活細(xì)胞高速激光共聚焦原理及應(yīng)用-2014-1-8

活細(xì)胞高速激光共聚焦顯微鏡簡介

生物技術(shù)研究室顏次慧2014-1-8一.活細(xì)胞觀察的優(yōu)勢(shì)活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀察靜態(tài)成像科研角度能夠連續(xù)觀察細(xì)胞及分子水平的動(dòng)態(tài)變化，闡明機(jī)制，更能說明問題需要大量樣品、時(shí)間點(diǎn)，樣品的差異化問題，出現(xiàn)假陽性結(jié)果應(yīng)用范圍既能滿足高分辨，又能夠滿足時(shí)間分辨要求比較高的實(shí)驗(yàn)無法做時(shí)間分辨比較高的實(shí)驗(yàn)，以及對(duì)細(xì)胞或分子實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)三維觀察實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)簡單化，操作步驟少，數(shù)據(jù)信息充足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)復(fù)雜，步驟多，數(shù)據(jù)信息少活細(xì)胞/活體熒光成像目標(biāo)：在最大程度保證生物活性的前提下獲得真實(shí)的連續(xù)動(dòng)態(tài)影像要求：盡可能減少外界因素對(duì)生理功能的影響，把光毒性和光漂白減少到最低，盡可能降低激發(fā)光強(qiáng)度，所以熒光信號(hào)非常微弱高速活細(xì)胞轉(zhuǎn)盤式激光共聚焦顯微鏡活細(xì)胞工作站二、活細(xì)胞觀察的革命性技術(shù)共聚焦原理

點(diǎn)掃描激光共聚焦雙轉(zhuǎn)盤式掃描激光共聚焦高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)構(gòu)成

共聚焦掃描單元單光子探測(cè)器Z軸防漂移顯微鏡用活細(xì)胞CO2培養(yǎng)室高精度XY電動(dòng)平臺(tái)激光光源、激光耦合系統(tǒng)高速壓電陶瓷Z軸馬達(dá)研究及倒置熒光顯微鏡系統(tǒng)軟件高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)用途主要用于長時(shí)間觀察并記錄熒光標(biāo)記的活細(xì)胞和固定細(xì)胞/組織的共聚焦圖像，進(jìn)而分析細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間發(fā)生的信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白表達(dá)、囊泡運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞與粒子之間的相互作用及生理學(xué)行為。單光子探測(cè)器AndoriXon探測(cè)極微弱信號(hào)，顯著減少活細(xì)胞光漂白以及光毒性損傷1.減少光毒性和光漂白高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)特點(diǎn)CCD芯片接收光信號(hào)并將其轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，這一過程系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生一定的電子噪聲電子信號(hào)經(jīng)芯片上的增益寄存器可放大至1000倍ElectronMultiplyingCCD(EMCCD)2.先進(jìn)的片上增益技術(shù)CCDEMCCD3.多維共聚焦成像3D:XYT、XYZ4D:XYZT、XYZ5D:XYZT6D:XYZTP4.多視野觀察

SingleImageField~20Cells2x2Montage~80Cells3x3Montage~180cells增加了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的樣本量XY電動(dòng)平臺(tái)探測(cè)單元ZDCCoverGlass:170umGlassbottomdish5.

Z軸防漂移

Z軸零漂移系統(tǒng)785nmLase