動(dòng)物棘球蚴病（包蟲?。┓乐渭夹g(shù)規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB1507/TXXXX—XXXX前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意，本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由呼倫貝爾市農(nóng)牧業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：呼倫貝爾市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：格根塔娜、余興邦、王冠玉、邱凱、王巍、田宗民、那仁滿都拉、連俊琪、李穎、賈長(zhǎng)生、王志剛、許楊、木其熱、楊旭麗、孫紅霞、安冬動(dòng)物棘球蚴?。òx?。┓乐渭夹g(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物棘球蚴病（包蟲?。┑囊?guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、診斷（病原及其形態(tài)、流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室診斷、結(jié)果判定）、疫情報(bào)告、疫情處置、預(yù)防控制、人員防護(hù)和無(wú)害化處理。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物棘球蚴病（包蟲?。┑姆乐巍Ｒ?guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB36195-2018畜禽糞便無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范NY/T1466-2018動(dòng)物棘球蚴病診斷技術(shù)病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。棘球蚴病又名包蟲病(Hydatiddisease)。是棘球絳蟲的幼蟲寄生在牛、綿羊、山羊、豬及人的各臟器（主要是肝臟，其次是肺臟，或脾、腎、腦等）所致的一種人獸共患寄生蟲病。診斷病原及其形態(tài)棘球蚴?。òx病）病原為棘球蚴，是棘球絳蟲的幼蟲期。細(xì)粒棘球絳蟲成蟲：寄生在犬、狼、狐貍等肉食動(dòng)物的小腸里，是一種很小的絳蟲，體長(zhǎng)2.0～9.2mm。具有2～5個(gè)體節(jié)，多數(shù)3個(gè)體節(jié)。頭節(jié)有吻突,上具28～40個(gè)大鉤和小鉤，排列呈2圈。生殖孔位于體節(jié)一側(cè)的中央稍后處。睪丸32～65個(gè)，多數(shù)分布于生殖孔水平的前半部。陰莖囊長(zhǎng)0.5毫米。卵巢瓣?duì)?，呈馬蹄形。卵黃腺分瓣或塊狀。子宮在成熟體節(jié)呈管狀，直立中央，孕節(jié)子宮則呈囊狀,并有側(cè)枝,內(nèi)含500～800個(gè)圓形或卵圓形的六鉤蚴蟲卵。幼蟲（棘球蚴）：寄生于家畜的肝臟、肺臟以及其他器官，呈包囊狀，從黃豆大到籃球大，囊內(nèi)充滿液體。囊壁較厚不透明，分兩層，外層為角質(zhì)層，內(nèi)層為生發(fā)層。由生發(fā)層長(zhǎng)出砂粒樣的小囊，稱為生發(fā)囊其內(nèi)壁上有許多頭節(jié)（也叫原頭蚴）。另外，也可由生發(fā)層直接長(zhǎng)出頭節(jié)。這些頭節(jié)和生發(fā)囊部分附著在囊壁生發(fā)層上，部分脫落在囊液中，眼觀呈細(xì)砂狀，故稱“棘球砂”。多房棘球絳蟲成蟲（多房棘球絳蟲）：寄生在犬等肉食動(dòng)物的小腸里，外形和結(jié)構(gòu)都與細(xì)粒棘球絳蟲相似，但蟲體更小，長(zhǎng)僅為1.2～3.7mm，頭節(jié)、頂突、小鉤和吸盤等都相應(yīng)偏小，頂突小鉤為13～34個(gè)。蟲體常有4～5個(gè)節(jié)片。成節(jié)生殖孔位于節(jié)片中線偏前，睪丸數(shù)較少，為26～36個(gè)，都分布在生殖孔后方。孕節(jié)子宮為簡(jiǎn)單的囊狀，無(wú)側(cè)囊，內(nèi)含蟲卵187～404個(gè)。幼蟲（泡球蚴）：寄生在野生嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)。淡黃色或白色的囊泡狀團(tuán)塊，囊泡圓形或橢圓形，直徑為0.1～0.7cm，內(nèi)含透明囊液和許多原頭蚴，或含膠狀物而無(wú)原頭蚴。囊泡外壁角皮層很薄且常不完整，整個(gè)泡球蚴與宿主組織間無(wú)纖維組織被膜分隔。泡球蚴多以外生性出芽生殖不斷產(chǎn)生新囊泡，長(zhǎng)入組織，少數(shù)也可向內(nèi)芽生形成隔膜而分離出新囊泡。一般1～2年即可使被寄生的器官幾乎全部被大小囊泡占據(jù)。呈葡萄狀的囊泡群帶可向器官表面蔓延至體腔內(nèi)，猶如惡性腫瘤。流行病學(xué)易感動(dòng)物綿羊最易感，其次為山羊、牛、豬等草食和雜食動(dòng)物，人亦感染。傳染源帶棘球絳蟲蟲卵的犬糞便（感染中間宿主）、被棘球蚴感染的家畜內(nèi)臟（感染終末宿主）。傳播途徑棘球蚴病（包蟲?。└腥臼墙?jīng)過消化道途徑，在中間宿主家畜和終末宿主犬科動(dòng)物之間循環(huán)傳播。終末宿主犬、狼、狐貍等犬科動(dòng)物把含有棘球絳蟲的孕卵節(jié)片和蟲卵隨糞便排出體外而污染牧草、牧地和水源。當(dāng)中間宿主羊、牛等通過吃草飲水吞下蟲卵后，卵膜因胃酸作用被破壞，六鉤蚴溢出，鉆入腸黏膜血管，隨血流達(dá)到全身各組織，逐漸生長(zhǎng)發(fā)育成棘球蚴，最常見的寄生部位是肝臟和肺臟。當(dāng)終末宿主吃了含有棘球蚴的臟器，經(jīng)兩個(gè)半月到三個(gè)月時(shí)間在腸道內(nèi)發(fā)育成細(xì)粒棘球絳蟲，再隨糞便排出體外感染中間宿主，如此循環(huán)傳播感染。流行特點(diǎn)棘球蚴?。òx?。┒嗔餍杏谀羺^(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)，其他地區(qū)多為散發(fā)。多宿主間循環(huán)傳播是造成該病流行的重要因素，畜犬混養(yǎng)和內(nèi)臟喂犬等傳統(tǒng)飼養(yǎng)習(xí)慣加劇了棘球蚴?。òx?。┑牧餍小＜胰腥韭矢?、驅(qū)蟲質(zhì)量無(wú)法保障等因素一定程度上增加了棘球蚴?。òx?。┑姆揽仉y度。臨床癥狀棘球蚴在家畜（羊、牛、駱駝、豬）和人寄生過程中，會(huì)壓迫所寄生的臟器及周圍組織，引起組織萎縮和機(jī)能障礙。肝臟寄生時(shí)能導(dǎo)致消化失調(diào)，出現(xiàn)黃疸，肝區(qū)壓痛明顯；肺臟寄生時(shí)會(huì)出現(xiàn)咳嗽、喘息和呼吸困難。代謝產(chǎn)物被吸收后，使周圍組織發(fā)生炎癥和全身過敏反應(yīng)，嚴(yán)重者可致死。棘球絳蟲對(duì)犬的致病作用不明顯，一般情況不表現(xiàn)臨床癥狀。剖檢變化剖檢法見附件1。在家畜臟器（主要是肝和肺）表面或內(nèi)部發(fā)現(xiàn)白色、半透明、表面光滑、觸之堅(jiān)韌、壓之有彈性、叩診時(shí)有震顫感的典型包囊，切開時(shí)有囊液流出，將囊液沉淀后用肉眼或在顯微鏡下看到許多生發(fā)囊與原頭蚴。實(shí)驗(yàn)室診斷鏡檢將采集的疑似包囊病灶樣品,以4%福爾馬林鹽水固定,采用常規(guī)組織學(xué)技術(shù)染色檢測(cè)。顯微鏡下觀察，結(jié)締組織下出現(xiàn)過碘酸雪夫氏(PAS)陽(yáng)性無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角質(zhì)層,內(nèi)層為具有細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的生發(fā)膜,即可視為棘球蚴的特征性結(jié)構(gòu)。可育囊內(nèi)或棘球砂中出現(xiàn)原頭蚴也是棘球蚴?。òx病）病原的診斷特征。病原學(xué)診斷家畜棘球蚴?。òx?。┡K器檢查重點(diǎn)檢查肝、肺和腎等實(shí)質(zhì)器官，發(fā)現(xiàn)包囊，可判定為棘球蚴?。òx病），檢查方法參見附件1。若肉眼不能鑒別的疑似包囊病灶樣品，需經(jīng)病理切片檢查或DNA檢查確認(rèn)包囊性質(zhì)。犬科動(dòng)物棘球絳蟲檢查檢查犬科動(dòng)物小腸內(nèi)的棘球絳蟲及其感染程度。剖（割）檢和蟲體檢測(cè)方法見附件2。犬糞抗原檢測(cè)對(duì)棘球蚴?。òx?。┝餍袇^(qū)終末宿主（家/牧羊犬）糞便樣品用抗體夾心ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性結(jié)果表明該樣品中含棘球絳蟲蟲體代謝物（分泌物）、破碎物或蟲卵等抗原。操作方法參見附件3。血清學(xué)診斷間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（IHA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）上兩述檢測(cè)方法按照《動(dòng)物棘球蚴病診斷技術(shù)》（NY/T1466-2018）要求進(jìn)行操作。分子生物學(xué)診斷按照《動(dòng)物棘球蚴病診斷技術(shù)》（NY/T1466-2018）要求進(jìn)行操作。結(jié)果判定根據(jù)4.5.1鏡檢結(jié)締組織下出現(xiàn)過碘酸雪夫氏(PAS)陽(yáng)性無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角質(zhì)層,內(nèi)層為具有細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的生發(fā)膜，4.5.2.1發(fā)現(xiàn)有棘球蚴包囊、囊液有原頭蚴、4.5.4分子生物學(xué)診斷陽(yáng)性病例，即可確診為棘球蚴?。òx?。┎±８鶕?jù)4.5.2.2犬科動(dòng)物棘球絳蟲檢查出蟲體，可確診為犬棘球絳蟲病例。根據(jù)4.5.2.3可判定為犬疑似感染棘球絳蟲病。根據(jù)4.5.3.1，4.5.3.2檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，可判定為疑似感染棘球蚴?。òx?。┎±Ｒ咔閳?bào)告任何單位和個(gè)人發(fā)現(xiàn)疑似病例后,應(yīng)當(dāng)及時(shí)向當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告。動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告并確認(rèn)后,按《動(dòng)物疫情報(bào)告管理辦法》有關(guān)規(guī)定及時(shí)上報(bào)。并及時(shí)向同級(jí)獸醫(yī)行政主管部門報(bào)告。應(yīng)準(zhǔn)確報(bào)告疫情發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)，感染動(dòng)物種類、數(shù)量、病理變化、診斷情況，流行病學(xué)和疫源追蹤情況，已采取的控制措施，疫情報(bào)告單位、負(fù)責(zé)人、報(bào)告人及聯(lián)系方式等。疫情處置疫情確認(rèn)棘球蚴?。òx病）疫情由縣級(jí)以上獸醫(yī)主管部門根據(jù)疫病流行特點(diǎn)、臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果予以確認(rèn)。病畜、病變臟器、污染物品及環(huán)境的處理對(duì)病畜立即隔離，限制移動(dòng)。對(duì)病變臟器采用高溫、焚燒或化制等方式進(jìn)行無(wú)害化處理。對(duì)羊舍、活動(dòng)場(chǎng)地、器具、墊料、飼草和糞便等應(yīng)用10%的氫氧化鈉溶液噴灑或火焰消毒處理。感染犬只、污染物品及環(huán)境的處理對(duì)患病犬或者檢測(cè)陽(yáng)性犬隔離，按每公斤體重25～30mg的劑量，每天一次，連續(xù)五天投喂，收集糞便并進(jìn)行無(wú)害化處理。對(duì)犬舍、活動(dòng)場(chǎng)地、器具、墊料、飼料和糞便等應(yīng)用10%的氫氧化鈉溶液噴灑或火焰消毒處理。預(yù)防控制堅(jiān)持預(yù)防為主，綜合防治，建立政府主導(dǎo)，部門配合，全社會(huì)共同參與的防治機(jī)制。犬只的防控犬只驅(qū)蟲按犬只每公斤體重5～10mg的劑量一次性口服吡喹酮，重點(diǎn)旗市區(qū)每4～6周驅(qū)蟲一次，一年8～12次，非重點(diǎn)旗市區(qū)一年驅(qū)蟲不少于4次。投藥前家犬應(yīng)禁食12小時(shí)，然后將藥片夾在食物中（如饅頭、肉等，或用含誘食劑的吡喹酮）進(jìn)行投喂，確認(rèn)犬吞服后進(jìn)行犬只驅(qū)蟲登記。犬只登記管理完善家犬登記管理，全面推行家犬拴養(yǎng)，因地制宜實(shí)施限養(yǎng)。應(yīng)及時(shí)撲滅陽(yáng)性犬及流浪犬，嚴(yán)格管控犬只數(shù)量。犬只驅(qū)蟲后糞便的處理收集犬只驅(qū)蟲后5天內(nèi)的糞便，采用深埋、焚燒或10%的氫氧化鈉溶液消毒等方式進(jìn)行無(wú)害化處理，防止蟲卵污染環(huán)境。免疫疫苗選擇采用羊包蟲病疫苗（含細(xì)粒棘球蚴Eg95抗原）進(jìn)行羊免疫。疫苗的保存、運(yùn)輸在2～8℃下保存，避免高溫和陽(yáng)光直射，忌劇烈搖蕩。疫苗稀釋后，如不能當(dāng)日用完，可在-20℃凍存，但只能凍融1次，不可反復(fù)凍融使用。疫苗的接種對(duì)新生家畜進(jìn)行兩次抗細(xì)粒棘球蚴病疫苗接種，間隔一個(gè)月。以后每年進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，強(qiáng)化免疫半個(gè)月后開展免疫抗體合格率評(píng)價(jià)。免疫要求接種的羊必須臨床表現(xiàn)健康，疫苗注射當(dāng)天早晨應(yīng)禁飼。疫苗使用前要逐瓶檢查，藥瓶應(yīng)無(wú)破損、真空包裝完整，瓶簽上疫苗的名稱、批號(hào)、有效日期、檢驗(yàn)號(hào)碼等必須清楚。包裝破損、破乳分層、顏色改變等現(xiàn)象的疫苗不得使用。疫苗使用前應(yīng)置于室溫（22～25℃）2小時(shí)，使用時(shí)充分搖勻，保持勻質(zhì)。疫苗啟封后，24小時(shí)內(nèi)用完。按瓶簽注明的頭份，用滅菌生理鹽水稀釋，每只羊頸部皮下注射1mL。免疫效力評(píng)價(jià)包蟲免疫21天后采血，檢測(cè)羊的免疫抗體水平，評(píng)價(jià)免疫效果。不良反應(yīng)處置出現(xiàn)不良反應(yīng)要及時(shí)在羊皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素1mL，視病情緩解程度，20分鐘后重復(fù)注射相同劑量1次；肌肉注射鹽酸異丙嗪100mg，地塞米松磷酸鈉10mg（孕羊不得使用）。監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)對(duì)象綿羊、山羊、牛等中間宿主，犬只等終末宿主。監(jiān)測(cè)方法對(duì)家畜按4.5.2.1、4.5.3、4.5.4進(jìn)行監(jiān)測(cè)。對(duì)犬等終末宿主可按4.5.2.2，4.5.2.3進(jìn)行監(jiān)測(cè)。初次監(jiān)測(cè)應(yīng)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。監(jiān)測(cè)范圍、時(shí)間及數(shù)量依據(jù)每年的《呼倫貝爾市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》要求進(jìn)行采樣監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)結(jié)果處理及時(shí)向當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告監(jiān)測(cè)結(jié)果。判斷為患病動(dòng)物或檢測(cè)陽(yáng)性動(dòng)物時(shí)，按6.1、6.2和6.3進(jìn)行處置，以及按7.1、7.2和7.3進(jìn)行預(yù)防控制。檢疫監(jiān)管加強(qiáng)對(duì)屠宰檢疫監(jiān)管，牛羊等牲畜實(shí)行定點(diǎn)屠宰。對(duì)完善屠宰場(chǎng)點(diǎn)無(wú)害化處理設(shè)備設(shè)施建設(shè)，感染棘球蚴?。òx?。┘倚蟮呐K器采取無(wú)害化處理，禁止將病變內(nèi)臟直接喂犬和隨處丟棄。宣傳培訓(xùn)在開展驅(qū)蟲、免疫工作前對(duì)專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，提高專業(yè)人員的技術(shù)水平；加強(qiáng)對(duì)棘球蚴?。òx病）防治知識(shí)、政策和主要措施等內(nèi)容的宣傳。人員防護(hù)在接觸終末宿主糞便、棘球絳蟲蟲體時(shí)，應(yīng)穿戴連體工作服、膠靴，帶一次性口罩、手套。連體工作服、一次性口罩、手套用后應(yīng)煮沸或銷毀，膠靴用10％次氯酸浸泡或高溫、高壓殺滅蟲卵。無(wú)害化處理上文中提到的病死畜、病變臟器、污染物品及環(huán)境的處理依據(jù)《病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)［2017］25號(hào)）、《畜禽糞便無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》（GB/T36195-2018）要求進(jìn)行無(wú)害化處理。附件1：剖檢法檢查家畜棘球蚴（包蟲）病操作方法附件2：犬科動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲的蟲體檢查（測(cè)）方法附件3：犬科動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲糞抗原檢測(cè)方法附件1：剖檢法檢查牛羊棘球蚴（包蟲）病操作方法1剖檢法國(guó)際公認(rèn)的剖檢法，對(duì)牛羊屠宰后進(jìn)行棘球蚴病感染調(diào)查。2檢查用品大搪瓷盤、解剖刀、剪刀、手術(shù)刀、平皿、記號(hào)筆、醫(yī)療垃圾袋、尸體袋、水桶。3檢查方法3.1被檢牛羊登記、編號(hào)3.2剖檢3.3內(nèi)臟檢查檢查前做好個(gè)人安全防護(hù)。取出剖檢被檢牛羊的胃、腸等消化器官，仔細(xì)檢查體腔內(nèi)心、肝、肺、腎及脾等臟器外表面，有無(wú)包囊或小白點(diǎn)形的囊狀物。將帶包囊和小白點(diǎn)狀物的臟器從體腔內(nèi)取出，用清水冼去血污，置入瓷盤上。3.4檢囊首先肉眼逐區(qū)觀察臟器表面，對(duì)于表層明顯可見的包囊先切開，看其結(jié)構(gòu)。然后，用手逐區(qū)觸摸臟器，發(fā)現(xiàn)臟器實(shí)質(zhì)內(nèi)囊狀物時(shí)，切開深層囊，觀其結(jié)構(gòu)。幼年羊包囊處于發(fā)育初期，其形態(tài)和大小不同于成年羊包囊，呈小白點(diǎn)狀，囊徑小于0.5cm，不易觀察，生長(zhǎng)在臟器表面和內(nèi)部。檢查辦法應(yīng)先肉眼仔細(xì)逐區(qū)觀察臟器表面，將表面所有可疑小白點(diǎn)囊狀物"#"字型切下，放入平皿。然后，將被檢臟器按順序切成2～5mm的薄片，逐片用手觸摸，肉眼檢查，發(fā)現(xiàn)囊狀物，用"#"字型切下，放入平皿。4判定結(jié)果4.1包囊判定4.1.1包囊位于臟器的實(shí)質(zhì)內(nèi)，周圍由宿主結(jié)締組織包圍，呈灰白色，有半透明感。4.1.2囊壁粉皮樣白色，切開囊壁，可見囊腔，囊液透明無(wú)色。含囊砂(原頭蚴)和子囊或無(wú)。4.1.3幼齡羊大多形成0.5cm以下小白點(diǎn)狀的包囊，具以下特征：4.1.3.1小囊外觀呈珠狀，表面光澤，位于臟器包膜之下，有很強(qiáng)的觸感，質(zhì)地堅(jiān)韌有彈性；4.1.3.2將囊沿中軸切開，具明顯囊腔，其內(nèi)含少量透明囊液，壁白色。4.2包囊計(jì)數(shù)根據(jù)上述特征結(jié)構(gòu)，按不同臟器進(jìn)行包囊計(jì)數(shù)，測(cè)囊徑范圍，登記。5被檢物處理被檢臟器查完后煮沸或焚燒做無(wú)害化處理。附件2：犬科動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲的蟲體檢查（測(cè)）方法1材料的采集和保存動(dòng)物死亡后盡快取下小腸，將兩端扎緊，放入巳編號(hào)的塑科袋或金屬容器內(nèi)，盡快送往實(shí)驗(yàn)室。長(zhǎng)距離運(yùn)輸時(shí)，可將材料袋擱置于冰塊上，或?qū)⑿∧c扎好浸泡在固定液內(nèi)（4-10%的甲醛溶液），也可將固定液注入腸腔內(nèi)。未固定的材料要盡快檢查或冷凍待檢。蟲卵對(duì)低溫的抵抗力較強(qiáng)，固定液不能殺死蟲卵。但在70℃條件下，24h能將蟲卵殺滅。2蟲體檢查與計(jì)數(shù)新鮮腸管分成均等的幾段，浸泡在37℃的溫生理鹽水中待檢，附著在腸壁上的蟲體可用放犬鏡進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。為了精確計(jì)算感染強(qiáng)度，將未固定的小腸分成4-6段，每段腸管縱向切開，浸泡在37℃的溫生理鹽水30min，待蟲體釋放到鹽水中，腸壁用刮鏟刮一下，將腸內(nèi)容物用鹽水沖洗幾遍，所有材料煮沸，過篩（80-100目）濾洗，除去絕大部分有色顆粒材料。濾洗后的腸內(nèi)容物和刮取物均放在黑色淺皿內(nèi)，用放大鏡或體式（立體）顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。3蟲體的固定與染色固定時(shí)，用吸管吸掉容器中的上清液，注入冷甲醛液（約5℃）或F.A.A固定液浸沒絳蟲，絳蟲應(yīng)在固定液中固定至少12h。染色時(shí)，蟲體在水中洗滌15min，然后直接置于邁耶爾氏副卡紅（Mayer，sParacarmine）中染色12-24h。染色后，將蟲體浸泡在0.5-1%鹽酸溶液中數(shù)秒，洗去過多的染色劑。將染過色的蟲體連續(xù)置于濃度遞增(40%，50%，70%，85%，95%，99%)的酒精溶液中脫水，每一濃度至少脫水15min，其中l(wèi)00%酒精溶液脫水2次。4標(biāo)本制作脫水后，將蟲體置于二甲苯中10分針，然后取出用甲基水楊酸酯（冬青油）透明。最后用加拿大樹膠等標(biāo)本封固液制成標(biāo)本。F.A.A固定液：95%乙醇80ml福爾馬林（37—40%甲醛）lOml冰醋酸5ml邁耶爾氏副卡紅（Mayer，sParacarmine）染色液：卡紅酸1.0g，氯化鋁0.5g氯化鈣4.0g，乙醇lOOml（加熱混合，直至配料溶解，然后過濾）。附件3：犬科動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲糞抗原檢測(cè)方法1材料準(zhǔn)備聚苯乙烯塑料反應(yīng)板、離心機(jī)、50ml離心管、10ml離心管、2（5）ml離心管、一次性筷子、防水記號(hào)筆、包被液、酶結(jié)合物、封閉液、底物液、終止液、陰性對(duì)照糞液、移液器、移液器（垂）吸頭、恒溫箱、恒溫水浴鍋等。1.1抗體包被反應(yīng)扳用包被液將第一抗體按要求稀釋。每孔lOOul加入聚苯乙烯塑料反應(yīng)板孔中。將包被好的反應(yīng)板置濕盒內(nèi)4℃冰箱過夜。次日取出反應(yīng)板，甩凈孔中液體，然后用洗板機(jī)洗滌3次，每次3min，每次每孔加洗滌痕300ul。最后將板在毛巾或吸水紙上甩凈拍干。每孔加300ul封閉液，置濕盒內(nèi)37℃溫箱溫育lh。取出反應(yīng)板，甩凈孔中液體，同前洗板3次，每次3min，最后甩凈拍干。包被好的反應(yīng)板可以立即使用，也可以置-20℃凍存?zhèn)溆谩?.2糞樣的收集前1天將犬拴好，次日清晨，挑選新排出的糞便l-2g裝