菌種的生產(chǎn)與保藏

第三章菌種的生產(chǎn)與保藏菌種，好比農(nóng)作物的種子，是食用菌生產(chǎn)的根本，其優(yōu)劣直接影響食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量。因此，從事食用菌菌種工作的單位都必須認真做好菌種的培育和保藏工作。一、菌種培育技術(shù)

人工培育的菌種有母種、原種和栽培種之分。1）母種（一級菌種）：用孢子分離或組織分離等培育的菌絲體稱為母種。2）原種（二級菌種）：把母種擴大到木屑、棉籽殼等為主的培養(yǎng)料上的菌種稱為原種。3）栽培種（三級菌種）：由原種擴大培養(yǎng)成為生產(chǎn)上使用的菌種稱為栽培種。4）菌種：實質(zhì)上就是經(jīng)過人工培養(yǎng)并進一步繁殖的食用菌的純菌絲體。食用菌的制種程序組織分離接種→母種（一級）

接種→→原種（二級）

接種→→栽培種（三級）種菇孢子分離經(jīng)過這樣三級培養(yǎng)，食用菌菌絲數(shù)量大大增加。一般1支試管菌種可繁殖4~6瓶原種，每瓶原種又可擴大繁殖60~100瓶栽培種。培養(yǎng)培養(yǎng)母種原種、栽培種栽培種食用菌的制種程序菌種生產(chǎn)必須在嚴格的無菌條件下進行。為了保證制種的成功，除必須掌握制種技術(shù)外，還需要一些基本的設(shè)備和用品。1、接種設(shè)備⑴接種室要求:

①關(guān)閉嚴密，便于熏蒸、消毒；②空間不宜過大，一般長、寬、高均為2m即可;③接種室外面最好有一個緩沖室；④墻壁、天花板和地面都要平整、光潔；⑤內(nèi)裝有紫外燈和日光燈。(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具1、接種設(shè)備⑵接種箱

當菌種生產(chǎn)量不大時，可在接種箱內(nèi)進行。它是用木條作成框架，以3mm厚的玻璃作箱壁。要求：①關(guān)閉嚴密，便于熏蒸；②裝有日光燈和紫外燈。優(yōu)點：搬動方便，操作人員不會受有毒氣體危害。缺點：容量小。

1、接種設(shè)備⑶超凈工作臺原理：超凈工作臺是利用過濾除菌的原理，先將空氣過濾，得到無菌空氣，然后將無菌空氣從風洞打出，使工作臺范圍內(nèi)成為無菌狀態(tài)。要求：放置工作臺的房間要清潔，空氣流動小，最好安裝滅菌燈。優(yōu)點：有效可靠，操作使用方便，在夏季接種時，使操作人員感到舒適。每臺3000元左右，有條件的食用菌專業(yè)戶，可選用這種先進的接種設(shè)備。超凈工作臺(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具

2、滅菌設(shè)備1）手提式：容量小，適于斜面試管及玻璃器皿等；2）立式：容量大，投資大；3）臥式：容量大，投資大；4）家用24或26cm壓力鍋：母種、原種培養(yǎng)基。Ⅰ高壓蒸氣滅菌鍋優(yōu)點：省時、省燃料、效果好2）、3）一般在菌種場或研究所應(yīng)用。滅菌設(shè)備Ⅰ高壓蒸氣滅菌鍋(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具

2、滅菌設(shè)備Ⅱ常壓滅菌鍋目前農(nóng)村生產(chǎn)栽培種的必備設(shè)備，實際上是一種大型蒸籠式煮灶。底部為鑄鐵大鍋，上部為圓形木桶，桶內(nèi)裝數(shù)層供放培養(yǎng)基的格架。桶蓋裝有活絡(luò)搭及密閉的橡皮圈，由于鍋內(nèi)溫度最高是100℃，所以滅菌時間需維持10~12h，才能達到滅菌效果。(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具

3、培養(yǎng)設(shè)備⑴培養(yǎng)室大小：不宜過大，一般以20℃~25℃，培養(yǎng)5000~6000瓶菌種為宜，太大不易保溫和管理。要求：干凈、通風、保溫，應(yīng)設(shè)有調(diào)溫設(shè)備，使室溫保持在20℃~25℃。門窗應(yīng)設(shè)鐵紗，以防鼠、蟲為害。⑵生化培養(yǎng)箱是專業(yè)工廠生產(chǎn)的恒溫電器設(shè)備，用于培養(yǎng)母種或少量原種，可以根據(jù)需要任意溫度調(diào)節(jié)。(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具

4、培養(yǎng)菌種的容器母種：試管，常用規(guī)格20×180~200mm，18×180mm等。原種、栽培種菌種瓶：鹽水瓶、罐頭瓶菌種袋聚丙稀袋聚乙稀袋規(guī)格有：12~15×30~35cm，17×35~45cm母種-試管原種、栽培種—菌種瓶或塑料袋菌種瓶(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具

5、接種工具移植菌種于培養(yǎng)基上的工具稱接種工具，主要有以下幾種：接種針、環(huán)、刀、鉤、鏟、鋤、槍等；(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具6、常用的消毒藥品⑴70%酒精：一般用于手、種菇表面消毒；⑵0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金屬器械及種菇表面消毒；⑶0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具6、常用的消毒藥品⑷5%石炭酸：噴灑墻壁、地面及擦洗桌面等，也可用來蘇爾代替；⑸2%來蘇爾、新潔爾滅：用法同上；⑹甲醛（福爾馬林）：用于菇房和接種箱等空氣消毒；方法：關(guān)閉門窗消毒，自行氣化；用量：10ml甲醛＋5gKMnO4／立方米。(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具(二)母種生產(chǎn)技術(shù)1、母種培養(yǎng)基食用菌母種培養(yǎng)基的種類繁多，由于不同營養(yǎng)類型的食用菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求不同，所以，在培養(yǎng)不同食用菌母種時，應(yīng)選擇適宜該菌種的培養(yǎng)基。母種培養(yǎng)基要求營養(yǎng)豐富、完全、氮源、維生素的比例應(yīng)高?，F(xiàn)將食用菌常用的母種培養(yǎng)基列舉如下：(一)菌種生產(chǎn)常用的設(shè)備和用具(二)母種生產(chǎn)技術(shù)⑴配方①馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）馬鈴薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、瓊脂20g、H2O1000ml、pH6.5。適用于一般食用菌母種分離與培養(yǎng)，但草菇、猴頭菌等在此培養(yǎng)基上生長不良。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)②綜合馬鈴薯培養(yǎng)基馬鈴薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、KH2PO42g、MgSO40.5g、維生素B110mg、瓊脂20g、H2O1000ml、pH自然。適合培養(yǎng)草菇、猴頭菌、靈芝及各種食用菌菌種分離、保藏。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)③胡蘿卜葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胡蘿卜200g、葡萄糖（或蔗糖）18~20g、瓊脂20g、H2O1000ml、pH自然。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)④玉米粉培養(yǎng)基玉米粉40g、葡萄糖（或蔗糖）10g、瓊脂20g、H2O1000ml、pH自然；適用于大多數(shù)食用菌菌絲的生長。⑤馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、蛋白胨10g、瓊脂20g、H2O1000ml、pH自然；適用于培養(yǎng)和保藏多種食用菌。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)⑥黃豆芽、松針培養(yǎng)基黃豆芽250g、松針50g、葡萄糖（或蔗糖）20g、瓊脂20g、H2O1000ml、pH5~5.5。將松針、黃豆芽按量稱好，加水煮30min，取濾液，加入葡萄糖、瓊脂，充分攪拌，使瓊脂熔化，補水至1000ml，即分裝試管。主要用于培養(yǎng)竹蓀母種。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)⑦蘋果汁培養(yǎng)基蘋果100g、蛋白胨2g、蔗糖20g、瓊脂20g、H2O1000ml；主要用于草菇培養(yǎng)（配制方法同PDA）⑴配方⑵配制方法（以PDA為例）馬鈴薯（去皮、去芽眼）→切成片→稱取200g＋1000mLH2O→煮沸→雙層紗布過濾→取濾液并補足1000mL＋瓊脂→熔化＋其它營養(yǎng)物質(zhì)→調(diào)節(jié)pH（用HCl或NaOH）→分裝試管→滅菌（高壓蒸氣滅菌15-30min）→制成斜面→檢查滅菌效果（即28~30℃培養(yǎng)2~3d）其它天然培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基，如：玉米粉、黃豆粉、胡蘿卜、麩皮等原料，加適量水煮汁過濾，取濾液與其它成分混合。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)2、母種分離母種分離方法孢子分離組織分離基質(zhì)分離有性無性⑴孢子分離法

利用孢子在適宜培養(yǎng)基上形成菌絲來獲得純菌種的方法。孢子分離法1）單孢子分離法：培養(yǎng)基上只接種1個擔孢子，使它萌發(fā)成菌絲體而獲得純菌種的方法。如：雙孢蘑菇、草菇單個孢子分離得到菌絲便能結(jié)實。（一個孢子→萌發(fā)→菌絲體→純種）2）多孢子分離法：許多孢子接種于同一培養(yǎng)基上，使它們萌發(fā)自由交配來獲得純菌種的方法。如：香菇、平菇、金針菇、毛木耳等。（多個孢子→萌發(fā)→菌絲體→純種）(二)母種生產(chǎn)技術(shù)下面先解釋二個基本概念

1）同宗配合：同一擔子孢子萌發(fā)產(chǎn)生的兩條菌絲之間進行結(jié)合便能生育（自交親合、可孕，類似于高等植物自花授粉），可用單孢子分離。如：雙孢蘑菇、草菇

2）異宗配合：同一性別菌絲之間不親合，只有兩條性別不同的菌絲交配才能產(chǎn)生子實體。大多數(shù)食用菌屬此類型，需用多孢子分離法。

(二)母種生產(chǎn)技術(shù)擔子菌亞門中，約10%菌類屬同宗結(jié)合，90%以上是異宗配合，所以單孢子分離對大多數(shù)食用菌不適用，只有育種時才采用。此法技術(shù)復(fù)雜，生產(chǎn)上很少采用，在此不作詳述。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)多孢子分離簡單易行，生產(chǎn)上經(jīng)常采用，多孢子分離的具體操作方法有以下幾種：①整菇插種法：傘菌常用此法采得孢子。即選擇成熟度適當?shù)膬?yōu)良種菇，在無菌操作下，插入無菌孢子采集器內(nèi)，置適溫下讓其自然彈散孢子。用接種環(huán)取少量孢子，放入試管斜面上培養(yǎng)。種菇選擇：菌絲生長健壯，無病蟲雜菌，出菇均勻，轉(zhuǎn)潮較快，菇形圓整，菌蓋肥厚，達八九成熟。參見P48(二)母種生產(chǎn)技術(shù)孢子采集器是用來采集食用菌孢子的一種裝置。孢子采集器搪瓷盤（大號培養(yǎng)皿）培養(yǎng)皿種菇支架玻璃鐘罩（大漏斗）參見P48②懸釣法此法主要用于耳類（黑木耳、毛木耳、銀耳等）孢子的采集。耳片（表面消毒）→懸掛于培養(yǎng)基上方→培養(yǎng)→→取出掛鉤與耳片→培養(yǎng)→挑取先端菌絲→轉(zhuǎn)管純化→母種

12~24h培養(yǎng)基耳片參見P48組織分離：指通過菇體組織分離純種。優(yōu)點：操作簡便、取材廣泛、不易變異，保持原菌種優(yōu)良種性。方法：①選擇種菇（出菇早、無病蟲害、柄短、肉厚、大小適中、5~6分成熟）②組織分離⑵組織分離法參見P45選擇種菇→表面消毒（75%酒精或0.1%升汞）→撕成兩半→取菌柄菌蓋交界處→小塊菌肉→移入PDA→培養(yǎng)→觀察→轉(zhuǎn)管→純種

上述分離物在25℃下，經(jīng)3d~5d可看到分離物表面長出白色絨毛狀絲，每隔1d~2d檢查1次，隨時淘汰霉菌、細菌污染的培養(yǎng)物，培養(yǎng)10d~15d，再作1次轉(zhuǎn)管即得到純種。⑵組織分離法參見P45-46注：⑴取組織塊不要貪大，因組織塊小易定植;⑵有些食用菌不易用組織分離法獲純種；⑶不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。如：1）紅菇、乳菇等，因它們菇體細胞已泡囊化，再生能力極弱；又如：2）銀耳和木耳等膠質(zhì)菌，它們子實體中菌絲含量極少，組織分離法不易成功。而只能取其生長的基質(zhì)即菇木、耳木分離。⑵組織分離法

概念：

由菇木、耳木、培養(yǎng)料等食用菌生長基質(zhì)中的菌絲分離培養(yǎng)而成。這是利用潛在于寄主組織內(nèi)的菌絲體獲得純種的方法。（常用于銀耳及木耳菌種分離）⑶基內(nèi)菌絲分離法（基質(zhì)分離法）參見P46-47段木內(nèi)菌絲分離法：

取1~2cm菇木、耳木（子實體著生部位）→去皮→消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）→切去四周木塊→切成火柴桿粗細，0.5cm長的小木?！?根放入試管斜面上→培養(yǎng)→取菌絲→轉(zhuǎn)管純化⑶基內(nèi)菌絲分離法（基質(zhì)分離法）參見P46-47母種(二)母種生產(chǎn)技術(shù)3、菌種提純與擴大繁殖

用孢子、組織或基質(zhì)分離法得到的菌種，一般不宜直接用于生產(chǎn)，必須經(jīng)過提純方可應(yīng)用。⑴提純：選稀疏單菌落→邊緣取菌→接種試管斜面（3~5支）→培養(yǎng)→純菌種。⑵擴大繁殖：提純的母種或從有關(guān)單位引進的母種，數(shù)量均很少，應(yīng)擴大繁殖后再用。在母種繁殖時，最好一次多移些，不易多次轉(zhuǎn)管，以免影響出菇率，降低產(chǎn)量和質(zhì)量。一支斜面母種可移接40支左右斜面試管。4、質(zhì)量檢驗對分離、引進或轉(zhuǎn)管擴大的菌種，應(yīng)經(jīng)過質(zhì)量鑒定，選優(yōu)去劣，方可使用。1）檢驗方法①外觀鑒定優(yōu)良菌種：菌絲濃白、粗壯、富有彈性，則生命力強。如有子實體或茶褐色被膜，只要除去仍可使用。老化菌種：菌種已收縮、干燥或菌絲體自溶產(chǎn)生了大量紅褐色液體，說明生活力弱，不可使用。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)②顯微鏡檢驗

挑取少許菌絲于載玻片上，加蒸餾水1滴，蓋上蓋玻片，觀察菌絲形態(tài)是否為培育的菌種。③菌絲生長速度

將其接種到適宜斜面培養(yǎng)基上，在適溫下培養(yǎng)。凡菌絲生長較快、整齊、濃密而健壯的就是優(yōu)良母種。參見p52(二)母種生產(chǎn)技術(shù)②顯微鏡檢驗③菌絲生長速度④出菇試驗進行子實體產(chǎn)量和品質(zhì)評比。經(jīng)以上檢驗，通過綜合評比，選出菌絲生長速度較快，子實體生長健壯、品質(zhì)好、產(chǎn)量高的母種，即可供生產(chǎn)上使用。參見p52(二)母種生產(chǎn)技術(shù)(二)母種生產(chǎn)技術(shù)2）檢驗標準①首先要辨認分離或引進的是不是所需要的菌種；②有無雜菌污染，是否老化。(二)母種生產(chǎn)技術(shù)(三)原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù)原種和栽培種的生產(chǎn)，無論是培養(yǎng)基成分，配制方法和滅菌方法基本上是相同的。1）原種：是由試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種作種源接種而成，主要用于繁殖栽培種，也可直接用于生產(chǎn)。（母種→原種）2）栽培種：由原種作種源擴大而成，只能用于生產(chǎn)。（原種→栽培種)(三)原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù)1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法

培養(yǎng)料木屑——米糠培養(yǎng)料：木生菇類，如：木耳、銀耳、香菇；草莖或草糞——廄肥培養(yǎng)料：草生菇類，如：蘑菇、草菇；棉籽殼——米糠培養(yǎng)料：多種菇類。⑴糞草培養(yǎng)基（適用于蘑菇）稻草或麥秸20kg、糞肥（干）30kg、石膏500g、水適量。方法：稻草切成2cm長＋糞肥→混合發(fā)酵＋石膏→調(diào)水→裝瓶→滅菌⑵稻草麩皮培養(yǎng)基（草菇）干稻草78%、麩皮或米糠20%、蔗糖1%、過磷酸鈣1%、水適量方法：稻草切成2cm長→發(fā)酵→＋蔗糖＋麩皮＋過磷酸鈣1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法⑶木屑米糠培養(yǎng)基（香菇、木耳、猴頭、平菇等）木屑78%、麩皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水適量。

⑷木屑、麩皮、黃豆粉培養(yǎng)基（銀耳）木屑50kg、麩皮15kg、黃豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO40.25kg、水70~75kg。⑸棉籽殼培養(yǎng)基（平菇、猴頭、金針菇）

棉籽殼99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%、水適量。1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法(三)原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù)2、培養(yǎng)基（料）配制原則⑴掌握碳氮比例食用菌對碳和氮的需要有一個比例，簡稱碳氮比（C／Ｎ）。菌絲體生長階段：C／Ｎ=20∶1；子實體形成階段：C／Ｎ=30~40∶1；C／Ｎ過高，菌絲體生長過旺，而子實體小、產(chǎn)量低。2、培養(yǎng)基（料）配制原則⑵選好培養(yǎng)材料①首先選不含殺菌物質(zhì)的木屑杉、松、樟等樹種，含酚、酯、精油等殺菌物質(zhì)，會抑制食用菌生長。要用必須經(jīng)過處理，如：蒸煮、曬等。②根據(jù)食用菌的喜好選木屑如：培養(yǎng)香菇用樺木屑就比椴木屑好；培養(yǎng)金針菇用構(gòu)，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。⑶注意物理性狀培養(yǎng)原料要注意顆粒粗細、質(zhì)地軟硬程度，以及持水性能等物理性狀。⑷調(diào)節(jié)酸堿度各種食用菌需要的pH值不同，配制培養(yǎng)料時，應(yīng)選用NaOH、石灰、鹽酸或過磷酸鈣等物質(zhì)調(diào)節(jié)pH值。霉菌比食用菌喜歡更低的pH值，生產(chǎn)上有時為了控制這類雜菌的發(fā)生，往往將pH值適當調(diào)高0.5~1。2、培養(yǎng)基（料）配制原則3、原料選擇的注意事項（幾點說明）⑴木屑：樹種：除松樹、杉樹、柏樹、樟樹、蕓香屬、按屬等樹種之外，絕大多數(shù)闊葉樹和木屑都可以利用。（因其中含有酚、酯、精油等殺菌物質(zhì)）粗細：不宜過細，以免培養(yǎng)基過濕或通氣不良。

3、原料選擇的注意事項（幾點說明）⑴木屑：選擇：根據(jù)食用菌分解能力選擇，分解能力較強的食用菌采用硬質(zhì)闊葉樹木屑，反之采用軟質(zhì)樹種木屑。如：金針菇分解能力較弱，以含單寧較少木屑為宜，木屑越陳越好；茯苓菌分解能力較強，可采用顆粒粗的松木屑或松木釘。⑵米糠、麩皮作用作用：補充氮源和維生素。稻草、麥秸、木屑、棉籽殼等纖維素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。麩皮：含氮量比米糠多，但維生素不如米糠。米糠：含氮量比麩皮少。用量：一般10%~20%，過多易引起污染。3、原料選擇的注意事項（幾點說明）⑶加糖的作用①初期補充碳源，用量1%~5%。②誘導胞外酶的產(chǎn)生。纖維素原料，食用菌利用緩慢。加入少量白糖作為食用菌初期補充碳源，促進菌絲快速生長，同時誘導纖維素酶的產(chǎn)生，更好地利用纖維素。3、原料選擇的注意事項（幾點說明）⑷Ca2＋作用①提供食用菌鈣離子：原料中加石膏、CaCO3或過磷酸鈣、骨粉提供食用菌鈣離子；②鈣不斷中和食用菌產(chǎn)生的有機酸；③鈣還能中和單寧；④減少過量K、Mg對菌絲中毒，促進菌絲生長。3、原料選擇的注意事項（幾點說明）(三)原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù)4、原種、栽培種的制作方法

按配方稱取原料→拌料→裝瓶（袋）→打洞（孔徑1cm深至瓶底）→滅菌（1.5kg／cm2，1.5~2h）→冷卻→接種（接入黃豆大小一塊）→培養(yǎng)（25℃~27℃）→菌絲長滿瓶（袋）→培養(yǎng)7d~8d→擴大成栽培種。(三)原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù)5、雜菌檢查（菌種檢查）

接種后的原種，一般在3d~5d左右菌絲恢復(fù)生長，應(yīng)每天全面檢查雜菌情況，如有污染及時剔除。（正常為白色，若混有其它色澤，應(yīng)及時處理）；如發(fā)現(xiàn)接種塊無新菌絲萌發(fā)，則認為是死菌，應(yīng)及時補種。

正常：菌絲白色雜菌：黃、紅、綠、黑死菌：補種二、菌種保藏菌種是食用菌栽培成敗的關(guān)鍵。分離篩選一株優(yōu)良的菌種是一項艱苦的任務(wù)，而長期保持優(yōu)良菌種的性能，也是一項極為重要的工作。食用菌與其他微生物一樣，都是有遺傳性和變異性。遺傳性：保證了優(yōu)良菌種的性能相對穩(wěn)定，能傳給下一代，為菌種保藏提供了良好的條件。變異性：使高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的菌種，逐漸衰退，給菌種保藏帶來了困難。菌種保藏的目的：①保持菌種的優(yōu)良性狀；②降低衰退速度。③確保菌種純潔，長期在生產(chǎn)上應(yīng)用。（不衰退、不死亡、不污染雜菌）二、菌種保藏原理：降低菌種代謝活動。降低代謝活動方法：（創(chuàng)造各種條件）低溫干燥缺氧等在這些條件下，食用菌可處于“休眠”狀態(tài)或處于微弱的代謝活動。

常用的保存方法有以下幾種。

二、菌種保藏（一）斜面低溫保藏法這是一種較好的簡易保藏法，目前應(yīng)用最多。方法：將培養(yǎng)好的斜面菌種，放入4℃冰箱內(nèi)保藏。保存期：3~6月適用范圍：多數(shù)食用菌注：不適于草菇。由于草菇對低溫的耐受力較差，其菌絲在5℃下易死亡，所以保藏草菇菌種的溫度需提高至10~12℃或在草菇斜面菌種上加3~4ml10%甘油防凍。二、菌種保藏（二）石蠟封藏法（隔絕空氣法）方法：用注射器注入滅菌的石蠟。注入量以高出斜面尖端1cm為宜，然后塞上棉塞或無菌橡皮塞，用蠟封好，保藏在冰箱或低溫干燥處。（菌絲體與空氣隔絕，降低其代謝活動，防止培養(yǎng)基干燥）保存期：6年適用范圍：

可用于保藏所有不宜用冷凍或干燥保藏的真菌。石蠟培養(yǎng)基菌絲體二、菌種保藏（三）擔子孢子保藏法（干燥）食用菌的孢子，可用濾紙條、河砂、氯化硅膠作吸附劑，干燥后進行保存。1、濾紙片保藏法將食用菌的孢子吸附在無菌的濾紙條上，干燥后進行保存，一般可保存3~5年。方法：濾紙片（剪成4×0.8cm小條→滅菌）→收集孢子（讓孢子彈射到濾紙條上）→將有孢子的濾紙條放入試管中（含硅膠）→封口→冰箱中保存（三）擔子孢子保藏法（干燥）1、濾紙片保藏法2、砂土管保藏法砂土（2∶1）→裝管→滅菌→接入孢子→干燥→保存。（四）冷凍、真空、干燥保藏法這種方法是利用低溫、干燥、缺氧等條件保存菌種，一般可保存10年左右。二、菌種保藏三、制種、保藏中易碰到的問題及處理方法1、母種污染處理⑴細菌污染底部取菌：可根據(jù)細菌只發(fā)生在培養(yǎng)基表面，而真菌菌絲能穿透到培養(yǎng)基內(nèi)部的特點，用無菌操作法敲破試管取出培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基的底部挑取一小塊帶有菌絲的培養(yǎng)基，移植到另一試管中培養(yǎng)，可得到純正的母種。二、菌種保藏三、制種、保藏中易碰到的問題及處理方法1、母種污染處理⑴細菌污染底部取菌覆蓋培養(yǎng)：將熔化培養(yǎng)基冷卻到40℃，倒在已污染細菌的斜面上，使之形成厚約2cm的覆蓋層，當食用菌菌絲透過培養(yǎng)基形成新的菌落時，即可挑取轉(zhuǎn)管純化。三、制種、保藏中易碰到的問題及處理方法1、母種污染處理⑴細菌污染⑵真菌污染若污染的是青霉、黃霉、木霉等真菌，只要母種菌絲與這些雜菌沒有相聯(lián)或尚有一部分菌絲沒有相聯(lián)，并且這些雜菌的菌絲還沒有產(chǎn)生孢子時，可以用無菌方法仔細挑取沒有相聯(lián)的一部分菌絲，移植到另外的試管中繼續(xù)培育，就能得到純正的母種。三、制種、保藏中易碰到的問題及處理方法1、母種污染處理2、原種、栽培種被雜菌污染的原因有哪些？怎樣鑒別？根據(jù)雜菌開始發(fā)生的部位，大致有以下幾種污染原因：⑴若雜菌同時在培養(yǎng)基的上、中、下部位發(fā)生，主要是由于培養(yǎng)基滅菌不徹底造成的。⑵若雜菌開始發(fā)生在接種塊上，這很可能是母種或原種已經(jīng)感染了雜菌；或者是由于接種工具不嚴格（消毒），把雜菌帶入。2、原種、栽培種被雜菌污染的原因有哪些？怎樣鑒別？⑶若雜菌先在培養(yǎng)基表面發(fā)生，這是由于接種過程中無菌操作不嚴而引起的。⑷若雜菌是在接種后若干天才發(fā)生的，而且是發(fā)生在瓶口往下掛的，這說明雜菌是從棉花塞侵入培養(yǎng)基的。引起的原因是培養(yǎng)室濕度過大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。三、制種、保藏中易碰到的問題及處理方法3、為什么母種不能多次轉(zhuǎn)管移植？母種轉(zhuǎn)管次數(shù)多了會削弱菌絲的生活力，降低出菇率，甚至造成菌絲不孕而不能形成子實體。因此母種培育可以一次多培育幾支試管，不要反復(fù)多次分離轉(zhuǎn)管，以確保菌絲旺盛的生活力。（發(fā)生變異）4、優(yōu)良菌種的標準是什么？各種食用菌菌種，既有特定的質(zhì)量標準，也有共同的質(zhì)量標準。這些共同的質(zhì)量標準主要是純、壯兩條。⑴純：除銀耳菌種，其余各種栽培食用菌均是一種菌絲體的純培養(yǎng)物，不得混入雜菌或純培養(yǎng)物以外的其它菌種。例如：香菇7925菌種，只能是7925菌株菌絲體的純培養(yǎng)。4、優(yōu)良菌種的標準是什么？

第一、不得混入毛霉、根霉、曲霉、木霉等任何霉菌或細菌、病毒；（雜菌）第二、也不得混入平菇、金針菇等其它食用菌的菌絲體；（其它食用菌）第三、也不得混入香菇7925菌株以外的任何一種香菇菌株。（其它菌株）⑵壯：菌種長相正常、長勢旺、再生能力強。

選擇題1、與香灰菌伴生的食用菌有（A）。

A銀耳B木耳C蘑菇