高效液相色譜常見問題分析與對策

高效液相色譜常見問題分析與對策流淌相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。A、峰拖尾原因解決方法1、篩板堵塞a、反沖色譜柱b、更換進口篩板c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷填充色譜柱a、使用更長的色譜柱b、轉(zhuǎn)變流淌相或更換色譜柱4PHPHPH5、樣品與填料外表的溶化點發(fā)生反響ab、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法上升柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當使用流淌相作為樣品溶劑3、樣品過載降低樣品含量A1、A2C、峰分叉原因解決方法1、保護柱或分析柱污染問題仍舊存在，入口可能被堵塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流淌相轉(zhuǎn)變樣品溶劑。假設可能實行流淌相作為樣品溶劑。原因解決方法1、樣品過載E、早出的峰變形原因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當a、削減進樣體積b、運用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1、柱外效應a、調(diào)整系統(tǒng)連接〔使用更短、內(nèi)徑更小的管路〕b、使用小體積的流通池G、K’增加時，脫尾更嚴峻原因解決方法1、二級保存效應，反相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕劑〔或離子化樣品〕d、更換一支柱子2、二級保存效應，正相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕官能團化合物〕d、試用另一種方法3、二級保存效應，離子對〔或堿性樣品〕原因

、參加鹽或緩沖、參加水〔或多解決方法1、緩沖不適宜a50-100mM的緩沖液bPkaPHI、額外的峰原因解決方法正常2、前一次進樣的洗脫峰a、增加運行時間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、檢查流淌相是否純潔b、使用流淌相作為樣品溶劑c、削減進樣體積J、保存時間波動原因解決方法調(diào)好柱溫2、流淌相組分變化防止變化〔蒸發(fā)、反響等〕3、色譜柱沒有平衡在每一次運行之前賜予足夠的時間平衡色譜柱K、保存時間不斷變化原因解決方法1、流速變化重設定流速從泵中除去氣泡3、流淌相選擇不恰當a、更換適宜的流淌相b、選擇適宜的混合流淌相L、基線漂移原因解決方法〕掌握好柱子和流淌相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2〔〕使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N〔不要用鹽酸〕〕取出堵塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。5、流淌相配比不當或流速變化更改配比或流速。為避開這個問題可定期檢查流淌相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流淌相發(fā)生變化時用中等強度的溶劑進展沖洗，更改流淌相時，在分析前用10-20倍體積的流淌相對柱子進展沖洗。7、流淌相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成HPLC8、樣品中有強保存的物質(zhì)〔高K’值〕以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步上升的基線。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。重設定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用的流淌相。將波長調(diào)整至最大吸取波特長M、基線噪音〔規(guī)章的〕原因解決方法1、在流淌相、檢測器或泵中有空氣流淌相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。2、漏液音。如有必要，更換泵密封。3、流淌相混合不完全用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑〕削減差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設備6、泵振動在系統(tǒng)中參加脈沖阻尼器〔不規(guī)章的〕原因解決方法如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流淌相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成檢查流淌相的組成。選擇互溶的流淌相4、檢測器/記錄儀電子元件的問題斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡用強極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測器內(nèi)有氣泡清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)整器〕1N〔不能用磷酸〕清洗流通池8、檢測器燈能量缺乏更換燈更換色譜柱10、流淌相混合不均勻或混合器工作不正常修理或更換混合器，在流淌相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置原因解決方法1、流淌相組成變化2、流淌相流速太低調(diào)整流速3、漏液〔特別是在柱子和檢測器之間〕section3音。假設必要更換密封。調(diào)整設定5、柱外效應影響a、柱子過載bc、柱子與檢測器之間的d、記錄儀響應時間太長5、a、小體積進樣〔例如：、削減響應時間或、使用內(nèi)徑為d、削減響應時間增加濃度7、保護柱污染或失效更換保護柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低柱子。9、柱入口塌陷翻開柱入口，填補塌陷或更換柱子選擇其它類型的色譜柱以改善分別效果11、柱溫過低75℃12、檢測器時間常數(shù)太大使用較小的時間常數(shù)P、分別度降低原因解決方法〕重配置流淌相2、保護柱或分析柱堵塞圖假設問題仍舊存在色譜柱可能被強保存的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦?。假設問題仍舊存在，進口可能堵塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、全部的峰面積都太小原因解決方法削減衰減的設定2、檢測器時間常數(shù)設定太大設定較小的時間常數(shù)增大進樣量使用正確的連接原因解決方法1、檢測器衰減設定過低實行較大的衰減削減進樣量正確連接記錄儀診狀可能的緣由解決方法(一)保存時間變化柱溫變化柱恒溫，必要時需配置恒溫箱等度與梯度間未能充分平衡至少用10緩沖液容量不夠用柱污染每天沖洗柱柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進樣條件,調(diào)整流淌相柱快到達壽命承受保護柱(二)保存時間縮短流速增加檢查泵,重設定流速樣品超載降低樣品量鍵合相流失流淌相PH3~7.5流淌相組成變化防止流淌相蒸發(fā)或沉淀溫度增加柱恒溫(三)保存時間延長流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排解泵內(nèi)氣泡硅膠柱上活性點變化用流淌相改性劑,如加三乙胺,或承受堿至鈍化柱鍵合相流失同前(二)3流淌相組成變化同前(二)4溫度降低同前(二)5(四)消滅肩峰或分叉15%樣品溶劑過強承受較弱的樣品溶劑柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,承受較弱腐蝕性條件柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品進樣器損壞更換進樣器轉(zhuǎn)子(五)鬼峰進樣閥剩余峰每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗樣品中未知物處理樣品柱未平衡重平衡柱,用流淌相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天配,用抗氧化劑HPLC(六)基線噪聲氣泡(鋒利峰)流淌相脫氣,加柱后背壓HPLC檢測器燈連續(xù)噪聲更換氘燈電干擾(偶然噪聲)承受穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)檢測器中有氣泡流淌相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾柱超載降低樣品量,增加柱直徑承受較高容量的固定相峰干擾清潔樣品,調(diào)整流淌相PH鈍化樣品同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)3死體積或柱外體積過大 連接點降至最低,對全部連接點作適宜調(diào)整,盡可能承受細內(nèi)徑的連接收柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,承受保護柱(八)峰展寬進樣體積過大同(四)1在進樣閥中造成峰擴展進樣前后排出氣泡以降低集中1010%流淌相粘度過高增加柱溫,承受低粘度流淌相檢測池體積過大用小體積池,卸下熱交換器保存時間過長等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫柱外體積過大將連接收徑和連接收長度降至最小樣品過載進小濃度小體積樣品高效液相色譜常見故障的判定及解決方法總匯〔二〕12、檢測器時間常數(shù)太大12、使用較小的時間常數(shù)P、分別度降低原因解決方法1、流淌相污染或變質(zhì)〔引起保存時間變化〕1、重配置流淌相2、保護柱或分析柱堵塞圖2、去掉保護柱進展分析。假設必要則更換保護柱?？谔幍暮Y板或更換色譜柱。Q、全部的峰面積都太小原因解決方法1、檢測器衰減設定過高1、削減衰減的設定2、檢測器時間常數(shù)設定太大2、設定較小的時間常數(shù)3、進樣量太少3、增大進樣量4、記錄儀連接不當4、使用正確的連接R、全部的峰面積都太大原因解決方法1、檢測器衰減設定過低1、實行較大的衰減2、進樣過多2、削減進樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀A、手動進樣閥，轉(zhuǎn)動不靈原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動進樣閥，載樣困難原因解決方法1、進樣閥安裝不當1、重安裝2、定量環(huán)堵塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進樣器污染3、清洗或更換進樣器4、管路堵塞4、清洗或更換管路C、自動進樣閥，不能轉(zhuǎn)動原因解決方法1、無壓力〔或電源〕1、供給恰當?shù)膲毫Α搽娫础?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進樣閥安裝不當3、重安裝D、自動進樣閥，其它問題原因解決方法1、堵塞1、清洗或更換堵塞部件2、機械故障2、見隨機修理手冊3、掌握器故障3、修理或更換掌握器由氣味、景象和聲音可以覺察的問題〔除了味覺味。大局部的問題是可以通過眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1section32、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過熱1、a、檢查并調(diào)整通風設施b、檢查并調(diào)整溫度設定c、關掉儀器，查找修理手冊C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1section22、柱溫箱問題2、ab、參照用戶手冊3、檢測器燈失效3、更換燈D、燈警告原因解決方法1、壓力超出極限值1、ab、檢查并調(diào)整極限值的設定2、其它警示燈2、見用戶手冊E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見用戶手冊F、刺耳的短音或長音原因解決方法1、軸承失效1、見用戶手冊2、潤滑不夠2、進展恰當?shù)臐櫥?、機械故障3、見用戶手冊由氣味、景象和聲音可以覺察的問題〔除了味覺味。大局部的問題是可以通過眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1section32、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過熱1、a、檢查并調(diào)整通風設施b、檢查并調(diào)整溫度設定c、關掉儀器，查找修理手冊C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1section22、柱溫箱問題2、ab、參照用戶手冊3、檢測器燈失效3、更換燈D、燈警告原因解決方法1、壓力超出極限值1、ab、檢查并調(diào)整極限值的設定2、其它警示燈2、見用戶手冊E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見用戶手冊F、刺耳的短音或長音原因解決方法1、軸承失效1、見用戶手冊2、潤滑不夠2、進展恰當?shù)臐櫥?、機械故障3、見用戶手冊常見故障及日常維護您更多的維護方法。溶劑瓶問題維護1、進口篩板堵塞1、a、更換〔3-6〕b、過濾流淌相，0.5u2、氣泡2、流淌相脫氣泵問題維護1、氣泡1、流淌相脫氣、泵密封損壞3、單向閥損壞3、過濾流淌相，運用在線過濾，預備備用單向閥進樣閥問