液體冒出，顯示密封圈磨損。從結(jié)果看：通常有壓力不穩(wěn)定，峰面積或保留時間不穩(wěn)定和殘留嚴重。62Agilent1100手動進樣器日常維護更換轉(zhuǎn)子密封圈。63Agilent1100柱溫箱器使用注意事項及日常維護64Agilent1100柱溫箱器使用注意事項及日常維護連接的管路盡量短，防止熱擴散及峰增寬。如果使用小體積分析柱以及流速小于0.2ml/min時建議使用左邊的柱溫箱(左邊體積較少,3ul).除非特殊應(yīng)用，建議將兩邊溫度設(shè)置一樣。并確保關(guān)好前蓋。65Agilent1100柱溫箱器使用注意事項及日常維護Question如果加熱塊堵塞怎么辦？66Agilent1100柱溫箱器使用注意事項及日常維護Question.如果加熱塊堵塞怎么辦？用一管連接泵與加熱塊出口，開泵進行反沖。67Agilent1100二極管陣列檢測器(G1315B)68Agilent1100二極管陣列檢測器工作原理69Agilent1100二極管陣列檢測器工作原理可變的光進口狹縫系統(tǒng)這一微型狹縫系統(tǒng)是利用硅的機械性能和總體布局微型加工技術(shù)以及精確的制作功能加工而成，它把所需的光學性能－狹縫和光柵－集中組合到一起，成為一個簡單、緊湊的元件。狹縫寬度直接由儀器上的微處理器來控制，并可用為設(shè)定分析方法的一個實驗參數(shù)。光柵用一個凹面全息光柵來實現(xiàn)分光和光譜成像，光柵把入射光束全部分散成組成它的波長，然后把它反射到二極管陣列上。二極管陣列二極管陣列由1024個光電二極管和一個位于陶瓷基座上的電路組成，在190

---950

nm范圍內(nèi)取樣間隔<

1

nm。70Agilent1100二極管陣列檢測器工作原理燈紫外區(qū)域采用有通光狹縫的氘燈作光源，低壓氘氣體的等離子體能發(fā)出190nm到大約800

nm的光?？梢姽猓╒IS）和近紅外光采用低噪音鎢燈得到，其發(fā)射出的光譜范圍為470---950

nm。消色差透鏡（光源透鏡）消色差透鏡接受氘燈及鎢燈發(fā)出的光，將其聚焦后通過流通池。氧化鈥濾光片當進行波長校準時，氧化鈥濾光片用電力驅(qū)動進入光路。流通池底座窗口流通池底座窗口部件把氧化鈥濾光片和流通池分開。流通池室光學單元有一個流通池室，使流通池易于放入光學單元，采用相同的快捷安裝系統(tǒng)可以把各種流通池裝入光學單元，在檢查檢測器的光電性能時，拿走流通池能消除流通池帶來的影響。71Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化72Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化73Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化74Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化75Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化流通池光路長度對信號值的影響

流通池加長得到的信號值就高，盡管在流通池加長時噪音略有增加，而信噪比有較大的增加。例如，見圖8，把流通池長度由6

mm增加到10

mm，噪音增加10

%，而信號增加70

%。

流通池加長會使池體積也有所增加在我們的例子中為5μL

13

μL，這時峰寬也會增加，如圖8所示，在此例的梯度洗脫中對分離度沒有影響。

經(jīng)驗表明，池體積應(yīng)為半峰高處峰體積的1/3。要測定峰體積，把積分后的峰寬乘以流速再除以3。

圖876Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化使用較寬的帶寬有降低噪聲的優(yōu)點，能在整個波長范圍內(nèi)降低噪聲－和使用4

nm帶寬相比采用30

nm帶寬，基線噪聲降低約2.5倍。而信號值是4-nm帶寬的75%，在此例中信噪比增大2倍。77Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化78Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化79Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化80Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化峰寬（響應(yīng)時間）響應(yīng)時間是說明在流通池中光吸收產(chǎn)生突變后出現(xiàn)檢測器信號的快慢，檢測器采用數(shù)值濾波器使響應(yīng)時間與色譜圖中峰寬相適應(yīng)，這一濾波器不影響峰面積和峰的對稱性，正確設(shè)定此濾波器會大大減小基線噪聲（見圖9），但會使峰高略有下降。另外這一濾波器能降低數(shù)據(jù)的速度，優(yōu)化色譜的積分和顯示，能最大限度地減少存儲色譜和光譜的磁盤空間。81Agilent1100二極管陣列檢測器性能優(yōu)化表6列出檢測器對濾波器的選擇。為獲得最佳效果，把峰寬設(shè)定為接近于色譜圖中窄峰的寬度，此時響應(yīng)時間約為峰寬的1/3，這樣會使峰高降低<5

%，峰的加寬不到5

%。在檢測器中峰寬設(shè)定減小會引起峰高增加<5

%，但是基線噪聲增大1.4倍，響應(yīng)時間增大2倍。把峰寬（響應(yīng)時間）增大到推薦值的2倍（過度濾波），則峰高會降低20

%，基線噪聲降低1.4倍。這樣可能會得到最佳的信噪比，但也可能會影響分離度。82Agilent1100DAD故障診斷與提示電源指示燈電源指示燈和主電源結(jié)合在一起，燈亮（綠）時表示電源接通。檢測器狀態(tài)指示燈檢測器狀態(tài)指示燈用于指示下列四種檢測器的狀態(tài)：當檢測器狀態(tài)指示燈關(guān)閉（OFF）時（而電源開關(guān)燈亮），檢測器處于預(yù)運行狀態(tài)，即就緒狀態(tài)，可隨時進行分析。綠燈亮時表明檢測器正在進行分析（運行模式）。黃燈亮時表明檢測器處于未就緒狀態(tài)，這往往是某些特定條件沒有設(shè)定完畢（如剛剛更改設(shè)定之后），或檢測器正在進行自檢。紅燈亮時表明檢測器出現(xiàn)故障，這往往表示檢測器檢查出一個能影響檢測器正常操作的內(nèi)部故障，通常應(yīng)引起重視（如出現(xiàn)泄漏，內(nèi)部元件不正常），這種狀態(tài)總是會使分析中斷。83Agilent1100DAD故障診斷與提示泄漏在檢測器中出現(xiàn)泄漏檢漏系統(tǒng)利用兩個溫度傳感器（泄漏傳感器和安裝在板上的溫度補償傳感器）進行泄漏運算，以此發(fā)出的信號來判斷是否存在泄漏。當出現(xiàn)泄漏時，泄漏傳感器會被溶劑冷卻。因而改變傳感器的電阻，其信號被主板上的泄漏傳感器電路獲得。

(DAM)可能的原因

接頭松動。毛細管破裂。流通池泄漏。建議采取的措施

保證所有接頭緊固。更換破裂的毛細管。更換流通池元件。84Agilent1100DAD故障診斷與提示UV燈不能點亮

在點亮UV燈的一段時間里處理機連續(xù)地監(jiān)測UV-燈的電流，如果在2－5

s內(nèi)UV燈的電流低于電流下限，就出現(xiàn)故障提示?？赡艿脑?/p>

UV燈電源沒有接上。UV燈壞了。MWM板有故障。

電源有毛病。建議采取的措施確保UV燈電源連接牢固。

更換UV燈。

更換DAMMWM板。

更換電源。85Agilent1100DAD日常維護重新校準波長檢測器使用氘燈發(fā)射出的（656.1

nm）和(486

nm)射線進行波長校準，用尖銳的射線校準波長，所得到的精度優(yōu)于用氧化鈥校準波長的結(jié)果。在進行波長校準時，1nm的狹縫自動進入光路，把增益設(shè)定為零，為消除溶劑對吸收的影響，在流通池中注入水進行實驗。校準后，用氧化鈥測試在三個附加波長進行精度確認。在流通池維護，燈更換或其他大修后，如主板或光學元件的更換之后，必須進行波長校準。

波長校準86Agilent1100DAD日常維護氧化鈥測試內(nèi)置氧化鈥濾光片可以在另外的三個波長處進行精度確認，這一測試可以自動評估測試結(jié)果，并提供一張氧化鈥濾光片的吸收光譜圖。光強測試這項測試對光源燈（可見及UV燈）在全部波長范圍內(nèi)的光強進行測試，測試可以自動評估測試結(jié)果，并提供一張光強譜圖。流通池測試這項測試是比較有流通池和沒有流通池時燈的光強，用光強的比值可以衡量流通池吸收的大?。ㄈ缌魍ǔ乇晃廴竞髮獾奈眨?。暗電流的測試這項測試用于各個光電二極管的漏電情況，自動評估測試結(jié)果，并用圖畫方式輸出結(jié)果。濾光片測試這項測試用于確定濾光片馬達是否正確運動，并通過對氧化鈥的吸光度來確定濾光片是否被污染。87Agilent1100DAD日常維護氧化鈥測試氧化鈥測試是對內(nèi)置氧化鈥濾光片的三個特征波長處的吸光度進行測定，進行精度確認。在進行波長校準時，測試開始后1nm的狹縫自動進入光路，為消除溶劑對吸收的影響，在流通池中注入水進行實驗。

氧化鈥測試88Agilent1100DAD日常維護氧化鈥測試結(jié)果測試失敗可能的原因

在流通池內(nèi)有吸收光輻射的溶劑或氣泡。校準不正確。流通池污染光學部件污染（消色差透鏡，窗口）建議采取的措施

流通池中用水做介質(zhì)。重新校準，再次測試。進行流通池測試，如測試失敗，更換流通池窗口。用乙醇和不起毛的布擦洗光學部件。89Agilent1100DAD日常維護光強度測試

這一測試要測定全波長范圍內(nèi)（190--950

nm）氘燈和鎢燈的光強，用四個光譜范圍來評價光強譜圖。此項測試用于確定燈和光學元件的性能。測試開始后1

nm的狹縫自動進入光路，把增益設(shè)定為零，為消除溶劑對吸收的影響，在流通池中注入水進行實驗。光強圖譜的形狀主要決定于燈、光柵和二極管陣列的性能。因此不同儀器的光強圖譜略有差別。90Agilent1100DAD日常維護強度測試評估Agilent化學工作站自動評估四個光譜范圍內(nèi)光強的測定值，并顯示每一范圍內(nèi)的極限值，測量光強的計算值，以及每一范圍測試的成功或失敗。光強測試結(jié)果91Agilent1100DAD日常維護光強測試失敗

可能的原因在流通池內(nèi)有吸收光輻射的溶劑或氣泡。流通池污染光學部件污染（消色差透鏡，窗口）建議采取的措施確保流通池中用水做介質(zhì)，沒有氣泡。進行流通池測試。如測試失敗，更換流通池窗口。用乙醇和不起毛的布擦洗光學部件。92Agilent1100DAD日常維護流通池測試

把流通池裝入檢測器以及把流通池取下，測試全波長范圍內(nèi)（190

---

950

nm)氘燈和鎢燈的光強，測的光強比值表明流通池對光吸收的大小。這一測試用于確定流通池窗口是否被污染。測試開始后1

nm的狹縫自動進入光路，把增益設(shè)定為零，為消除溶劑對吸收的影響，在流通池中注入水進行實驗。流通池測試評估Agilent化學工作站自動計算評估光強值，光強比的大小（典型值在0.5-

0.7

之間）決定于流通池窗口被污染的情況和流通池的類型。

流通池測試結(jié)果93Agilent1100DAD日常維護流通池測試失敗（比值低）可能的原因在流通池內(nèi)有吸收光輻射的溶劑或氣泡。流通池污染建議采取的措施確保流通池中用水做介質(zhì)，沒有氣泡。更換流通池窗口。94Agilent1100DAD日常維護暗電流測試

這項測試用于了解各個光電二極管的漏電情況，可用于檢查在特定波長下會影響線性關(guān)系的漏電光電二極管。測試時狹縫系統(tǒng)退出光路，切斷一切射到二極管陣列上的光線，然后測定每個光電二極管的漏電電流，并用圖顯示。每個二極管漏電電流(用數(shù)值表示)應(yīng)落在限定的范圍（紅色帶）之內(nèi)。

暗電流測試95Agilent1100DAD日常維護暗電流測試暗電流測試結(jié)果。暗電流測試失敗可能的原因

光學單元有毛病。建議采取的措施

更換光學單元96Agilent1100DAD日常維護97Agilent1100DAD日常維護清洗流動池98Question?1.基線噪音大可能由那些原因引起Agilent1100檢測器日常維護99Question?1.基線噪音大可能由那些原因引起

泵壓不穩(wěn)，氣泡，色譜柱污染，系統(tǒng)管路污染，流通池污染，燈強度不足，光學系統(tǒng)老化或污染，參數(shù)設(shè)置不合理Agilent1100檢測器日常維護100Agilent1100其它檢測器使用注意事項及日常維護安捷倫可變波長紫外檢測器使用注意事項.Peakwidth(responsetime):與DAD的意義一致，設(shè)置時請根據(jù)實際需檢測的物質(zhì)的半峰寬而定。燈能量檢測時，流動池一定要充滿水，若里面有其它溶劑或氣泡均會導致失敗。若仍然失敗，可將流動池取出，蓋上蓋板再測，如果合格則流動池臟，否則燈或光路有問題。檢測方法：在工作站中選擇diagnosis窗口然后點擊VWD圖標選擇showmoduletest然后再在測試清單中選intensitytest，最后點擊右下方start的即可，測試結(jié)果會自動顯示。101Agilent1100其它檢測器使用注意事項及日常維護安捷倫可變波長紫外檢測器使用注意事項.

如果流動池被污染可先用以下方法處理:在不連接色譜柱的情況下先用高純水沖洗20分鐘，然后用5％硝酸沖洗2小時，最后再用高純水沖洗至流出液中性即可。如上述方法不果，就需更換流動池的檢測窗。上述處理方法也適用于DAD的流動池。102Agilent1100其它檢測器使用注意事項及日常維護安捷倫熒光檢測器使用注意事項及日常維護.

PMTGAIN:放大因子，該值大則信號高，但噪音也會隨之增高，所以需優(yōu)化。LAMP:有兩種模式，standard和economy。RESPONSETIME:通常用4S。

由于水性流動相長時間留在流動池會有藻類生長，而藻類會產(chǎn)生熒光，所以可添加有機溶劑如5％的乙腈或甲醇。如懷疑流動池被污染可用以下步驟清洗之：1用雙蒸水沖洗30分鐘以上.2用注射器注射65％硝酸入流動池并使其留在流動池約1小時。（注意，為了防止過壓，請緩慢注射).3用雙蒸水沖洗干凈。103Agilent1100其它檢測器使用注意事項及日常維護安捷倫折光示差檢測器使用注意事項及日常維護.溶液瓶和廢液瓶應(yīng)高于泵和檢測器，這樣使流動池產(chǎn)生輕微壓力有助于提高檢測器的性能。RID的耐受壓力最高只有5bar,所以如要串聯(lián)其它檢測器時務(wù)必將RID放在最后。一定要使用控溫功能令光路恒溫，為了防止結(jié)晶應(yīng)將溫度設(shè)置至少高于室溫5℃以上。使用合適的responsetime通常用4S。一定要預(yù)先混合好流動相，如果是四元泵，請使用轉(zhuǎn)接頭(P/N0100-1847)旁路比例閥。某些流動相與柱配合時會造成基線噪音。如乙腈/水作流動相與含氨丙基柱。104Agilent1100其它檢測器使用注意事項及日常維護

RID基線漂移通常是溶劑變化引起的，如乙腈/水混合溶劑乙腈會揮發(fā)。四氫呋喃(THF)會形成過氧化物。某些吸水溶劑等，這些變化都會引起基線的變化從而造成基線漂移。

如果懷疑流動池受污染可用以下方法沖洗：1先用強溶劑沖洗。2使強溶劑在流動池停留約1小時。3用流動相沖干凈。105Agilent1100HPLC日常維護－總結(jié)定定期清洗溶劑過濾頭（35％濃硝酸浸泡1小時，不要使用超聲波清洗）流流動相應(yīng)經(jīng)過0.45um或更小孔徑的濾器過濾，如果使用濾膜，注意有機膜與水膜的區(qū)別(聚四氟乙烯能適用于所有溶劑)根根據(jù)情況更換Purge閥內(nèi)的在線過濾頭（Purge閥打開，純水5ml/min，壓力超過10bar時需更換）注注意清洗在線脫氣機及比例閥，尤其是長期使用水相或緩沖鹽的通路，使用純水沖洗后，再使用甲醇沖洗，可以打開Purge閥，使用5ml/min的流速。污染比較嚴重時，可以使用IPA清洗。

一般的流程，例如

A：BufferB:MeOHC:WaterD:CH3CN

分析：A:B:D=20:30:50

清洗：C100%30min，B100%30min106安如裝有sealwash組件的，無論是否使用緩沖鹽，開泵之前都應(yīng)該使之充滿流動的液體（10%IPA水溶液）并調(diào)流速為20滴/分鐘。正正相色譜、反相色譜切換時應(yīng)使用IPA過渡，長期使用正相，應(yīng)更換正相柱塞密封墊樣樣品進樣之前最好過濾，如果樣品量太少，可以適當抬高進樣針的位置流流動相pH大于9.5或小于2.3時，進樣閥應(yīng)更換tefzel轉(zhuǎn)子密封圈注注意不同檢測器流通池耐壓問題，盡量避免使用pH>9.5的流動相，以防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動相，防止流通池堵塞

VWD40barDAD120barMWD120barFLD20barRID5bar

RID、FLD永遠是最后一個檢測器注注意不同廠家接頭問題，防止?jié)B漏或毀壞色譜柱和接頭

Agilent1100HPLC日常維護107HPLC常用的色譜柱接頭0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.LC/GCMagazine6:788(1988)Agilent1100HPLC日常維護－總結(jié)108Agilent1100HPLC日常維護－總結(jié)毛細管的區(qū)分

Blue0.25mmColor

i.d.Red0.12mmGreen0.17mm109Agilent1100HPLC日常維護－總結(jié)110EMF—早期維護預(yù)警維護信息預(yù)報(EMF)在維修時要更換磨損和受力的元件。在理想的情況下，零部件更換頻率由儀器的使用強度和分析條件所決定，而不決定于預(yù)先設(shè)定的時間間隔。維護信息預(yù)報（EMF）的特點是可以監(jiān)控儀器中特殊元件的使用，并且在超過預(yù)先設(shè)定的時間后立即把信息反饋給用戶，在用戶界面上可以看到提示的信息，提醒用戶按計劃進行維修。Agilent1100HPLC日常維護－總結(jié)111Agilent1100HPLC故障診斷1100指示燈的意義.電源指示燈：位于每個模塊的左下方。把電源打開后，該燈會亮綠色。如果把電源打開后，此燈不亮，請檢查是否有電源輸入。在確認有電源的情況下，請與安捷倫聯(lián)系。112Agilent1100HPLC故障診斷狀態(tài)指示燈：位于各自模塊的右上方。狀態(tài)指示燈的顏色：呈黃色：該儀器在未準備好狀態(tài)(Not-ready)或正在自檢。呈綠色：該儀器正在運行，采集數(shù)據(jù)(Run)。無顏色：該儀器已準備好等待運行(Pre-run)。呈紅色：該儀器檢測到有故障發(fā)生，儀器在錯誤狀態(tài)(Error).113Agilent1100HPLC故障診斷通常儀器在開機后狀態(tài)顯示：脫氣機：無顏色。脫氣機在開機后應(yīng)很快就能達到準備好的狀態(tài)，且在正常情況下，該燈常滅。顯示內(nèi)部真空足夠且密封性好。泵：顯黃色，等待開泵。自動進樣器：自檢正常后應(yīng)無顏色，等待進樣命令。柱溫箱：顯黃色，等待開啟控溫命令。114Agilent1100HPLC故障診斷通常儀器在開機后狀態(tài)顯示：檢測器.VWD:顯黃色，等待開燈命令。DAD與之相同。FLD:無顏色，因為熒光檢測器在不亮燈的情況下可做化學發(fā)光檢測，記住要做熒光檢測一定要開燈。RID:顯黃色，等待purge參比池命令，RID一定要沖洗樣品池和參比池直至兩者光強度一致后才能準備好。115Agilent1100HPLC故障診斷當儀器出現(xiàn)錯誤并亮紅燈時怎樣檢查提示信息。一

首先檢查脫氣機是否也亮紅燈。

若是，請按正常程序關(guān)機然后檢查脫氣機后面是否有一遙控線(與標有remote的接口連接)。

若有，關(guān)機后將之卸下然后單獨再開脫氣機，觀察約8分鐘后是否再現(xiàn)紅色，如果是則脫氣機有問題。否則脫氣機應(yīng)無問題。二若脫氣機不亮紅燈只有其它模塊顯紅燈。在工作站中分別左鍵單擊各個紅色的圖標然后選擇Notreadyinformation(如果圖標上無此選項，請單擊菜單View然后再單擊其下的Fullmenu)。根據(jù)第1點做法直至找出錯誤信息不是提示shutdown的模塊及其信息，根據(jù)此信息就可以查看可能導致此錯誤原因。若不明白此提示信息，請將其記錄下來并與安捷倫聯(lián)系。116Agilent1100HPLC故障診斷常見的錯誤信息及其解決方法：Shutdown:表示該模塊并無問題，是由于其它模塊出現(xiàn)錯誤而導致它也亮紅色。比如其它模塊漏液或脫氣機出錯等。Leak:表示該模塊發(fā)生漏液，此時無需關(guān)機，請檢查該模塊的漏液傳感器周圍是否有液體。如果是，先用紙將之吸干后點擊systemon再檢查液體從何而來。如果不是，請與安捷倫聯(lián)系，這種情況很可能是儀器內(nèi)部元件有問題。造成漏液的主要原因：1色譜柱未擰緊，多數(shù)發(fā)生再更換柱后。這時柱溫箱會顯示Leak。注意，柱溫箱的漏液傳感器在兩加熱塊之間的中間位置。請用吸水紙確認，因為有時單用眼觀察不易察覺。2連接管路兩端未擰緊，或連接管路斷裂。117Agilent1100HPLC故障診斷3進樣閥漏液，如自動進樣器轉(zhuǎn)子墊圈磨損造成漏液。4泵漏液，開泵后將手伸入泵底部，可感到漏液。5冷凝水的形成，如果使用柱溫箱的降溫功能，可能會有冷凝水生成從而使柱溫箱顯示漏液。這種情況下可取消柱溫箱的檢漏功能(在工作站中的instrument菜單下選擇morecolumnthermostat然后選擇取消柱溫箱的檢漏功能).6流動池漏液。118Agilent1100HPLC故障診斷Lampcurrent和UVlampignitedfailed.可能原因：1燈已嚴重老化。請在工作站中的diagnosis界面中查看燈的使用累積時間(viewdiagnosisEMF選擇檢測器).

通常普通氘燈能用1000小時或以上，而長壽命氘燈能用2000小時或以上.2燈連線未接好。3檢測器的主板和或電源損壞。注意，更換燈后建議將燈的使用時間回零：在diagnosis中單擊檢測器圖標，然后選擇showmoduledetails再單擊右邊的帶有扳手的圖標選擇maintenancelogbookentry，在項目中選擇lampreplace,點ok然后在隨后的提示中回答yes即可。119Agilent1100HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過高。1首先擰開排液閥，以純水作流動相并設(shè)流速為5ml/min若壓力超過10bar，應(yīng)先更換排液閥的慮芯。2若排液閥的慮芯沒有堵塞，卸下色譜柱，然后用一兩通代替色譜柱，以水作流動相設(shè)流速為1ml/min。通常壓力不會超過20bar,否則系統(tǒng)可能有堵塞。3若上述的壓力超過20bar,我們可按照從后到前的原則，也就是說先卸下進流動池的連接管接頭，開泵后，若壓力正常則流動池堵塞若仍不正?？蓪⑦@段管另一端也卸下，開泵后再觀察壓力情況。

同樣道理，我們就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流動池入口管；自動進樣器的針及針座；柱溫箱120Agilent1100HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過低，不穩(wěn)定或沒液流。首先擰開排液閥，設(shè)流速1~2ml/min后開泵，觀察有無液流，若有再仔細觀察液流是否有倒吸現(xiàn)象如不能確定可用量筒測量流速的準確性。如上述無液流，或流速不準多數(shù)為主動閥閥芯或主動閥故障，

或泵有嚴重漏液。怎樣大致判斷主動閥抑或其閥芯故障？可用以下方法：當泵運轉(zhuǎn)時用手指輕捏主動閥主體，正常的主動閥能感到有節(jié)奏的脈動，如果沒有，主動閥有問題。如果有則可以將主動閥閥芯取出進行超聲波清洗，如仍有問題，可更換閥芯。注意，千萬不要把整個主動閥放入超聲波清洗這樣會損壞主動閥。若上述流速準確但擰緊排液閥后壓力不穩(wěn)定，請仔細檢查有無漏液。(通常漏液地方：各接口包括色譜柱，泵，進樣閥等)121Agilent1100HPLC故障診斷保留時間不穩(wěn)定。

首先觀察保留時間是否有規(guī)律的變化，并同時觀察壓力是否穩(wěn)定

若壓力穩(wěn)定而保留時間呈有規(guī)律變化，多數(shù)是色譜柱未平衡好，特別是含有鹽的流動相，需較長的時間去平衡。

若壓力穩(wěn)定而保留時間無規(guī)律變化，請檢查溶劑過濾頭及真空腔是否有堵塞。再平衡色譜柱足夠時間，如仍然不佳，可更換一色譜柱。

若壓力不穩(wěn)定，請檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如：漏液，排液時間不足夠，鹽濃度過高導致鹽析，主動閥比例閥內(nèi)漏，等。122Agilent1100HPLC故障診斷峰面積重現(xiàn)性不好。

首先觀察壓力是否穩(wěn)定，以及觀察峰面積變化是否有規(guī)律。

若壓力不穩(wěn)定，請檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如：漏液，排液時間不足夠，鹽濃度過高導致鹽析，主動閥比例閥內(nèi)漏，等。

若壓力穩(wěn)定但峰面積呈無規(guī)律變化，請檢查樣品是否足夠，確認樣品的穩(wěn)定性，必要時用流動相作溶劑重新配制。檢查進樣閥是否漏液。等。若壓力穩(wěn)定且峰面積呈規(guī)律變化，多數(shù)為色譜柱未平衡好。123Agilent1100HPLC故障診斷基線不穩(wěn)定?；€漂移：色譜柱未平衡好，柱溫未穩(wěn)定，流動相變化，等?；€噪音：

可能原因是：流動池有氣泡，流動池被污染，對紫外檢測器可將流動池移走即可確認。色譜柱和或系統(tǒng)受污染。燈能量不足，光路臟。外界因素影響，如電源，溫度和濕度（G1315A），震動，等。

124Agilent1100HPLC故障診斷工作站無法與儀器通訊。安捷倫液相色譜與計算機有兩種通訊方式：1.LAN連接方式：液相與計算機用網(wǎng)線連接，兩者直接連接時用交叉網(wǎng)線。若通過集線器或交換機的話則使用平行網(wǎng)線。2.GPIB