無菌檢查法修訂版

無菌檢查法樊春玲2013.6無菌檢驗(yàn)

無菌實(shí)驗(yàn)的概念

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無菌檢查試驗(yàn)是消費(fèi)者和監(jiān)督機(jī)構(gòu)對無菌產(chǎn)品進(jìn)行微生物學(xué)檢查的唯一方法。無菌試驗(yàn)是用于檢驗(yàn)一次性使用無菌醫(yī)療器械是否染有活菌的一種方法。本實(shí)驗(yàn)系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。無菌檢驗(yàn)無菌(活菌對人體的影響)如醫(yī)療器械消毒不徹底，即有活菌存在，當(dāng)這些醫(yī)療器具使用人體，細(xì)菌即可進(jìn)入血液或無菌組織中生長繁殖，造成繼發(fā)性感染，可引發(fā)局部膿腫或全身感染，如菌血癥和敗血癥等。使病人發(fā)生高熱以及系列中毒癥狀，甚至危及病人生命，所以無菌性醫(yī)療器具標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無菌。即指經(jīng)消毒滅菌處理后，無任何活的微生物的存在，無菌檢驗(yàn)應(yīng)為無菌生長。無菌檢驗(yàn)無菌(死菌對人體的影響)各種滅菌方法均可殺死微生物，但它的死體，碎片以新陳代謝產(chǎn)物(毒素)仍然存在，內(nèi)毒素只有當(dāng)死之后才釋放出來。一般的消毒滅菌方法如熱力等化學(xué)，物理因素對毒素沒有破壞作用，在一旦使用此類產(chǎn)品，熱原首先用于中樞神經(jīng)，引起血管收縮，汗腺xian停止排汗，散熱減少，分解代謝加強(qiáng)，產(chǎn)熱增加，體溫上升，熱原進(jìn)入人體后數(shù)分鐘至1小時內(nèi)，發(fā)冷寒顫，面色蒼白，四肢冰冷，煩操不安等，持續(xù)0.5-1小時發(fā)生高熱可達(dá)39-40℃，持續(xù)4-6小時昏迷死亡。這就是常見的熱原反應(yīng)。

無菌檢驗(yàn)滅菌：滅菌室指殺滅或除去全部微生物。無菌；指產(chǎn)品上檢不出活的微生物。產(chǎn)品滅菌有三種方法；熱力滅菌(包括干熱濕熱)輻射滅菌環(huán)氧乙烷滅菌。實(shí)驗(yàn)室常用的幾種方法：干熱滅菌：火焰、燒灼、干烤高壓蒸汽滅菌：耐高溫和潮濕的物品紫外線滅菌：穿透力弱，用于無菌室、工作區(qū)空氣滅菌或物體表面滅菌無菌試驗(yàn)消毒：對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物。消毒室不徹底的，不能代替滅菌。主要消毒藥有：乙醇、碘伏、新吉爾滅、氯和次氯酸鹽無菌室要求無菌室環(huán)境潔凈度10000級，無菌室操作臺或超凈工作臺局部應(yīng)符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室應(yīng)在每周和每次操作前用75%乙醇或0.1%新潔爾滅或其他適宜消毒液擦拭工作臺面及可能污染的死角，開啟空氣過濾器及紫外燈1小時。操作完畢，用消毒液擦拭工作臺面，用紫外線燈殺菌不小于半小時。實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。無菌檢驗(yàn)醫(yī)療器械的無菌檢查目前依據(jù)GB∕T14233.2-2005和《中國藥典》2005年二部附錄中規(guī)定的方法。直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)，肌肉，皮下組織或接觸創(chuàng)傷，潰瘍等部位二發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料，滅菌器具等都要進(jìn)行無菌檢查。無菌檢查并不是絕對的沒有活菌，而是在產(chǎn)品一定的抽樣數(shù)量中，考察其滅菌工藝，最滅菌達(dá)到10-6的微生物存活概率，就認(rèn)定產(chǎn)品無菌。微生物限度檢查包括細(xì)菌，真菌。陽性對照細(xì)菌陽性對照菌，以金黃色葡萄球菌為對照菌，真菌陽性對照以白色念珠菌為對照菌。使用儀器超凈工作臺，光學(xué)顯微鏡，恒溫培養(yǎng)箱，壓力蒸氣滅菌器，集菌儀，電冰箱，干燥箱用具試管，注射器，量筒，三角瓶，移液管，集菌培養(yǎng)器，剪刀，鑷子，接種環(huán)，酒精燈，無菌衣，帽，口罩，牛皮紙等。試劑75﹪酒精，新潔爾滅溶液，0.9﹪氯化鈉，其他符合2010年版《中國藥典》附錄無菌檢查法要求的稀釋液和沖洗液實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備試管，注射器，量筒，三角瓶，移液管，集菌培養(yǎng)器，剪刀，鑷子，接種環(huán)，酒精燈，無菌衣，帽，口罩，牛皮紙等。試劑75﹪酒精，新潔爾滅溶液，0.9﹪氯化鈉，其他符合2005年版《中國藥典》附錄無菌檢查法要求的稀釋液和沖洗液樣品實(shí)驗(yàn)前的處理試管，注射器，量筒，三角瓶，移液管，集菌培養(yǎng)器，剪刀，鑷子，接種環(huán)，酒精燈，無菌衣，帽，口罩，牛皮紙等。試劑75﹪酒精，新潔爾滅溶液，0.9﹪氯化鈉，其他符合2010年版《中國藥典》附錄無菌檢查法要求的稀釋液和沖洗液實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備操作人員用自來水洗雙手，在用洗手液洗一遍，關(guān)閉紫外燈，進(jìn)入緩沖間，換鞋穿無菌衣，將所需物品脫去外包裝，移入無菌室，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。無菌檢查常用方法：

薄膜過濾法

直接接種法無菌檢查法

直接接種法1配養(yǎng)基的制備

細(xì)菌，霉菌，按培養(yǎng)基的說明書根據(jù)需要稱取干粉，按比列加蒸餾水，加熱溶解在大燒杯中進(jìn)行調(diào)節(jié)PH值，然后分裝到試管中滅菌121℃40分鐘。2預(yù)配養(yǎng)；細(xì)菌30-35℃培養(yǎng)48小時霉菌20-25℃培養(yǎng)72小時，如果無菌就可以使用。陰性對照不得有菌生長。3供試液的制備

管類器具；按管內(nèi)表面積每10㎝流過管內(nèi)腔1ml約10ml

容器類器具；如注射器可直接抽取公稱容量做為供試液

小型配件；

如注射針可直接投放到培養(yǎng)基內(nèi)。4取細(xì)菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基各接入一定量的供試液﹙各10管﹚培養(yǎng)及觀察陽性對照培養(yǎng)48-72小時應(yīng)生長良好，陰性對照不得有菌生長；細(xì)菌培養(yǎng)基在30-35℃培養(yǎng)，真菌培養(yǎng)基在23-28℃培養(yǎng)，各14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。

如果再接種后，或在在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天。觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。結(jié)果判斷當(dāng)陽性對照顯渾濁并確有細(xì)菌生長時，可根據(jù)觀察所得的結(jié)果判定。如細(xì)菌及真菌均為橙清或渾濁并非有菌生長判供試品符合規(guī)定。

如細(xì)菌及真菌培養(yǎng)基中任何1管顯渾濁并證明有菌生長，應(yīng)重試。若有菌生長判供試品不合格。薄膜過濾法利用集菌儀和3個一次性使用