GB/T 31792-2015向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31792—2015

向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofDiaporthehelianthiMuntanola-Cvetkovic

MihaljcevicetPetrov

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T31792—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心中華人民共和國(guó)新疆出

:、、

入境檢驗(yàn)檢疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳品珊杜洪忠蔡露敏張祥林嚴(yán)進(jìn)

:、、、、。

Ⅰ

GB/T31792—2015

向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了向日葵莖潰瘍病菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于向日葵植株和種子中向日葵莖潰瘍病菌的檢疫和鑒定

。

2儀器和用具

21儀器

.

體視顯微鏡生物顯微鏡超凈工作臺(tái)光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱

、、、、(1/1000g)、、、PCR

擴(kuò)增儀熒光擴(kuò)增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴鍋

、PCR、、、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵

、、、、、、、、、、、、、

移液器移液器吸頭離心管液氮罐樣品篩目?

、、、、(10,1.7mm)。

3試劑和培養(yǎng)基

31試劑

.

葡萄糖鏈霉素乳酸瓊脂次氯酸鈉液氮

,,,,1.0%(NaClO),,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,

無(wú)水乙醇三氯甲烷異丙醇異

NaOAc,KCl,Tris,CTAB,TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),

戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶通用引物

(Isoamylalcohol),SYBRGreenⅠ,K,DNA,dNTP,ITS5

和實(shí)時(shí)熒光特異性引物及探針

ITS4,PCRDH-F、DH-RDH-Pr。

32培養(yǎng)基

.

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基鏈霉素馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基具體配方參見(jiàn)附

(PDA),(SPDA)。

錄

A。

4檢疫鑒定方法

41癥狀檢查

.

采集田間疑似癥狀的莖桿病葉或葵盤(pán)剪取病健交界處的組織材料備用病害典型的癥狀是莖桿

、,。

和葉柄處有淡褐色潰瘍病斑詳見(jiàn)附錄病害癥狀描述

,A。

在種子中挑選干癟變色皺縮殘缺或霉變的種子同時(shí)挑選其中夾帶的向日葵殘?bào)w如葉柄莖

、、、,,、

桿花盤(pán)碎片等

、。

42分離培養(yǎng)

.

將有疑似癥狀的葉片葉柄莖桿花盤(pán)碎片等樣品在病健交界處剪取的小