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專(zhuān)題一第二節(jié)一、選擇題1.下列屬于獲取目的基因的方法是()①利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫(kù)中提取③從受體細(xì)胞中提?、芾肞CR技術(shù)⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄⑥人工合成A.①②③⑤ B.①②⑤⑥C.①②③④ D.①②④⑥[答案]D[解析]受體細(xì)胞是接受目的基因并使之表達(dá)的細(xì)胞。DNA轉(zhuǎn)錄形成信使RNA。目的基因?qū)儆谕庠椿?,不能從受體細(xì)胞中提取。利用DNA轉(zhuǎn)錄合成的是RNA不是目的基因。2.哪些是基因表達(dá)載體的必需組成部分()①啟動(dòng)子②終止密碼子③標(biāo)記基因④目的基因⑤終止子A.①②③④ B.①③④⑤C.①②④⑤ D.①②③⑤[答案]B[解析]啟動(dòng)子位于基因表達(dá)載體的首端,有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需要的蛋白質(zhì);終止子相當(dāng)于一盞紅色信號(hào)燈,使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來(lái);標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái);目的基因是表達(dá)載體上必須具有的結(jié)構(gòu)。3.不屬于目的基因與運(yùn)載體結(jié)合過(guò)程的是()A.用一定的限制酶切割質(zhì)粒,露出黏性末端B.用同種限制酶切割目的基因,露出黏性末端C.將切下的目的基因插入質(zhì)粒的切口處D.將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增[答案]D[解析]目的基因與運(yùn)載體結(jié)合的過(guò)程就是構(gòu)建重組DNA的過(guò)程。4.在判斷抗蟲(chóng)基因是否成功轉(zhuǎn)入棉花基因組的方法中,不屬于分子檢測(cè)的是()A.通過(guò)觀察害蟲(chóng)吃棉葉是否死亡B.檢測(cè)目的基因片段與DNA探針能否形成雜交帶C.檢測(cè)目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA與DNA探針能否形成雜交帶D.檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)能否與特定抗體形成雜交帶[答案]A[解析]通過(guò)觀察害蟲(chóng)吃棉葉是否死亡屬于個(gè)體水平的檢測(cè),檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)能否與特定抗體形成雜交帶屬于分子水平檢測(cè)。5.右圖為基因表達(dá)載體的模式圖,下列有關(guān)基因工程中載體的說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A.基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建B.任何基因表達(dá)載體的構(gòu)建都是一樣的,沒(méi)有差別C.圖中啟動(dòng)子位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位D.抗生素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因,用于鑒別受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因[答案]B[解析]由于受體細(xì)胞有植物、動(dòng)物和微生物之分,以及目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方式不同,所以基因表達(dá)載體的構(gòu)建也會(huì)有所差別,不可能千篇一律。6.基因工程中因受體細(xì)胞不同,目的基因?qū)氲姆椒ㄒ膊煌?,下列敘述不正確的是()A.將目的基因?qū)朊藁?xì)胞內(nèi)常用花粉管通道法B.將目的基因?qū)肜鲜蠹?xì)胞內(nèi)常用顯微注射法C.將目的基因?qū)氪竽c桿菌內(nèi)常用感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法D.將目的基因?qū)胄←溂?xì)胞內(nèi)常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法[答案]D[解析]小麥?zhǔn)菃巫尤~植物,其受傷后不能分泌酚類(lèi)物質(zhì),農(nóng)桿菌對(duì)它沒(méi)有感染能力。二、非選擇題7.回答有關(guān)基因工程的問(wèn)題:(1)構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí),用不同類(lèi)型的限制酶切割DNA后,可能產(chǎn)生黏性末端,也可能產(chǎn)生________末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接,則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。(2)利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí),構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等,其中啟動(dòng)子的作用是__________________。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化成為大腸桿菌時(shí),常用__________處理大腸桿菌,以利于表達(dá)載體進(jìn)入;為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交,該雜交技術(shù)稱(chēng)為_(kāi)_________________。為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成__________,常用抗原——抗體雜交技術(shù)。(3)如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞,先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的______________中,然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞,通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的____________上。[答案](1)平相同(2)RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位Ca2+分子雜交技術(shù)蛋白質(zhì)(3)T-DNA片段染色體DNA8.科學(xué)家通過(guò)基因工程方法,將蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入普通棉株細(xì)胞內(nèi),并成功實(shí)現(xiàn)了表達(dá),從而培育出了能抗棉鈴蟲(chóng)的棉花植株——抗蟲(chóng)棉。其過(guò)程大致如下圖所示:根據(jù)題意,回答下列問(wèn)題:(1)基因工程的操作程序主要包括的四個(gè)步驟是________、________、________、________。(2)Ti質(zhì)粒是農(nóng)桿菌中的一種質(zhì)粒,其上有T-DNA,把目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中是利用T-DNA的________________________________特點(diǎn)。(3)Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入普通棉株細(xì)胞內(nèi)并成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)的過(guò)程,在基因工程中稱(chēng)為_(kāi)_______。(4)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法有很多種,該題中涉及的是________。(5)目的基因能否在棉株內(nèi)穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳性質(zhì)的關(guān)鍵是______________________________________,這需要通過(guò)檢測(cè)才能知道,檢測(cè)采用的方法是________________________________________________________________________。[答案](1)目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定(2)可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上(3)轉(zhuǎn)化(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(5)目的基因是否插入了受體生物細(xì)胞的染色體DNA上DNA分子雜交技術(shù)一、選擇題1.(2023·福州檢測(cè))以下有關(guān)基因工程的敘述,正確的是()A.利用PCR技術(shù)可以大量擴(kuò)增目的基因B.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法C.用同一種限制酶分別切割載體和目的基因的目的是能夠產(chǎn)生不同的黏性末端D.利用載體上標(biāo)記基因的相關(guān)特性就可檢測(cè)出目的基因已導(dǎo)入受體細(xì)胞并成功表達(dá)[答案]A[解析]PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞最常用的方法;用同一種限制酶分別切割載體和目的基因的目的是夠產(chǎn)生相同的黏性末端,便于兩者連接;利用載體上標(biāo)記基因的相關(guān)特性就可檢測(cè)出目的基因已導(dǎo)入受體細(xì)胞,但不能確定目的基因是否得以表達(dá)。2.下列關(guān)于目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的描述,不正確的是()A.利用基因槍法將目的基因?qū)胫参矬w細(xì)胞的方法比較經(jīng)濟(jì)有效B.顯微注射技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中采用最多的方法C.大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是使細(xì)胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變D.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞最常用的方法[答案]A[解析]本題綜合考查將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法。目的基因?qū)氩煌纳锲浞椒ú煌?,每種方法都有利有弊。目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,該方法比較經(jīng)濟(jì)和有效,此外還有基因槍法和花粉管通道法;目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射技術(shù);大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法就是用Ca2+處理細(xì)胞,使細(xì)胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變,進(jìn)而完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。3.基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列敘述不正確的是()A.常用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和質(zhì)粒B.常用Ca2+處理大腸桿菌,有利于目的基因與載體的結(jié)合C.可通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記基因來(lái)檢測(cè)重組質(zhì)粒是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞D.導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)[答案]B[解析]將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞時(shí),常用Ca2+處理微生物細(xì)胞,如大腸桿菌細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱(chēng)為感受態(tài)細(xì)胞,利于基因的導(dǎo)入。4.利用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素。下列相關(guān)敘述正確的是()A.人和大腸桿菌在合成胰島素時(shí),轉(zhuǎn)錄和翻譯的場(chǎng)所是相同的B.DNA連接酶能把兩個(gè)黏性末端經(jīng)堿基互補(bǔ)配對(duì)后留下的縫隙“縫合”C.通過(guò)檢測(cè),大腸桿菌中沒(méi)有胰島素產(chǎn)生則可判斷重組質(zhì)粒未導(dǎo)入受體菌D.在培養(yǎng)大腸桿菌的工程菌的過(guò)程中,獲得目的基因的工具酶有限制酶、DNA聚合酶[答案]B[解析]大腸桿菌為原核生物,在合成胰島素時(shí),其轉(zhuǎn)錄和翻譯的場(chǎng)所與人存在差異;檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌中無(wú)胰島素產(chǎn)生,可能的原因有:①未導(dǎo)入,②導(dǎo)入后未表達(dá);在培養(yǎng)大腸桿菌的工程菌的過(guò)程中,獲得的目的基因的工具酶是限制酶不用DNA聚合酶。5.下圖表示一項(xiàng)重要的生物技術(shù),對(duì)圖中物質(zhì)a、b、c、d的描述,正確的是()A.a(chǎn)通常存在于細(xì)菌體內(nèi),是目前該生物技術(shù)中唯一的運(yùn)載體B.b識(shí)別特定的核苷酸序列,并將A與T之間的氫鍵切開(kāi)C.c連接雙鏈間的A和T,使黏性末端處堿基互補(bǔ)配對(duì)D.若要獲得已知序列的d,可采用化學(xué)合成方法[答案]D[解析]a為環(huán)狀雙鏈DNA,推測(cè)其為質(zhì)粒,可作為基因工程的載體,但不是唯一的,動(dòng)植物病毒等也可作為基因工程的載體。能將雙鏈DNA打開(kāi),形成黏性末端的b推測(cè)為限制酶,它可以識(shí)別特定的核苷酸序列,但作用部位是磷酸二酯鍵,而不是氫鍵。d能與a連接,所以d推測(cè)為目的基因,如果序列已知可以采用化學(xué)合成法獲得。c推測(cè)為DNA連接酶,作用部位也是磷酸二酯鍵,而不是氫鍵。6.下圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)爰?xì)菌B內(nèi)制造“工程菌”的示意圖。已知細(xì)菌B內(nèi)不含質(zhì)粒A,也不含質(zhì)粒A上的基因。判斷下列說(shuō)法正確的是()A.將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌B常用顯微注射技術(shù)B.將完成導(dǎo)入過(guò)程后的細(xì)菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上,能生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌C.將完成導(dǎo)入過(guò)程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上,能生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒A的細(xì)菌D.目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)[答案]C[解析]若導(dǎo)入了質(zhì)粒,由于質(zhì)粒中含有抗四環(huán)素基因,則細(xì)菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。7.(2023·棗莊檢測(cè))繼在上海和安徽首次發(fā)現(xiàn)H7N9禽流感病例,我國(guó)多地出現(xiàn)禽流感疫情,為此某研究小組為了研制預(yù)防H7N9禽流感病毒的疫苗,開(kāi)展了前期研究工作。其簡(jiǎn)要的操作流程如下圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()eq\x(禽流感病毒)eq\o(→,\s\up7(提取))eq\x(RNA)eq\o(→,\s\up7(①))eq\x(DNA)eq\o(→,\s\up7(選擇性擴(kuò)增))eq\x(Q基因)eq\o(→,\s\up7(②))eq\x(攜帶Q基因的重組質(zhì)粒)eq\o(→,\s\up7(③))eq\x(導(dǎo)入大腸桿菌)eq\o(→,\s\up7(④))eq\x(表達(dá)Q蛋白)A.步驟①所代表的過(guò)程是反轉(zhuǎn)錄B.步驟②需使用限制酶和DNA連接酶C.步驟③可用CaCl2處理大腸桿菌,使其從感受態(tài)恢復(fù)到常態(tài)D.檢驗(yàn)Q蛋白的免疫反應(yīng)特性,可用Q蛋白與患禽流感康復(fù)的雞的血清進(jìn)行抗原——抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)[答案]C[解析]由圖可知:步驟①是由RNA合成DNA的過(guò)程,表示反轉(zhuǎn)錄,選項(xiàng)A正確;步驟②是把目的基因與質(zhì)粒連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程,該過(guò)程需使用限制酶和DNA連接酶,選項(xiàng)B正確;步驟③可用CaCl2處理大腸桿菌,使其從常態(tài)轉(zhuǎn)化為感受態(tài),選項(xiàng)C錯(cuò)誤;檢驗(yàn)Q蛋白的免疫反應(yīng)特性,可用Q蛋白與患禽流感康復(fù)的雞的血清進(jìn)行抗原—抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn),選項(xiàng)D正確。二、非選擇題8.1997年,科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠控制合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組,并且在大腸桿菌中表達(dá)成功。請(qǐng)據(jù)下圖回答問(wèn)題。(1)此圖表示的是采取________合成基因的方法獲取目的基因的過(guò)程。(2)圖中①互補(bǔ)DNA是以__________為模板,形成單鏈DNA,在酶的作用下合成雙鏈DNA,從而獲得了所需要的目的基因。(3)圖中③代表____________,它往往含____________基因,以便于目的基因的檢測(cè)。(4)圖中④表示________________________,為使此過(guò)程順利進(jìn)行,一般須將大腸桿菌用__________處理,以增大其細(xì)胞壁的____________。(5)圖中⑤表示________隨大腸桿菌的繁殖而進(jìn)行增殖,此目的基因在大腸桿菌內(nèi)表達(dá)的標(biāo)志是________________________。[答案](1)人工(2)控制胰島素合成的信使RNA(3)重組DNA分子標(biāo)記(4)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞氯化鈣通透性(5)目的基因大腸桿菌能產(chǎn)生胰島素9.如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖,小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn),ampR為青霉素抗性基因,tetR為四環(huán)素抗性基因,P為啟動(dòng)子,T為終止子,ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別含有包含EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。(1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRⅠ酶切,酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后,其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有________、________、________三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒,需要對(duì)這些連接
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