微生物寄生蟲控制

第三章實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲質(zhì)量控制

杜小燕（Ph.D）

email：duduyan@

第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制分類一.微生物和寄生蟲感染的危害性（一）影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（二）影響動(dòng)物生產(chǎn)（三）威脅人類健康（四）污染實(shí)驗(yàn)材料（五）寄生蟲對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響

曾經(jīng)襲擊人類的疫情

鼠疫，鼠跳蚤6世紀(jì)30%-100%；霍亂，雞18世紀(jì)30%-100%；埃博拉，嚙齒類動(dòng)物，1976年50%～90%；艾滋病毒，非洲綠猴1980年61%；瘋牛病，牛1985年100%；禽流感，雞鴨、鴿子1997年33.3%；尼巴病毒，狐蝠1998年50%；猴痘，崗比亞土撥鼠2003年10%實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制分類普通級動(dòng)物

清潔動(dòng)物無特定病原體動(dòng)物無菌動(dòng)物

二、普通動(dòng)物（Conventionalanimals,CV)

是不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動(dòng)物烈性傳染病病原的動(dòng)物。如鼠痘病毒、流行性出血熱病毒等。普通級小鼠和大鼠等級被取消。1、微生物學(xué)特點(diǎn)要求不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病的病原。2、飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)。但仍然對溫度，濕度，飼料，墊料，飲水，衛(wèi)生等有一定控制。3、生理學(xué)特點(diǎn)外觀健康，飲食排泄正常，無異常分泌物，無臨床癥狀，臟器無眼觀病灶。4、應(yīng)用僅可作為生物醫(yī)學(xué)中教學(xué)示教之用?；蜃鳛槟承┛茖W(xué)研究為探索方法而從事的預(yù)試驗(yàn)之用。不可供科研、生產(chǎn)和檢定之用。三、清潔動(dòng)物

(Cleananimals,CL)

清潔動(dòng)物（cleananimal，CL）是指除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對動(dòng)物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原的動(dòng)物。如鼠肝炎病毒、仙臺病毒等。清潔動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等動(dòng)物。犬和猴沒有清潔級。1、微生物特點(diǎn)

清潔級動(dòng)物比普通級動(dòng)物要求排除的微生物和寄生蟲多，但比SPF動(dòng)物少。清潔級動(dòng)物除肉眼觀察無病外，尸體解剖時(shí)，主要臟器、組織無論是肉眼觀還是病理組織切片均應(yīng)無病變。2、來源

清潔動(dòng)物來源于SPF動(dòng)物或無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。3、飼養(yǎng)管理

清潔級動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)中。飼料、墊料、飲用水、籠器具等都經(jīng)過消毒滅菌處理。工作人員需換滅菌工作服、鞋、帽、口罩等進(jìn)入動(dòng)物室進(jìn)行操作。4、應(yīng)用

清潔級動(dòng)物是根據(jù)我國國情而設(shè)立的等級動(dòng)物。它較普通級動(dòng)物健康，又較SPF級動(dòng)物易達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可免受動(dòng)物疾病的干擾，其敏感性與重復(fù)性亦較好。目前在我國已成為適用于科研的標(biāo)準(zhǔn)級別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。四、無特定病原體動(dòng)物（Specificpathogenfreeanimals,SPF)

是指除清潔動(dòng)物應(yīng)排除的病原和寄生蟲外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原和寄生蟲。如綠膿桿菌等。三、清潔動(dòng)物

(Cleananimals,CL)

清潔動(dòng)物（cleananimal，CL）是指除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對動(dòng)物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原的動(dòng)物。如鼠肝炎病毒、仙臺病毒等。清潔動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等動(dòng)物。犬和猴沒有清潔級。1、微生物特點(diǎn)

SPF動(dòng)物除普通級、清潔級動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。2、來源

來源于無菌動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物或悉生動(dòng)物。3.飼養(yǎng)管理

SPF動(dòng)物必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的萬級空氣凈化的屏障系統(tǒng)中，實(shí)行嚴(yán)格的微生物控制。4.應(yīng)用目前國際上公認(rèn)SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是國際標(biāo)準(zhǔn)級別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。它的應(yīng)用價(jià)值在于它無人畜共患病，無主要傳染病，無對實(shí)驗(yàn)研究可能產(chǎn)生干擾的微生物。各種疫苗生產(chǎn)所采用的動(dòng)物應(yīng)為SPF動(dòng)物。1、微生物特點(diǎn)

在動(dòng)物體內(nèi)外任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲。

五、無菌動(dòng)物（Germfreeanimals,GF）指在動(dòng)物體上無可檢出一切生命體。2、來源

剖腹產(chǎn)。用大量抗菌素也可以使普通動(dòng)物暫時(shí)無菌，但這種無菌狀態(tài)是一時(shí)性的，某些殘留的細(xì)菌在適當(dāng)?shù)臈l件下又會在體內(nèi)增殖。即使把體內(nèi)的細(xì)菌全部殺死，它們給動(dòng)物造成的影響卻是無法消除的。如特殊性抗體的存在、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的活化、某些組織或器官的病理變化等。因此，無菌動(dòng)物必須是生來就是無菌動(dòng)物。3、飼養(yǎng)管理

必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的百級空氣凈化的隔離系統(tǒng)中，實(shí)行嚴(yán)格的微生物控制。4、應(yīng)用

種類培育者及育成時(shí)間小鼠Pleasants,1959大鼠Reyniers1946；Gustafsson,1948豚鼠Miyakawa1958;Tanami,1959;兔Wostmann1959;Luckey,1963狗Glimsedt,1946貓Bleby,1969山羊、綿羊Smith,1961,1966豬Whitenair,1960馬Drummond等,1973猴Reyniers,1942雞Reyniers,1943鵪鶉Woodard等,1965;Miles,1966

六.悉生動(dòng)物

（一）悉生動(dòng)物的定義和發(fā)展史

100多年前微生物學(xué)家LouisPasteur認(rèn)為，動(dòng)物的生存是離不開腸道細(xì)菌的。

Nuttall和Thierfelder剖腹產(chǎn)獲得的豚鼠飼養(yǎng)于滅菌的鐘型隔離器里。

1959年P(guān)leasants報(bào)道了無菌小鼠培育成功。稱這類動(dòng)物“germfree”。

1949年Reyniers等提出了“gnotobiotics”24

（二）悉生動(dòng)物分類悉生動(dòng)物或已知菌動(dòng)物(gnotobiotics):確知所帶的其他生命體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物叫已知菌動(dòng)物。與無菌動(dòng)物相同的方法取得和飼養(yǎng)。單菌動(dòng)物(Monognotoxenic)，雙菌動(dòng)物(Dignotoxenic)，

三菌動(dòng)物(Trignotoxenic)

多菌動(dòng)物(Polygnotoxenic)廣義的悉生動(dòng)物包括三大類：無菌動(dòng)物(GF)、已知菌動(dòng)物（GN）無特定病原體動(dòng)物（SPF）。而狹義的悉生動(dòng)物僅指GF和GN動(dòng)物。26生長、繁殖和壽命消化系統(tǒng)血液循環(huán)系統(tǒng)無菌動(dòng)物心臟相對變小，白細(xì)胞少且數(shù)量波動(dòng)范圍小，這一特點(diǎn)與無病原體入侵有關(guān)。免疫系統(tǒng)抗輻射能力27（三）悉生動(dòng)物的特性1.微生物學(xué)研究研究菌叢之間相互頡抗作用，菌叢與宿主關(guān)系。2.寄生蟲學(xué)研究由于沒有寄生環(huán)境，長膜殼絳蟲不能在大鼠體內(nèi)寄生蟲。3.免疫學(xué)研究4.腫瘤學(xué)研究現(xiàn)代研究已證明有些腫瘤與某些細(xì)菌、病毒的直接或間接作用有關(guān)。

（四）無菌動(dòng)物和悉生動(dòng)物的應(yīng)用

5.營養(yǎng)學(xué)研究腸道菌可以合成維生素B和維生素K多種維生素。6.心血管疾病的研究腸道微生物直接影響膽固醇代謝

。7.毒理和藥理學(xué)研究青霉素過敏是因?yàn)槟c道菌代謝過程引起的過敏。

8.其他:

悉生生物醫(yī)學(xué),牙病學(xué),放射學(xué)等研究。1、微生物控制比較種類飼育環(huán)境說明無菌動(dòng)物隔離系統(tǒng)無法檢出任何生命體悉生動(dòng)物隔離系統(tǒng)確知帶有的微生物SPF動(dòng)物屏障系統(tǒng)確知不帶有的微生物清潔動(dòng)物屏障系統(tǒng)確知不帶有的微生物普通動(dòng)物開放系統(tǒng)微生物情況不明確七、各級別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的比較2、對科研實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的比較

GFSPFCLCV傳染病+++±試驗(yàn)結(jié)果明確明確明確有疑問用動(dòng)物數(shù)少少較少多或大量統(tǒng)計(jì)價(jià)值很好可能好較好不準(zhǔn)確長期實(shí)驗(yàn)

好好可能好困難死亡率很少少較少高長期實(shí)驗(yàn)成活率100%90%80%40%實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)可能可能可能不可能結(jié)果討論價(jià)值很高高較高有疑問包括：人獸共患病、動(dòng)物烈性傳染病、一般性疾病（含寄生蟲疾?。?。表現(xiàn)形式：顯性感染、隱性感染、病原攜帶狀態(tài)、潛伏感染等?；緱l件：傳染源、傳播途徑、易感動(dòng)物。人獸共患病——指人類也可感染發(fā)病的一類動(dòng)物疾病。第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見感染性疾病一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重要的人獸共患病

（1）流行性出血熱

（2）弓形蟲病

（3）淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎

（4）沙門菌病

（5）狂犬病

（6）猴B病毒

（7）猴結(jié)核病1．流行性出血熱流行性出血熱為人獸共患??；引起該病的病毒主要存在于野生嚙齒類動(dòng)物。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，多呈隱性感染和持續(xù)帶病毒狀態(tài)，可無明顯臨床癥狀和病理改變。1.病原學(xué)引起流行性出血熱的病毒屬漢坦病毒,

單鏈RNA結(jié)構(gòu)，有囊膜，可凝集鵝的紅血球。該病毒能在多種細(xì)胞中生長，且細(xì)胞病變不明顯。此病毒對環(huán)境和理化因素的抵抗力較差。

2.流行病學(xué)（1）傳染源：主要是野鼠，以黑線姬鼠和褐家鼠為代表，可在實(shí)驗(yàn)大鼠等嚙齒類動(dòng)物中流行。近年發(fā)現(xiàn)，該病毒可由實(shí)驗(yàn)大鼠傳播給人。黑線姬鼠褐家鼠（2）傳播途徑：主要是動(dòng)物源性傳播，在野外主要是黑線姬鼠和褐家鼠感染大鼠。受感染的大鼠可向外界排毒，污染環(huán)境，污染塵埃飛揚(yáng)形成氣溶膠吸入感染被認(rèn)為是主要的傳播途徑。

（3）易感者：主要是人，其次為大鼠、小鼠、豚鼠、兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。動(dòng)物感染后可不發(fā)病，而人則發(fā)病。

3.癥狀人感染后出現(xiàn)頭痛、眼眶痛、腰痛等“三痛”癥狀，臉、脖子、胸部紅腫等“三紅”體征，經(jīng)過低血壓期、少尿期甚至尿閉期，最后到多尿期。有發(fā)熱、頭痛等類感冒癥狀，個(gè)別病例嚴(yán)重時(shí)并發(fā)急性心力衰竭，可導(dǎo)致死亡。4.診斷多數(shù)易感動(dòng)物對該病毒表現(xiàn)為無癥狀感染，其診斷主要靠血清特異性抗體檢測，也可在感染大鼠的肺組織中查出特異性病毒抗原。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和免疫熒光抗體試驗(yàn)等。

5.預(yù)防與控制由于野鼠是本病的主要傳染源和病毒攜帶者，因此消滅野鼠，防止野鼠進(jìn)入動(dòng)物飼養(yǎng)室和實(shí)驗(yàn)室是預(yù)防該病的關(guān)鍵措施。定期做血清學(xué)檢查具有重要意義。無菌剖腹取胎術(shù)和屏障環(huán)境飼養(yǎng)可根除該病毒感染。2．弓形蟲病

本病是由屬孢子綱的龔地弓形蟲引起的，能夠在人與動(dòng)物之間傳染的重要人獸共患病。小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、犬和猴為中間宿主，貓為終末宿主。弓形蟲在終末宿主的腸上皮細(xì)胞內(nèi)完成有性生殖隨糞便排出卵囊，在體外完成孢子化過程成為侵襲性卵囊，中間宿主動(dòng)物吞食侵襲性卵囊后，在其體內(nèi)進(jìn)行無性生殖，主要經(jīng)消化道感染，吸血昆蟲也是本病的傳播者。（1）病原學(xué)

龔地弓形蟲依其不同發(fā)育階段有滋養(yǎng)體、包囊、裂殖體、配子體和卵囊出現(xiàn)在中間宿主和終宿主貓的體內(nèi)，而裂殖體、配子體和卵囊則只出現(xiàn)在終宿主貓的體內(nèi)。（2.）流行病學(xué)A傳染源：終末宿主（貓）；中間宿主（小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、犬、猴、人）。B傳播途徑：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人誤食含弓形蟲成熟卵囊的食物，或含弓形蟲包囊的肉類和乳類，即可發(fā)病。C易感者：貓、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、犬、猴、人。（3）癥狀

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人的主要病變是在腸道、眼、心、腦、肺、肌肉、肝、脾等器官，形成肉芽腫性炎癥和壞死，并引起相應(yīng)癥狀。病貓表現(xiàn)為稽留熱、精神萎靡、食欲減退、便秘、呼吸困難、四肢和全身肌肉強(qiáng)直、腹股溝淋巴結(jié)腫大。

圖3圖4圖5（5）診斷檢查弓形蟲，間接血凝試驗(yàn)。（6）預(yù)防與控制消滅患病動(dòng)物，每天更換消毒墊料和籠具。3．淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒引起的以神經(jīng)系統(tǒng)異常為特征的人獸共患傳染病。（1）傳染源：感染LCM病毒的野小鼠、無癥狀帶病毒小鼠。（2）傳播途徑：接觸帶病毒野小鼠或?qū)嶒?yàn)小鼠的分泌物、排泄物、吸血昆蟲傳播，以及胎盤垂直傳播等。（3）易感者：小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗等，人亦易感。

（4）癥狀

在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多呈隱性感染，小鼠感染后可不出現(xiàn)癥狀。人感染后表現(xiàn)類似流感樣癥狀，嚴(yán)重者侵犯中樞神經(jīng)引起腦膜炎等。（5）診斷

LCM病毒通常是無癥狀感染。懷疑本病時(shí)，可將患病動(dòng)物的血清、腦脊液或病變組織接種在SPF小鼠腦內(nèi)，SPF小鼠4-5天后死亡。亦可用血清方法檢測LCM病毒抗體。4．狂犬病

又稱恐水癥。是由狂犬病病毒感染犬引起的以極度興奮、狂燥不安、流涎、攻擊人獸為特征的一種高度接觸性人獸共患病。病毒通過患病犬或帶毒犬的咬傷而傳給正常動(dòng)物或人。也可通過消化道和呼吸道及損傷皮膚、粘膜感染。本病沒有明顯的流行季節(jié)?？袢畟魅静W(xué)（1）傳染源：主要是犬、其次是攜帶病原的貓、豬及牛、馬等家畜和野獸等溫血?jiǎng)游?。自然界中，以野生?dòng)物如狼、狐、吸血蝙蝠等為主。（2）傳播途徑：主要通過咬傷傳播，也可由帶病毒唾液經(jīng)各種傷口和抓傷、舔傷的黏膜和皮膚入侵。（3）易感者：人、各種畜類，尤其是犬科和貓科的動(dòng)物。癥狀

動(dòng)物：犬狂暴型、犬麻痹型。人感染后的臨床表現(xiàn)：恐水、怕風(fēng)、恐懼不安、咽肌痙攣、進(jìn)行性癱瘓，甚至死亡。診斷

典型的癥狀結(jié)合病史，尸檢動(dòng)物腦組織內(nèi)基氏小體可確診。預(yù)防與控制

24小時(shí)內(nèi)注射狂犬疫苗。對可疑動(dòng)物要隔離觀察，病死動(dòng)物應(yīng)予焚毀或深埋處理。捕殺野犬、管理和免疫家犬和家畜（注射獸用狂犬病毒疫苗）。5．沙門氏菌病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的沙門菌病主要發(fā)生于小鼠和豚鼠，是由鼠傷寒沙門菌和腸炎沙門菌引起的以腸炎、敗血癥為特征的一種傳染病。野鼠是本病的主要傳染源。6．猴B病毒感染猴B病毒又稱猴皰疹病毒。猴是B病毒的自然宿主，感染率可達(dá)10%-60%。本病的感染途徑包括消化道、呼吸道及外傷。人感染后表現(xiàn)出腦脊髓炎，多數(shù)病人發(fā)生死亡。6．猴B病毒感染猴B病毒又稱猴皰疹病毒。猴是B病毒的自然宿主，感染率可達(dá)10%-60%。本病的感染途徑包括消化道、呼吸道及外傷。人感染后表現(xiàn)出腦脊髓炎，多數(shù)病人發(fā)生死亡。7．猴結(jié)核病

由分枝桿菌屬結(jié)核桿菌引起的、以動(dòng)物多種組織器官中形成結(jié)節(jié)性肉芽腫和干酪樣壞死為特征的一種人獸共患傳染病。結(jié)核病人和患病動(dòng)物是本病的傳染源，尤其是開放性結(jié)核患者。主要通過空氣傳播，亦可通過患病動(dòng)物排出的糞尿等排泄物污染飼料和引水而感染其它動(dòng)物?；甲訉m結(jié)核和乳腺結(jié)核的動(dòng)物可垂直感染其后代。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的主要烈性傳染病

（1）鼠痘（2）兔出血癥（兔瘟）

（一）鼠痘

鼠痘又稱為小鼠傳染性脫腳病，是由鼠痘病毒感染引起的小鼠烈性傳染病，患病動(dòng)物往往未出現(xiàn)癥狀即死亡，死亡率高達(dá)90%以上。(1)病原學(xué)

鼠痘病毒屬痘病毒科，雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，包膜上有血球凝集素，可凝集雞的紅細(xì)胞。鼠痘病毒與其他痘病毒之間的抗原關(guān)系密切，血清學(xué)上有明顯的交叉反應(yīng)。鼠痘病毒對干燥、低溫有較強(qiáng)的抵抗力，但可被100℃以上高溫及紫外線迅速殺死。(2)流行病學(xué)A傳染源：病小鼠、無癥狀帶病毒小鼠。

B傳播途徑：接觸病鼠患處滲出液、分泌

物及其污染物品。C易感動(dòng)物：小鼠、尤其是A、C3H、DBA/2、BALB/c、CBA等品系。幼鼠和衰老小鼠對本病特別易感，且常呈致死性。但本病在野鼠中較少發(fā)生。

(3)癥狀小鼠肢體和尾巴嚴(yán)重水腫、潰瘍，最后壞死脫落，故稱脫腳病。(4)診斷根據(jù)流行病學(xué)、癥狀特征、病毒分離鑒定、血清學(xué)檢查可作診斷。血清學(xué)檢查方法主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。

(5)預(yù)防與控制定期作血清學(xué)監(jiān)測，防止將傳染源引入動(dòng)物種群和實(shí)驗(yàn)室，對可疑小鼠要隔離檢疫，證實(shí)后應(yīng)消滅整個(gè)感染鼠群。一切可能受污染的物品要高壓消毒，房間用福爾馬林等消毒劑熏蒸。接種牛痘疫苗可預(yù)防此病。

（二）兔出血癥（兔瘟）

是由兔出血癥病毒引起的以呼吸道出血及實(shí)質(zhì)器官水腫、淤血和出血變化為主要特征的一種急性、高度接觸性傳染病。該病常見青年兔和成年兔，仔兔常呈慢性經(jīng)過。病兔和隱性感染兔是該病發(fā)生的主要傳染源。三、其它微生物和寄生蟲感染

（1）鼠肝炎病毒感染

（2）仙臺病毒感染

（3）鼠肺支原體病

（4）嗜肺巴斯德桿菌病

（5）小鼠呼腸孤3型病毒感染

（6）球蟲病

（7）犬細(xì)小病毒感染

（8）犬瘟熱

第四節(jié)衛(wèi)生防疫與隔離措施

不應(yīng)采取疫苗接種或藥物治療：

一、可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而使實(shí)驗(yàn)無效。如使抗生素或磺胺類藥物可使動(dòng)物肝、膽、腎等臟器組織損傷，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；二、經(jīng)過治療或免疫的動(dòng)物成為潛在的傳染源。如小鼠肝炎病毒，雖用疫苗免疫可以產(chǎn)生免疫力，但有些小鼠仍可帶毒；三、對小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采取治療措施，經(jīng)濟(jì)上也不合算。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的防疫原則

1、平時(shí)的預(yù)防措施

2、發(fā)生疫病時(shí)的撲滅措施

3、消毒措施