標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 31792-2015 向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在為向日葵莖潰瘍病菌的檢測提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于進(jìn)出境植物及其產(chǎn)品中向日葵莖潰瘍病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的檢疫鑒定工作。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容,首先定義了向日葵莖潰瘍病的癥狀特征,包括植株莖部出現(xiàn)水浸狀斑點(diǎn)、隨后發(fā)展成褐色或黑色潰瘍斑塊,并可能伴有白色棉絮狀菌絲體覆蓋于病變部位之上。此外,還描述了在適宜條件下,這些病變區(qū)域會產(chǎn)生小型黑色硬質(zhì)顆?!床≡男菝呓Y(jié)構(gòu):菌核。
標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了采樣方法,要求從疑似感染植株上選取典型病斑樣本進(jìn)行采集;對于種子,則需按照一定比例隨機(jī)抽取樣品進(jìn)行檢查。同時(shí),強(qiáng)調(diào)了保存與運(yùn)輸過程中應(yīng)采取的措施以保證樣品質(zhì)量不受影響。
針對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的具體操作流程,《GB/T 31792-2015》提供了多種鑒定技術(shù)指南,主要包括形態(tài)學(xué)觀察法、分離培養(yǎng)法以及分子生物學(xué)檢測手段等。其中,形態(tài)學(xué)觀察主要依靠顯微鏡下對病原菌孢子囊、菌絲體及菌核等特征性結(jié)構(gòu)進(jìn)行識別;分離培養(yǎng)法則通過將病組織接種至特定培養(yǎng)基上來獲得純化的病原菌落;而分子生物學(xué)方法則利用PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因片段并結(jié)合序列分析來確認(rèn)病原身份。
此外,本標(biāo)準(zhǔn)還就如何撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告給出了規(guī)范性建議,指出每份報(bào)告都應(yīng)當(dāng)包含但不限于以下信息:樣品來源、采集時(shí)間地點(diǎn)、所用鑒定方法及其結(jié)果、最終結(jié)論等關(guān)鍵要素。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2015-07-03 頒布
- 2015-11-27 實(shí)施
文檔簡介
ICS6502001
B16..
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T31792—2015
向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法
DetectionandidentificationofDiaporthehelianthiMuntanola-Cvetkovic
MihaljcevicetPetrov
2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
GB/T31792—2015
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口
(SAC/TC271)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中國合格評定國家認(rèn)可中心中華人民共和國新疆出
:、、
入境檢驗(yàn)檢疫局
。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳品珊杜洪忠蔡露敏張祥林嚴(yán)進(jìn)
:、、、、。
Ⅰ
GB/T31792—2015
向日葵莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了向日葵莖潰瘍病菌的檢疫鑒定方法
。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于向日葵植株和種子中向日葵莖潰瘍病菌的檢疫和鑒定
。
2儀器和用具
21儀器
.
體視顯微鏡生物顯微鏡超凈工作臺光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱
、、、、(1/1000g)、、、PCR
擴(kuò)增儀熒光擴(kuò)增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴鍋
、PCR、、、、。
22用具
.
燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵
、、、、、、、、、、、、、
移液器移液器吸頭離心管液氮罐樣品篩目?
、、、、(10,1.7mm)。
3試劑和培養(yǎng)基
31試劑
.
葡萄糖鏈霉素乳酸瓊脂次氯酸鈉液氮
,,,,1.0%(NaClO),,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,
無水乙醇三氯甲烷異丙醇異
NaOAc,KCl,Tris,CTAB,TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),
戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶通用引物
(Isoamylalcohol),SYBRGreenⅠ,K,DNA,dNTP,ITS5
和實(shí)時(shí)熒光特異性引物及探針
ITS4,PCRDH-F、DH-RDH-Pr。
32培養(yǎng)基
.
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基鏈霉素馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基具體配方參見附
(PDA),(SPDA)。
錄
A。
4檢疫鑒定方法
41癥狀檢查
.
采集田間疑似癥狀的莖桿病葉或葵盤剪取病健交界處的組織材料備用病害典型的癥狀是莖桿
、,。
和葉柄處有淡褐色潰瘍病斑詳見附錄病害癥狀描述
,A。
在種子中挑選干癟變色皺縮殘缺或霉變的種子同時(shí)挑選其中夾帶的向日葵殘?bào)w如葉柄莖
、、、,,、
桿花盤碎片等
、。
42分離培養(yǎng)
.
將有疑似癥狀的葉片葉柄莖桿花盤碎片等樣品在病健交界處剪取的小
溫馨提示
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