標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 31797-2015 啤酒花潛隱類病毒檢疫鑒定方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),主要針對啤酒花中可能存在的潛隱類病毒進(jìn)行檢測與鑒定。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣本采集到最終結(jié)果分析的一系列流程,旨在為啤酒花的健康狀態(tài)提供科學(xué)依據(jù),保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和食品安全。
首先,在樣品采集方面,標(biāo)準(zhǔn)明確了不同生長階段及部位(如葉片、莖部)作為取樣對象,并給出了具體的操作指南,包括如何選取代表性植株以及采樣數(shù)量的要求等。這一步驟對于確保后續(xù)檢測準(zhǔn)確性至關(guān)重要。
接著是樣品處理部分,介紹了將收集到的新鮮或干燥植物材料制備成適合實(shí)驗(yàn)條件下的形式,比如通過研磨、過濾等方式獲取細(xì)胞液或者提取RNA/DNA。此外還涉及到了保存條件和時間限制等內(nèi)容,保證待測物質(zhì)處于最佳狀態(tài)。
核心內(nèi)容之一是關(guān)于病毒核酸的提取與純化技術(shù)。這部分描述了幾種常用的方法來高效地從復(fù)雜背景中分離出目標(biāo)序列,并強(qiáng)調(diào)了減少非特異性吸附的重要性。同時指出應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的技術(shù)路線。
隨后進(jìn)入到了PCR擴(kuò)增反應(yīng)環(huán)節(jié),這是整個鑒定過程中最為關(guān)鍵的步驟之一。標(biāo)準(zhǔn)不僅列出了推薦使用的引物序列及其對應(yīng)的目標(biāo)區(qū)域信息,而且對反應(yīng)體系構(gòu)建、循環(huán)參數(shù)設(shè)定等方面也做了明確規(guī)定。為了提高靈敏度和特異性,還特別提到了多重PCR策略的應(yīng)用可能性。
最后是對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析或測序驗(yàn)證的過程。通過比較條帶大小、位置等特征與預(yù)期模式是否一致,可以初步判斷是否存在特定類型的潛隱類病毒;進(jìn)一步地,通過對陽性樣本進(jìn)行直接測序并與數(shù)據(jù)庫比對,則能夠?qū)崿F(xiàn)更為精確的物種鑒定。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2015-07-03 頒布
- 2015-11-27 實(shí)施
文檔簡介
ICS6502001
B16..
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T31797—2015
啤酒花潛隱類病毒檢疫鑒定方法
DetectionandidentificationofHoplatentviroid
2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
GB/T31797—2015
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口
(SAC/TC271)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢疫
:、
局中華人民共和國新疆出入境檢驗(yàn)檢疫局中國農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院植物保護(hù)研究所石河子大學(xué)
、、、。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人郭立新鄧叢良段維軍張祥林李世訪姜冬梅榮德福劉升學(xué)
:、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T31797—2015
啤酒花潛隱類病毒檢疫鑒定方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了啤酒花潛隱類病毒的檢疫鑒定方法
。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于啤酒花Humulusluulus及其無性繁殖材料種子花粉上啤酒花潛隱類病毒的檢
(p)、、
疫鑒定同時也適用于葎草Humulusaonicus和異株蕁麻Urticadioica上啤酒花潛隱類病毒的檢
,(jp)()
疫鑒定
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
3儀器設(shè)備主要用具和主要試劑
、
31儀器設(shè)備
.
電子天平感量普通天平感量高速冷凍離心機(jī)小型瞬時離心機(jī)普通冰箱超
(0.001g)、(0.1g)、、、、
低溫冰箱制冰機(jī)渦旋振蕩器磁力攪拌器高壓滅菌鍋計(jì)儀微波爐電泳儀電
(-80℃)、、、、、pH、PCR、、、
泳槽凝膠分析成像系統(tǒng)實(shí)時熒光儀雜交爐塑料薄膜封口機(jī)紫外交聯(lián)儀暗箱搖床可調(diào)移
、、PCR、、、、、、
液器
(2.5μL,10μL,20μL,200μL,1000μL,5000μL)。
32主要用具
.
無吸頭無離心管
RNase(10μL,20μL,200μL,1000μL,5000μL)、RNase(1.5mL,5mL,
研缽研棒磁性分離架反應(yīng)管實(shí)時熒光孔反應(yīng)板雜交瓶雜交膜雜交
10mL)、、、、PCR(200μL)、96、、、
袋光片
、X。
33主要試劑
.
除另有規(guī)定外所有試劑均為分析純實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合中相關(guān)規(guī)定檢測試
,,GB/T6682。RT-PCR
劑見附錄實(shí)時熒光檢測試劑見附錄斑點(diǎn)雜交檢測試劑見附錄
B;RT-PCRC;D。
4檢測樣品制備
41種子類
.
隨機(jī)抽取至少粒種子樣品進(jìn)行表面消毒后置于鋪有吸水紙的白瓷盤或培養(yǎng)皿中在適宜的發(fā)
50,,,
芽溫度條件下催芽直至長出第一對真葉發(fā)芽時間大約一周或者在消毒的土壤中直接種植直至長
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出第一對真葉取
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