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文檔簡(jiǎn)介

深圳市血液中心

血液篩查工作情況匯報(bào)深圳市血液中心曾勁峰

1234抗-HTLV血液篩查獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢測(cè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)(CLIA)在血液篩查中的應(yīng)用輸血安全相關(guān)科研工作匯報(bào)報(bào)告內(nèi)容一、抗-HTLV血液篩查抗-HTLV血液篩查國(guó)內(nèi)外概況人類嗜T淋巴細(xì)胞自血病病毒可通過血液途徑傳播,能引起惡性淋巴瘤、成人T淋巴細(xì)胞白血病(ATL)等疾病。我國(guó)抗-HTLV陽(yáng)性人群主要分布于福建沿海地區(qū)、新疆和廣東地區(qū),陽(yáng)性率為0.01%~1.0%。為探索深圳地區(qū)獻(xiàn)血人群HTLV感染情況,我們于2014年初將其納入到血液篩查檢測(cè)項(xiàng)目中???HTLV血液篩查國(guó)內(nèi)外概況廈門已于十年前已經(jīng)開展了抗-HTLV的檢測(cè)。

深圳市血液中心經(jīng)過認(rèn)真考慮,決定于2014年開始對(duì)深圳地區(qū)獻(xiàn)血人群開展抗-HTLV篩查。試劑:萬(wàn)泰公司提供的抗-HTLV試劑。血液樣本常規(guī)酶免檢測(cè)HTLV酶免檢測(cè)初篩陽(yáng)性樣本正常發(fā)放原樣管雙孔復(fù)檢復(fù)檢陽(yáng)性樣本白膜層留樣送檢我中心HTLV檢測(cè)開展情況至今檢測(cè)數(shù)據(jù)2014年4月至今,共計(jì)檢測(cè)近10萬(wàn)人份,初篩陽(yáng)性標(biāo)本共計(jì)73例抗-HTLV初篩陽(yáng)性率:0.7‰

確證陽(yáng)性2例目前,初篩陽(yáng)性樣本送中國(guó)食品藥品檢定研究院確證實(shí)驗(yàn)HTLV對(duì)獻(xiàn)血資格判定的顧慮由于政策法規(guī)的限制,HTLV不是法定檢測(cè)項(xiàng)目,因此未將HTLV初篩陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果用于獻(xiàn)血資格的控制我國(guó)衛(wèi)生行政主管部門已決定在部分地區(qū)推動(dòng)HTLV的檢測(cè),如何完善相關(guān)行業(yè)法規(guī)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),值得我們共同討論二、獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢測(cè)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀1.

目的和意義美國(guó)、日本、澳大利亞等國(guó)家和我國(guó)的香港地區(qū)均已將不規(guī)則抗體篩查列入獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)。我國(guó)衛(wèi)生行政部門目前尚未要求對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行抗體篩查。1.2不規(guī)則抗體的不良影響不規(guī)則抗體是除ABO血型系統(tǒng)抗體以外的所有抗體,是引起眾多臨床問題的主要原因之一。輸血不良反應(yīng)不規(guī)則抗體血型鑒定困難新生兒溶血病疑難配型1.

目的和意義

有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體;◆在配血前鑒定不規(guī)則抗體,可以避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤;◆特別對(duì)于交叉配血不合或有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者,能夠最大限度降低輸血風(fēng)險(xiǎn)。

1.3不規(guī)則抗體篩選的重要意義1.

目的和意義2014年8月至今,深圳市血液中心無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本17939例符合獻(xiàn)血條件的獻(xiàn)血人群。

2.

技術(shù)和方法抗人球蛋白檢測(cè)卡,即不規(guī)則抗體篩檢卡(江蘇蘇大賽爾)不規(guī)則抗篩細(xì)胞(長(zhǎng)春博德)

2.1樣品來(lái)源2.2試劑2.

技術(shù)和方法不規(guī)則抗篩細(xì)胞2.2試劑紅細(xì)胞血型抗體篩選格局圖序Rh-hrMNSsKiddDuffyLewisDiegoLutheranKellPXg序結(jié)果號(hào)DCEceMNSsJkaJkbFyaFybLeaLebDiaDibLuaLubKkKpaKpbP1Xga號(hào)鹽水IAT1++--+++++-++-+--+-+-+-++-1

2+-+++++-++++--+++-+-+-+--2

3-+-++++-+-+++-+-+-+-+-+-+3

2.3儀器

2.技術(shù)和方法Aigel300全自動(dòng)血庫(kù)系統(tǒng)◆微柱凝膠法:應(yīng)用微柱凝膠法對(duì)17939例獻(xiàn)血者血漿進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查,對(duì)初篩陽(yáng)性反應(yīng)樣品重復(fù)檢測(cè)2次。仍為陽(yáng)性反應(yīng)的送輸血研究所做抗體特異性鑒定實(shí)驗(yàn)。

干擾因素少,操作法簡(jiǎn)單、方便、敏感性高;結(jié)果易判斷又能較長(zhǎng)時(shí)間保存;操作具有可證明性,便于管理;④自動(dòng)化、信息化程度高。2.技術(shù)和方法2.4方法3.

檢測(cè)數(shù)據(jù)標(biāo)本量初檢陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)量復(fù)檢陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)量確診陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)量1793934(0.19%)21(0.12%)21(0.12%)單位:例表1獻(xiàn)血人群不規(guī)則抗體篩查結(jié)果注:21例確診陽(yáng)性標(biāo)本中多數(shù)為抗-M抗體和冷抗體3.1數(shù)據(jù)種類3.1陽(yáng)性標(biāo)本示例一010740這個(gè)標(biāo)本結(jié)果是1+,疑似陽(yáng)性(確認(rèn)結(jié)果為陰性).3.檢測(cè)數(shù)據(jù)3.1陽(yáng)性標(biāo)本示例二211261這個(gè)標(biāo)本的Ⅲ號(hào)篩選細(xì)胞為弱陽(yáng)性(確認(rèn)結(jié)果:冷抗體)3.檢測(cè)數(shù)據(jù)4.橫向合作的目的完善臨床輸血信息化管理系統(tǒng)

加強(qiáng)輸血管理,深圳市血液中心與合作醫(yī)院間的Lis系統(tǒng)進(jìn)行關(guān)聯(lián),有效實(shí)現(xiàn)了血液信息快速的互換共享。資料齊全與合作醫(yī)院的管理系統(tǒng)成功連接數(shù)據(jù)準(zhǔn)確查詢方便統(tǒng)計(jì)快捷操作簡(jiǎn)單管理規(guī)范安全備份4.橫向合作的目的◆評(píng)估深圳地區(qū)不規(guī)則抗體篩查的陽(yáng)性率◆評(píng)估不規(guī)則抗體篩查結(jié)果對(duì)臨床患者交叉配血的影響◆確保受血者輸入獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞的安全性,最大限度保證紅細(xì)胞的存活時(shí)間◆評(píng)估不規(guī)則抗體篩查對(duì)輸血安全風(fēng)險(xiǎn),為電子交叉配血推廣和應(yīng)用打下基礎(chǔ)合作意義4.橫向合作的目的電子配血,是將信息化技術(shù)應(yīng)用到配血中的一種技術(shù),就是將獻(xiàn)血者的血液信息和患者的血液信息輸入計(jì)算機(jī),由計(jì)算機(jī)系統(tǒng)判斷和傳輸血型鑒定結(jié)果、審核血型信息并選擇相容性血液輸注。電子配血-優(yōu)勢(shì)安全性節(jié)省人力物力節(jié)省時(shí)間減少血液浪費(fèi)電子配血是未來(lái)輸血發(fā)展的必然趨勢(shì)。4.橫向合作的目的三、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)(CLIA)在血液篩查中的應(yīng)用在國(guó)內(nèi)進(jìn)口設(shè)備應(yīng)用廣泛CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況(之一)澳大利亞,新西蘭,新加坡,馬來(lái)西亞,泰國(guó),韓國(guó),印度尼西亞,香港等國(guó)家和地區(qū)。以上國(guó)家基本都在使用Abbott的Prism化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。項(xiàng)目涉及:HBsAg,anti-HCV,anti-HIV1/2的血清學(xué)檢測(cè)。新加坡血液中心的檢測(cè)設(shè)備CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況(之二)日本使用的是自己開發(fā)的方法(CLEIAs,CL4800testingsystem,Fujirebio,Tokyo,Japan),檢測(cè)項(xiàng)目增加了anti-HBc(定性),anti-HBs(定量)。同時(shí)日本還常規(guī)檢測(cè)anti-HTLV1。CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況(之三)其他區(qū)域,如美國(guó)全部使用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)用于血液篩查。檢測(cè)項(xiàng)目增加了anti-HBc,anti-HTLVI/II,anti-T-Cruzi(抗查格斯)等項(xiàng)目的檢測(cè)。而在歐洲,化學(xué)發(fā)光也被廣泛,如德國(guó),法國(guó)等。病毒標(biāo)志物的檢測(cè)糖尿病各類激素水平檢測(cè)感染性疾病心血管疾病腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)臨床應(yīng)用廣泛為什么血站實(shí)驗(yàn)室沒有應(yīng)用?規(guī)范要求用于血液篩查的檢測(cè)試劑屬于藥品和三類醫(yī)療器械監(jiān)督管理范疇,質(zhì)量必須符合《中華人民共和國(guó)藥品管理法》和《中華人民共和國(guó)醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》的有關(guān)規(guī)定;而一般醫(yī)院檢驗(yàn)科試劑屬于三類醫(yī)療器械監(jiān)督管理目前沒有國(guó)產(chǎn)CLIA試劑取得“藥字”號(hào)注冊(cè)資格。國(guó)產(chǎn)設(shè)備沒有普及,只有少數(shù)進(jìn)口企業(yè)的產(chǎn)品可以應(yīng)用,且使用成本相對(duì)較貴化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)未在國(guó)內(nèi)血站實(shí)應(yīng)用原因法律法規(guī)法律、法規(guī)評(píng)估國(guó)產(chǎn)CLIA設(shè)備連續(xù)工作的穩(wěn)定性、可靠性;評(píng)估國(guó)產(chǎn)CLIA試劑的檢測(cè)靈敏度,特異性;評(píng)估CLIA檢測(cè)技術(shù)血站實(shí)驗(yàn)室開展檢測(cè)的可行性;測(cè)試目的-評(píng)估內(nèi)容CLIA試劑:深圳邁瑞公司生產(chǎn)的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑。比對(duì)試劑:為血站現(xiàn)用的HBsAg3.0(Sorin)、HIV(Biorad)、TMA核酸檢測(cè)試劑(Grifols)AntiHBc(科華、萬(wàn)泰、新創(chuàng))及檢測(cè)項(xiàng)目:HIV(Ab/P24

Ag)、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc檢測(cè)平臺(tái):全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀,血站現(xiàn)有ELISA及核酸檢測(cè)平臺(tái)檢測(cè)原理`材料:試劑及檢測(cè)平臺(tái)CLIA檢測(cè)血樣:2014年4月期間單獨(dú)采集的2163樣品(促凝管)考評(píng)試劑:CLIA磁微?;瘜W(xué)發(fā)光試劑(邁瑞)參考試劑:ELISA-HBsAg3.0(Sorin)、

HIV(Biorad)、AntiHBc(科華、萬(wàn)泰、新創(chuàng))TMA核酸檢測(cè)試劑(Grifols)樣本測(cè)試原則樣本在邁瑞CL2000i化學(xué)發(fā)光儀上測(cè)試HIV、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc,測(cè)試與血站血篩同步進(jìn)行重復(fù)測(cè)樣本挑選原則(重測(cè)三次):考評(píng)試劑HBsAg結(jié)果與HBV核酸檢測(cè)或HBsAg酶免結(jié)果不符的樣本;考評(píng)試劑HBsAg結(jié)果為陽(yáng)性或HBV核酸檢驗(yàn)為陽(yáng)性或HBsAg免疫檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性,而邁瑞HBeAg為陰性的樣本;考評(píng)試劑HIV測(cè)試結(jié)果與HIV核酸檢測(cè)或HIV酶免結(jié)果不符的樣本CLIA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

增強(qiáng)型ALP+AMPPD發(fā)光體系超順磁性微粒子分離系統(tǒng)

模塊化設(shè)計(jì),單機(jī)最高240T/H,靈敏度高,精密度高,線性范圍寬一鍵實(shí)現(xiàn)試劑在線更換,檢測(cè)耗材少全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀CL2000i聯(lián)機(jī)/拓展圖單機(jī)圖CLIA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)樣本結(jié)果處理:以三種方法測(cè)試中兩次測(cè)試一致的結(jié)果為CLIA系統(tǒng)最終結(jié)果。參考結(jié)果判定項(xiàng)目核酸結(jié)果ELISA結(jié)果參考結(jié)果(CLIA)HBsAg陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性陰性HIV陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性陰性Anti-HBc以三家結(jié)果AntiHBc(科華、萬(wàn)泰、新創(chuàng))均相同為參考結(jié)果HBeAg陽(yáng)性樣本已羅氏和雅培結(jié)果為準(zhǔn),陰性樣本即認(rèn)為陰性工作流程獻(xiàn)血樣本采集樣本離心處理化學(xué)發(fā)光及血站測(cè)試結(jié)果對(duì)比分析樣本重測(cè)與結(jié)果分析HIV抗原抗體試劑盒測(cè)試結(jié)果3例ELISA陽(yáng)性全部檢出:對(duì)比試劑(羅氏+雅培)也為陽(yáng)性;考察試劑初測(cè)23例假陽(yáng)—后續(xù)分析:與采血管等有關(guān);通過優(yōu)化參數(shù)及試劑配方,19例重測(cè)全部轉(zhuǎn)陰,剩余4例假陽(yáng)。系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)NAT216302163ELISA216032163系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)NAT216302163MR系統(tǒng)2140232163系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)血站結(jié)果216032163MR系統(tǒng)2140232163MRHIV化學(xué)發(fā)光VS血站結(jié)果(血站結(jié)果為參比)99.07%2140100.00%3MRHIV化學(xué)發(fā)光VSNAT(NAT為參比試劑)98.94%21400.00%0ELISAVSNAT(NAT為參比試劑)99.86%21600.00%0HBsAg測(cè)試結(jié)果MR系統(tǒng)與血站結(jié)果共有13例樣本結(jié)果不符。進(jìn)行第三方試劑驗(yàn)證:羅氏HBsAg定量檢測(cè)試劑盒與雅培HBsAg定量檢測(cè)試劑盒系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)NAT215122153ELISA2144192163系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)ELISA2144192163MR系統(tǒng)215492163系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)NAT215122153MR系統(tǒng)215492163系統(tǒng)陰性樣本陽(yáng)性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽(yáng)性符合率符合樣本數(shù)血站結(jié)論2142212163MR系統(tǒng)21549216399.86%21480.00%0MRHBsAg化學(xué)發(fā)光VS血站參考結(jié)果99.95%214142.86%9MRHBsAg化學(xué)發(fā)光VSNAT99.40%21380.00%0ELISAVSNATMRHBsAg化學(xué)發(fā)光VSELISA100.00%214447.37%913例結(jié)果不符HBsAg樣本驗(yàn)證結(jié)果13例不符樣本,邁瑞系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)完全符合,與雅培有2例不符。2例不符樣本中1例(218#-20140407)深圳血站測(cè)試結(jié)果與雅培結(jié)果一致。1例(30#-20140421)深圳血站結(jié)果與雅培、羅氏和邁瑞結(jié)果均不一致!HBsAg樣本日期樣本編號(hào)核酸結(jié)果ELISA血站結(jié)論IU/ml結(jié)果IU/ml結(jié)果IU/ml結(jié)果20140415115NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg2014041610NegPOSPOS0.01Neg<0.05Neg0.04Neg2014041692NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041782NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140417116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg20140417218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.05POS2014041859NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041887NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042034NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140420218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042130NegNegNeg0.48POS0.241POS0.82POS2014042146NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg20140423116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg注:邁瑞系統(tǒng)cutoff為0.08IU/ml,羅氏為0.057IU/ml,雅培為0.05IU/ml深圳市血站測(cè)試結(jié)果MR系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果羅氏e411系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果雅培i1000系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果12例參考HBsAg+測(cè)試結(jié)果分析樣本日期樣本編號(hào)測(cè)試結(jié)果(IU/mL,CO=0.08IU/mL)ELISA核酸20140416200214203112460.00+-20140417200214303981420.00+-20140417200214304068420.00+-20140418200214203281460.00+-20140418200214203230420.00+-20140418200214005968420.01-+20140419200214203356440.00+-20140419200214101835460.00+-20140421200214203455420.00+-20140421200214101924440.00-+20140422200214101940440.01+-20140424200214304348460.01+-

捕獲一例HIV窗口期背景:捐血者:男,39歲,在我中心第一次獻(xiàn)血2015年3月15采集血樣,16日同時(shí)進(jìn)行ELISA一遍、NAT一遍檢測(cè)。HIV檢測(cè)試劑為抗體/抗原試劑,TMA核酸檢測(cè)試劑;檢測(cè)結(jié)果:ELISA-/NAT+3月27日(采血12天后)進(jìn)行第二次抽樣檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果:ELISA+/NAT+HIVELISA檢測(cè)漏檢例證HIVELISA檢測(cè)漏檢例證樣本采集日期邁瑞HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg(COI)ELISATMA抗HIV硒標(biāo)方法WB帶型2015031562.5153.9399.980.23進(jìn)口第四代0.019國(guó)產(chǎn)第三代+-無(wú)特異性條帶2015032758.1151.9890.3711.24進(jìn)口第四代0.22國(guó)產(chǎn)第三代+-無(wú)特異性條帶對(duì)比測(cè)試結(jié)果說(shuō)明:HIV化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)窗口期早于ELISA2.CLIA試劑性能與進(jìn)口CLIA試劑對(duì)本例樣品的HIV檢測(cè)性能相當(dāng)行業(yè)規(guī)范對(duì)CLIA方法的政策性完善民族企業(yè)的崛起和進(jìn)步,國(guó)產(chǎn)試劑、檢測(cè)平臺(tái)的發(fā)展檢測(cè)成本的降低國(guó)家對(duì)血篩試劑審批制度的改進(jìn)

期待四、輸血安全相關(guān)科研工作匯報(bào)專門從事血液病毒核酸檢測(cè)的深入研究工作。研究輸血潛在的感染風(fēng)險(xiǎn),提高中心的科研水平。1.成立核酸研究室1.人才的引進(jìn):2013年以來(lái)引進(jìn)多名博士、碩士,提高科研能力2.購(gòu)置科研設(shè)備,建立研究平臺(tái)3.建立先進(jìn)的病毒分子生物學(xué)系統(tǒng)分析方法和技術(shù)。

聘請(qǐng)英國(guó)劍橋大學(xué)輸血醫(yī)學(xué)部JPALLAIN教授(英國(guó)兩院院士)為我中心核酸研究團(tuán)隊(duì)客座

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