微生物的實驗室培養(yǎng)2014XU

選修一《傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用》《微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用》生殖方式：

二分裂細(xì)菌的形態(tài)球菌弧菌桿菌螺旋菌放線菌單細(xì)胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌孢子—生殖細(xì)胞病毒的結(jié)構(gòu)病毒的增殖：專題

微生物專題微生物概念及分類微生物培養(yǎng)微生物分離和計數(shù)微生物應(yīng)用一、微生物概念及分類1、概念：是指自然界中那些形態(tài)微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。第1節(jié)微生物的實驗室培養(yǎng)選修一專題2

課題1.微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識（一）微生物1、概念：是指自然界中那些形態(tài)微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。2、包括：沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的病毒、原核生物界、真菌界（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）生物細(xì)胞生物動物植物真菌原生生物非細(xì)胞生物真核生物原核生物細(xì)菌放線菌支原體衣原體藍(lán)藻病毒微生物————酵母菌、霉菌、蘑菇等菌落：單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)微生物的菌落特征因種而異.專題2課題1.微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(筆記）(一)微生物：1、微生物包括沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的_______、原核生物、___菌（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）2、菌落:（1）概念：單個或少數(shù)細(xì)菌等在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的子細(xì)胞群體，叫做菌落。（2）應(yīng)用：鑒定、分離、計數(shù)病毒真思考回憶:*組成細(xì)胞的主要元素有哪些?

C、H、O、N、P、S*是否還需要其它元素？

C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg等大量元素；Fe、Mn、Cu、Zn、B、CL、等微量元素*細(xì)菌等微生物的細(xì)胞也應(yīng)需要這些元素。C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg、Fe、Mn等碳源水氮源無機鹽（二）培養(yǎng)基1、概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需要，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。思考：配制培養(yǎng)基的基本原則（確定培養(yǎng)基配方的依據(jù)）_________________________2、營養(yǎng)成分（營養(yǎng)要素）多數(shù)培養(yǎng)基都含有水、無機鹽、碳源、氮源等四類營養(yǎng)物質(zhì)，在提供上述幾種營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還應(yīng)滿足微生物對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需要。根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要配制CC（二）培養(yǎng)基1、配制培養(yǎng)基的基本原則（確定培養(yǎng)基配方的依據(jù)）__________________________(2、多數(shù)培養(yǎng)基都含有_____________________等四類營養(yǎng)物質(zhì)，還應(yīng)滿足微生物對______、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及________的需要。3、最常用的碳源是____________；蛋白胨或牛肉膏可以為細(xì)菌提供___________類營養(yǎng)物質(zhì))根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要配制水、無機鹽、碳源、氮源葡萄糖氮源和碳源筆記PH氧氣2.微生物所需的營養(yǎng)要素碳源氮源(特殊營養(yǎng)物質(zhì))水無機鹽無機碳源：CO2、碳酸鹽—自養(yǎng)型有機碳源：糖類、脂肪等—異養(yǎng)型固氮菌：N2硝化細(xì)菌：NH3

其他：銨鹽、硝酸鹽、尿素、蛋白胨維生素、氨基酸、堿基等筆記3、培養(yǎng)基的種類

液體培養(yǎng)基（工業(yè)生產(chǎn)）固體培養(yǎng)基（分離計數(shù)）（1）根據(jù)物理性質(zhì)

半固體培養(yǎng)基（觀察運動，鑒定菌種）

選擇培養(yǎng)基（2）根據(jù)用途

鑒別培養(yǎng)基（3）化學(xué)成分學(xué)案P1(加大量瓊脂)(加少量瓊脂)合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基分離菌種鑒別菌種成分已知成分未知劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基3、培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基1）加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌2）不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌3）不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物4）加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基（依據(jù)標(biāo)記基因）篩選導(dǎo)入了重組DNA的受體細(xì)胞單克隆抗體的制備選擇培養(yǎng)基（筆記）選擇培養(yǎng)基篩選、分離的細(xì)胞加入青霉素?zé)o氮培養(yǎng)基無碳培養(yǎng)基依標(biāo)記基因，加入某種抗生素等酵母菌、霉菌等真菌固氮菌自養(yǎng)型細(xì)菌導(dǎo)入了重組DNA的受體細(xì)胞思考：1、所有的培養(yǎng)基都必須含碳源、氮源、水、無機鹽嗎？2、培養(yǎng)基中的營養(yǎng)要素，除了水以外的無機物只能是無機鹽？3、CO2既是自養(yǎng)型生物的碳源也是能源物質(zhì)？4、利用動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)病毒，行嗎？否；可以無碳源，也可無氮源否；碳源和氮源也可能是無機物否；光能或化學(xué)能病毒無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，只能寄生在活細(xì)胞中生存。所以，要利用活細(xì)胞培養(yǎng)病毒。（三）無菌技術(shù)防止外來雜菌入侵。方法：消毒(溫和)滅菌(強烈)煮沸:巴氏：80℃下煮15min化學(xué)藥劑:

75%酒精、氯氣紫外線消毒：灼燒滅菌：干熱滅菌：。高壓蒸氣滅菌：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：

無菌技術(shù)1、獲取純化培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。2、無菌措施：1)對實驗操作空間、操作者衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；對將培養(yǎng)用的器皿、接種工具和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌2)實驗操作時已滅菌材料等應(yīng)避免與周圍物品接觸；實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；接種工具等應(yīng)在酒精等火焰上灼燒后使用1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？2、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面?(15頁）3、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？防止雜菌污染消毒：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線或化學(xué)藥物消毒滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）滅菌；（3）消毒。旁欄思考（三）無菌技術(shù)1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是？

防止外來雜菌的入侵2、消毒與滅菌的區(qū)別？消毒是殺死部分對人體有害的微生物；滅菌是殺死所有微生物。3、最常用的滅菌方法是？

高壓蒸汽滅菌。筆記1）、科學(xué)家們用脈胞霉（一種真菌）為材料，進(jìn)行科學(xué)研究，用基本培養(yǎng)基來培養(yǎng)脈胞霉?；九囵B(yǎng)基中所含的營養(yǎng)要素一般包括：

_______________________________2）、酵母菌可用于食品工業(yè)的廢水處理，廢水中的淀粉或廢糖可為酵母菌的生長提供________類營養(yǎng)物質(zhì)。3）、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作為______類營養(yǎng)物質(zhì)加入到牛奶中的。4）、硝化細(xì)菌的碳源、氮源、能源依次為__________________________________。碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化釋放的化學(xué)能練習(xí)：二、實驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1、計算2、稱量操作步驟3．溶化

4．滅菌：高壓蒸汽滅菌

5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。

閱讀:P16(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基目的：______滅菌平板冷凝后，為什么要將平板倒置？防止冷卻后形成的水珠滴落到培養(yǎng)基上，造成污染1、在液體培養(yǎng)基中加入_____________而制成固體培養(yǎng)基.2、制備培養(yǎng)基的操作排序①溶化（使各種原料、瓊脂等加熱溶化）②滅菌③調(diào)PH值④計算（各成分用量）⑤稱量⑥倒平板（冷卻至50℃，將平板倒過來放置）正確的操作順序：_____________3、平板倒置的目的_____________________________________________________瓊脂（凝固劑）④⑤①③②⑥防止冷卻后形成的水珠滴落到培養(yǎng)基上，造成污染6．無菌檢查：

將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

二、實驗操作1、在液體培養(yǎng)基中加入______________而制成固體培養(yǎng)基.3、平板倒置的目的___________________________________________________瓊脂（凝固劑）

滴落到培養(yǎng)基上，造成污染筆記2、制備培養(yǎng)基的操作排序：___________________________________________________________（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基防止冷卻后形成的水珠計算——稱量——溶化——調(diào)PH值——滅菌—倒平板（二）純化大腸桿菌1、接種：將要培養(yǎng)的菌種接入到培養(yǎng)基上的過程叫接種。微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。思考討論:1、在接種前如何檢測培養(yǎng)基是否被污染？2、調(diào)查湖水中細(xì)菌污染情況，要使實驗結(jié)果更可靠，對照組如何處理？3、使用過的培養(yǎng)基（物），在遺棄前應(yīng)如何處理？將未接種的培養(yǎng)基在無菌條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。在另一平板上接種等量的無菌水滅菌；防止培養(yǎng)物污染環(huán)境。

平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次劃線后,可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.微生物的恒溫培養(yǎng)思考討論：1、平板劃線法接種的目的是什么？2、平板劃線法接種的用途？3、平板劃線法能不能調(diào)查某種微生物的種群密度（計數(shù)）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。思考討論：1、稀釋涂布平板法接種的目的是什么？2、稀釋涂布平板法接種的用途？3、平板劃線法能不能調(diào)查某種微生物的種群密度（計數(shù)）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選、計數(shù)。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。10-110-410-510-6平板劃線法稀釋涂布平板法相同點：分散出單細(xì)菌形成單菌落來分離菌種不同點：分別通過劃線和稀釋分散出單細(xì)菌，稀釋涂布平板法除分離菌種外還可以對微生物計數(shù)（二）純化大腸桿菌1、將準(zhǔn)備培養(yǎng)的菌種放到培養(yǎng)基中的過程叫做__________。2、微生物接種的最常用方法是________________和_________________3、能夠獲得單一菌落的(分離）接種方法有_______________和________________4、能夠測定樣品中活菌數(shù)的接種方法是_______________平板劃線法稀