標準解讀

《NY/T 540-2002 雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法》是一項農(nóng)業(yè)行業(yè)標準，用于檢測雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒（Avian Reovirus, ARV）的抗體或抗原。該標準詳細規(guī)定了使用瓊脂凝膠免疫擴散技術(shù)進行檢測的具體步驟和要求。

首先，標準明確了試驗所需的材料與試劑，包括但不限于特異性抗血清、待檢樣品（如雞血清）、瓊脂糖等。其中，抗血清需確保其對ARV具有高度特異性和敏感性；而瓊脂糖作為介質(zhì)，則要求純度高、透明度好以利于觀察反應(yīng)結(jié)果。

接著，在制備瓊脂板時，按照特定比例將瓊脂糖溶解于緩沖液中并加熱至完全融化后倒入平皿冷卻成固態(tài)。隨后，在瓊脂板上打孔形成圓形小坑，并分別加入適量的參考抗血清及待測樣本溶液。放置一段時間讓兩者在瓊脂內(nèi)部自由擴散相遇，通過觀察兩者之間是否產(chǎn)生白色沉淀線來判斷是否存在特異性免疫反應(yīng)。

此外，標準還規(guī)定了對照設(shè)置的重要性，包括陽性對照、陰性對照以及空白對照等，用以驗證實驗的有效性和準確性。只有當陽性對照出現(xiàn)預(yù)期的沉淀線且陰性對照無明顯變化時，才能認為本次實驗條件符合要求，進而對實際樣本的結(jié)果做出準確評估。


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  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實施
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s.11.220NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T540-2002雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法Agargelimmunodiffusiontestforviralarthritis2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T540-2002為了更好地適應(yīng)我國動物衛(wèi)生工作發(fā)展的需求，為基層獸醫(yī)、科研單位、口岸檢疫部門、無特定病原（SPF)雞場和大、中型雞場提供一種可操作性強的標準，特制定雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗技術(shù)標準本標準是根據(jù)實驗室多年來在雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法研究和應(yīng)用的基礎(chǔ)上制定的。本標準的附錄A為規(guī)范性附錄本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部動物檢疫所。本標準主要起草人：吳曉東、吳延功、朱萬光、杜元釗、范根成、劉佩蘭。

NY/T540-2002雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法1范圃本標準規(guī)定了檢測雞血清中雞病毒性關(guān)節(jié)炎群特異性抗體的瓊脂凝膠免疫擴散方法本標準適用于未免疫雞群雞病毒性關(guān)節(jié)炎的血清學診斷及用雞病毒性關(guān)節(jié)炎疫苗免疫后的抗體22瓊脂凝膠免疫擴散試驗2.1材料準備2.1.1器材：燒杯，直徑85mm培養(yǎng)血，孔徑3mm打孔器.6號～9號針頭·微量移液器及針頭。2.1.2抗原：按說明書使用。2.1.3標準陽性血清：按說明書使用2.1.4被檢血清:從雞妞膀靜脈或心臟無菌采血，分離血清,4℃或一20℃保存?zhèn)溆?.1.5瓊脂板：制作方法見附錄A。2.2操作方法2.2.1瓊脂板打孔用打孔器在瓊脂板上如圖1所示打梅花型孔，大批檢疫時，亦可按圖2所示打孔，孔徑3mm.孔距3mm,打孔后挑出孔內(nèi)瓊脂塊。然后放在酒精燈火焰上方加熱封底圖1瓊脂板打孔示意圖圍2瓊脂板打孔示意圍2.2.2加樣用微量移液器加樣。2.2.2.1在圖1中加樣方法如下：“a）7號孔加抗原；b）1、3.5號孔加被檢血清;c）2

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