第二章實驗技術(shù)基礎(chǔ)

第二章實驗技術(shù)基礎(chǔ)第一節(jié)樣品的采集與保存第二節(jié)樣品的制備和前處理技術(shù)第三節(jié)試驗方法原理及方法選擇第四節(jié)試驗誤差及消除方法第五節(jié)試驗數(shù)據(jù)的整理和處理復(fù)習(xí)思考題課前復(fù)習(xí)題1、2、3返回2023/2/62第一節(jié)樣品的采集與保存一、樣品采集與保存的重要性和要求二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序三、樣品的采集四、樣品運輸和保存返回2023/2/63一、樣品采集與保存的重要性和要求1.采樣的含義及重要性（1）含義從某原料或產(chǎn)品的總體中抽取樣品的過程為采樣。扦樣：從一批受檢糧油中均勻地、有代表性地扦取原始樣品的過程。2023/2/64一、樣品采集與保存的重要性和要求1.采樣的含義及重要性（2）重要性試驗是采樣和制樣的結(jié)果，樣品必須很好地代表整個貨批的任何一方面待分析的質(zhì)量。否則，再先進(jìn)的分析設(shè)備、再精確的測試方法、再準(zhǔn)確的試樣分析結(jié)果，都將毫無意義。采樣是分析工作的基礎(chǔ)，正確的采樣方法、合理的保存和及時送檢是保證食品質(zhì)量與安全分析質(zhì)量的前提。2023/2/65一、樣品采集與保存的重要性和要求2.樣品采集與保存的要求（1）具有充分的代表性（2）方法不得隨意（3）執(zhí)行操作規(guī)范（4）強(qiáng)調(diào)真實性有些樣品在采樣、運輸和保存中易受外界因素影響而變質(zhì)，必須嚴(yán)格保護(hù)樣品以減少外界因素對樣品原始特性的改變。對于易變化的樣品，應(yīng)強(qiáng)調(diào)即時采樣，即時分析。2023/2/66一、樣品采集與保存的重要性和要求（5）把握典型性。在食品安全監(jiān)測中，對于懷疑被污染的原料、產(chǎn)品和商品，應(yīng)采集接近污染源和易受污染的典型樣品；對于發(fā)生中毒或懷疑有毒的原料、產(chǎn)品和商品，應(yīng)采集與中毒者有關(guān)的典型樣品；對于發(fā)生摻假或懷疑摻假的原料、產(chǎn)品或商品，應(yīng)按可能的線索提示，采集有可能揭露摻假的典型樣品。2023/2/67二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語原始樣品：按采樣規(guī)則和操作要求，從待測原料、產(chǎn)品和商品的一個檢驗批或貨批的各個部位采集的分樣（又稱小樣）均勻混合在一起形成的樣品。固體樣品一般不少于1kg，液體不少于4L。檢驗批：是進(jìn)行技術(shù)檢驗的一個批量，也是抽樣檢驗的一個母體。一般一個生產(chǎn)批即為一個檢驗批。但當(dāng)生產(chǎn)批量很大而生產(chǎn)周期又很長時，可以按預(yù)先規(guī)定的方法將一個生產(chǎn)批劃分為若干個檢驗批。但不同的生產(chǎn)批不能合并為一個檢驗批。貨批：同一貨批指相同品名、相同物品、相同來源、相同包裝、甚至相同生產(chǎn)批次的物品構(gòu)成的貨物群體。2023/2/68二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語平均樣品：將原始樣品按一定的均勻縮分法分出的作為全面檢驗用的樣品。平均樣品量應(yīng)不少于試驗樣品的4倍，總量不得少于0.5kg（固體）或2L（液體）。2023/2/69二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語縮分：指按一定的方法，不改變樣品的代表性而縮小樣品量的操作，一般在將原始樣品轉(zhuǎn)化為平均樣品時使用。顆粒狀樣品采用四分法。液體樣品的縮分只要將原始樣品攪勻或搖勻，直接按平均樣品的需要量倒取或吸取即可。不均勻的大個樣品的縮分：先按大小分類，然后將尺寸同類的樣品縮分，最后把各類縮分樣再混合，構(gòu)成平均樣品或直接構(gòu)成試驗、復(fù)檢和保留樣品。2023/2/610二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語四分法示意圖2023/2/611二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語套斗分樣器2023/2/612二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語試驗樣品：由平均樣品分出用于全部項目檢驗用的樣品?？偭坎簧儆谌繖z驗項目需用量（設(shè)計各項目檢驗需要量時要考慮全部平行試驗）。標(biāo)準(zhǔn)樣品：由省級主管部門授權(quán)制備的成品糧油標(biāo)準(zhǔn)樣品。2023/2/613二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（一）基本術(shù)語標(biāo)本樣品（陳列樣品）：將各優(yōu)良品種制成標(biāo)本陳列于實驗室內(nèi)以作研究或供參觀用，稱為標(biāo)本樣品，又稱陳列樣品。復(fù)檢樣品：由平均樣品分出用于復(fù)檢用的樣品。量與試驗樣品相同。保留樣品：由平均樣品分出用于在一定時間內(nèi)保留，以備再次檢驗用的樣品。量與試驗樣品相同。2023/2/614二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序（二）基本程序需檢驗的批量農(nóng)產(chǎn)品原始樣品平均樣品采樣縮分復(fù)檢樣品保留樣品試驗樣品2023/2/615三、樣品的采集（一）液體樣品的采集散裝批量樣品的采集在批量產(chǎn)品的每一大儲存容器中，于不同深度、不同部位，分別采集每份約0.1～0.2L的5份獨立樣品（小樣），將5份樣品充分混合成約0.5～1L的混合樣品。如某一儲存容器中采出的樣品感官測定異常，則應(yīng)單獨留樣。2023/2/616三、樣品的采集（一）液體樣品的采集2.包裝樣品的采集（1）對于鐵桶、木桶等大包裝液體樣品，如果未規(guī)定檢驗批量，可以一貨批中隨機(jī)抽取數(shù)個（數(shù)量一般為一貨批總包裝件數(shù)的5％左右）包裝。用采樣管在每一抽取的包裝內(nèi)上、中、下部分分別吸取0.1～0.2L樣品，如果感官無異常，將各包裝抽取的樣品充分混合，從中再取2～4L的混合樣品作為原始樣品。2023/2/617三、樣品的采集（一）液體樣品的采集2.包裝樣品的采集（2）對于內(nèi)部包裝為盒、瓶、罐等，外部包裝為箱等液體樣品，如果沒有規(guī)定檢驗批，一般可隨機(jī)抽?。▁為該貨批的總箱數(shù)）箱，然后從每箱中隨機(jī)抽出1個小包裝，合并為原始樣品。2023/2/618三、樣品的采集（二）固體樣品的采集1.散裝批量樣品的采集在散裝批量顆?；蚍勰┊a(chǎn)品的每一大儲存器中，于不同深度、不同部位，分別采取每份約0.1～0.2kg的5～10份樣品，將這些樣品充分混合成約0.5～2.0kg的混合樣品。2023/2/619三、樣品的采集（二）固體樣品的采集2.包裝樣品的采集一般對于內(nèi)部包裝為盒、袋、包等，外部為紙箱、塑料箱等固體樣品，都規(guī)定了檢驗批量盒采樣量。如果沒有規(guī)定檢驗批，一般可隨機(jī)均勻抽取箱（x為該貨批的總箱數(shù)），然后從每箱中隨機(jī)抽出一個小包裝，合并為一檢驗批的原始樣品。2023/2/620三、樣品的采集（二）固體樣品的采集2.包裝樣品的采集在總貨批量相對較小時，常將總貨批作為一個檢驗批，采集的包裝數(shù)量一般為該貨批總包裝數(shù)的5％，最少為5個，最多為15個。如果總包裝數(shù)少于5個，則打開每一外包裝采集，每箱中抽取的小包裝視小包裝的大小而定，最少取一包。將抽出的樣品合并作為原始樣品。2023/2/621三、樣品的采集（三）流水生產(chǎn)線上的采集流水作業(yè)線上的取樣位點一般都設(shè)在作業(yè)線上的一定位置，每隔一定時間，從該位置取出流經(jīng)此位置的一件或一定量的樣品作為小樣，然后將一定時間范圍內(nèi)的小樣合并，就形成原始樣品。2023/2/622三、樣品的采集（四）微生物檢驗采樣采樣用具、容器滅菌方法（1）玻璃吸管、長柄勺、長柄匙、采樣容器和蓋子，要單個用紙包好，0.1MPa高壓蒸汽滅菌30min，之后干燥密閉保存待用。（2）采樣用的棉拭子、規(guī)板、生理鹽水、濾紙等，要分別用紙包好，0.1MPa高壓蒸汽滅菌30min，之后干燥密閉保存待用。（3）鑷子、剪子、小刀等金屬用具，用前在酒精燈上直接用火焰滅菌。2023/2/623三、樣品的采集采樣時的無菌操作（1）采樣前，操作人員用75％酒精棉球進(jìn)行手部消毒。（2）對于包裝食品，采取原始樣品時，至少小包裝暫時不要打開。必須打開包裝進(jìn)一步采樣時，包裝的采樣口處及周圍用75％酒精棉球消毒。（3）對于散包裝物品，采樣口處及周圍也需要用75％酒精棉球消毒。2023/2/624三、樣品的采集采樣時的無菌操作（4）固體、半固體、粉末狀樣品可用滅菌勺或刀采樣，液體樣品用滅菌玻璃吸管采樣，將其轉(zhuǎn)入滅菌樣品容器后，容器口經(jīng)滅菌消毒后密封。（5）采后樣品必須在4h以內(nèi)進(jìn)行檢驗，否則，必須冷藏或冷凍保存。2023/2/625三、樣品的采集（五）采樣注意事項一切采樣工具、容器、塑料袋、包裝紙等都應(yīng)清潔、干燥、無異味、無污染。采樣后，對每件樣品都要做好記錄，采樣時樣品應(yīng)及時貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)注明貨主、品名、檢驗批編號、樣品編號、采樣日期、地點、堆位、生產(chǎn)日期、班次、采樣負(fù)責(zé)人。2023/2/626三、樣品的采集（五）采樣注意事項如果發(fā)現(xiàn)貨品有污染的跡象或?qū)儆诟泄佼惓悠?，?yīng)將污染或異常的貨品單獨抽樣，裝入另外的容器內(nèi)，貼上特別的標(biāo)簽，詳細(xì)記錄污染貨品的堆位及大約數(shù)量，以便分別化驗。生鮮、易腐的樣品應(yīng)在采集后4h內(nèi)迅速送到實驗室進(jìn)行分析或處理，應(yīng)盡量避免樣品在分析前發(fā)生變化。盛裝樣品的容器應(yīng)當(dāng)是隔絕空氣、防潮的玻璃容器或其它適宜和結(jié)實的容器。2023/2/627三、樣品的采集（六）采樣記錄現(xiàn)場采樣記錄采樣前，采樣負(fù)責(zé)人必須了解受檢食品的原料來源、加工方法、運輸保藏條件、生產(chǎn)和銷售中各環(huán)節(jié)的衛(wèi)生狀況。如外地進(jìn)入的食品，應(yīng)審查該批食品的有關(guān)證件，包括商標(biāo)、送貨單、質(zhì)量檢驗證書、衛(wèi)生檢疫證書、監(jiān)督機(jī)構(gòu)的檢驗報告等。隨后對受檢食品的品名、數(shù)量、包裝類型及規(guī)格、樣品狀態(tài)、現(xiàn)場環(huán)境等進(jìn)行了解，并對該批食品總體進(jìn)行初步感官檢查。然后按實際樣品的適宜采集方法和采樣規(guī)則，正式開始采樣。2023/2/628三、樣品的采集（六）采樣記錄現(xiàn)場采樣記錄（1）物主（被采樣單位或法人）（2）品名、數(shù)量、商標(biāo)、包裝類型及規(guī)格、樣品狀態(tài)。（3）物品產(chǎn)地、生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)批號。（4）送貨單、質(zhì)檢合格單、衛(wèi)檢合格單等證件編號。（5）采樣地點、現(xiàn)場環(huán)境條件。2023/2/629三、樣品的采集（六）采樣記錄現(xiàn)場采樣記錄（6）初步的總體感官檢查結(jié)果（如包裝有無破損、變形和受污染、散裝品外觀有無霉變、生蟲、受污染等異?，F(xiàn)象）。（7）采樣目的、采樣方法和方式。2023/2/630三、樣品的采集（六）采樣記錄現(xiàn)場采樣記錄（8）各檢驗批或貨批的編號、原始樣品編號、特殊或異常樣品編號及其觀察現(xiàn)象。（9）采樣單位蓋章、采樣負(fù)責(zé)人簽字、采樣日期。（10）物主負(fù)責(zé)人簽字。2023/2/631三、樣品的采集（六）采樣記錄

2.樣品封簽和編號每件樣品采好后，立即由采樣人封簽，并在包裝外貼好標(biāo)簽，明確標(biāo)明樣品編號、品名、來源、數(shù)量、采樣地點、采樣人和采樣日期；采樣全部完畢并整理好現(xiàn)場后，將同一檢驗批或貨批的每件樣品統(tǒng)一裝在固定的包裝內(nèi)，由采樣人再次封簽，并貼好標(biāo)簽，注明品名、來源、采樣地點、檢驗編號、采樣人和采樣日期。異常和特殊樣品應(yīng)獨立封簽和獨立貼標(biāo)（標(biāo)簽特征最好與其他的不同）。2023/2/632三、樣品的采集（六）采樣記錄3.采樣單采樣單一式兩份，一份交被采樣單位或法人，一份由采樣單位留存。或者根據(jù)實際情況，確定采樣單數(shù)量。采樣單內(nèi)容包括：物主名稱品名、數(shù)量、編號物品產(chǎn)地、生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)批號檢驗批數(shù)量和每一檢驗批采得樣品數(shù)量采樣單位（蓋章）、采樣人（簽字）、采樣日期物主負(fù)責(zé)人（簽字）2023/2/633二、樣品采集的基本術(shù)語和基本程序思考題：根據(jù)以上學(xué)習(xí)的基本采樣知識，請分別說明大豆（散裝）、含有小包裝的豆奶粉、礦泉水（瓶裝）和散裝豆油的樣品采集方法。2023/2/634四、樣品運輸和保存（一）樣品運輸不論是將樣品送回實驗室，還是將樣品送到別處去分析，都要考慮和防止樣品變化。生鮮樣品要先凍結(jié)后再用冰壺運送，易揮發(fā)樣品要密封運送，水分較多的樣品要裝在幾層塑料食品袋內(nèi)封好，干燥而揮發(fā)性很小的樣品可用牛皮紙袋盛裝，但牛皮紙袋不防潮，還需要有防潮的外包裝。所有樣品的外包裝要結(jié)實而不易變形和損壞。此外，運輸過程中要注意車輛等運輸工具的清潔，注意車站、碼頭有無污染源，避免樣品污染。2023/2/635四、樣品運輸和保存（二）樣品保存采用的樣品應(yīng)盡快分析，復(fù)檢樣品和保留樣品要保質(zhì)保存。保存樣品時同樣要嚴(yán)格注意衛(wèi)生，防止污染。返回2023/2/636第二節(jié)樣品的制備和前處理技術(shù)一、樣品制備和前處理的定義和目的二、樣品制備三、樣品的前處理返回2023/2/637一、樣品制備和前處理的定義和目的1.樣品制備和前處理的定義樣品的制備和前處理，兩者間沒有本質(zhì)上的區(qū)別，有時統(tǒng)稱為樣品的前處理，是指樣品經(jīng)一些準(zhǔn)備性處理轉(zhuǎn)化為最終分析試樣的技術(shù)過程。樣品制備：是一些簡單的處理，包括樣品整理、清洗、勻化和縮分等。前處理：分析試樣需經(jīng)過進(jìn)一步樣品前處理才能作為最終分析試樣，這是進(jìn)一步的處理就是俠義的前處理。2023/2/638一、樣品制備和前處理的定義和目的2.目的去掉試驗樣品中不值得分析的部分和一部分雜質(zhì)，保證分析試樣成分均勻和試樣中的待檢物含量至少高于分析方法的檢出限。樣品制備工具2023/2/639二、樣品制備面粉、淀粉、砂糖、奶粉、咖啡等粉末狀和較細(xì)的顆粒狀樣品只要充分?jǐn)嚢杈鶆蚓涂勺鳛樽罱K分析樣品。谷物、大豆、堅果、花椒等天然顆粒狀樣品的制備包括去雜和去殼，有些檢驗項目還要求去麩、皮、籽、小梗等。飲料、油脂、煉乳、蜂蜜、醬油、糖漿等液態(tài)食品的樣品制備方法主要是充分混勻，如果這些樣品中有結(jié)晶、結(jié)塊或很稠時，可在不高于50℃的水浴中邊加溫邊攪拌使充分勻化。2023/2/640二、樣品制備4.對于個體過大的固體，如香腸、水果、面包、動物、瓜、薯類等，設(shè)法減小個體體積才能進(jìn)一步均勻化，也就是是樣品制備時的縮分。縮分的基本要點是不斷中分和間隔切分。5.整魚、貝、畜、禽、蛋及生鮮水果、瓜、蔬菜、薯類等的樣品制備時，先要去除不可食部分，再進(jìn)行分析。2023/2/641二、樣品制備6.罐頭食品制樣時，將罐頭打開，固體和湯汁分別稱重，小心去除固體中的不可食部分后再稱重，按可食固體和液體的質(zhì)量比各取一定量，混合后于搗碎機(jī)內(nèi)搗碎勻化。7.水果、蔬菜、薯類等生鮮農(nóng)產(chǎn)品分析前一般必須清洗和去皮，但分析農(nóng)藥殘留時，原則上不宜清洗和去皮，得仔細(xì)小心地將泥土簡單清去。2023/2/642三、樣品的前處理（一）提?。ǘ┯袡C(jī)物破壞法（三）沉析（四）層析（五）透析（六）蒸餾法（七）濃縮干燥2023/2/643三、樣品的前處理（一）提取含義：即待測物質(zhì)與樣品分離的過程。主要使用無機(jī)或有機(jī)溶劑從樣品中提取被測物。（1）浸提：如果樣品為固體，稱為浸提。（2）萃取：如果樣品為液體，稱為萃取。2.目的：去除分析干擾物和富集待測物質(zhì)。3.原理：溶質(zhì)在互不相溶的介質(zhì)中的擴(kuò)散分配。將溶劑加入樣品中，經(jīng)過充分混合和一定時間的等待，溶質(zhì)就會從樣品中不斷擴(kuò)散進(jìn)入溶劑，直至擴(kuò)散分配平衡。2023/2/644三、樣品的前處理（一）提取分配系數(shù)：擴(kuò)散分配平衡時，溶質(zhì)在原介質(zhì)和溶劑中的濃度比稱為分配系數(shù)（k）。一般為提高提取效率和節(jié)約溶劑，應(yīng)采用每次少量加入溶劑和多次提取的方法。2023/2/645三、樣品的前處理（一）提取Mr=Mo·（Vw/（KVo+Vw））n

其中，Mo——樣品中溶質(zhì)的起始含量

Mr——經(jīng)n次等溶劑量提取后，溶質(zhì)在原介質(zhì)中的保留量

K——分配系數(shù)

Vw——提取所用的樣品體積

Vo——一次提取所用的溶劑量（體積）認(rèn)真觀察后，可以看出，括號內(nèi)是一真分?jǐn)?shù)，所以隨著n的增大，Mr將迅速縮小。2023/2/646三、樣品的前處理（一）提取例如，如果Vw為100g，K為100，Vo為20ml，n為5次，則Mr/Mo為2.4×10-7。也就是說，經(jīng)過5次提取后，溶質(zhì)在原樣品中的保留量與起始量之比已小到2.4×10-7。同樣可以算出，如果要求經(jīng)過一次提取就達(dá)到相同的效果，則需要4000ml的溶劑。2023/2/647三、樣品的前處理（一）提取4.溶劑的選擇應(yīng)選擇對被測物和干擾物有盡可能大的溶解度差異的溶劑，還應(yīng)避免選擇兩介質(zhì)難以分離、黏度高和易產(chǎn)生泡沫的溶劑。要根據(jù)分析樣品和化合物的特性來選擇。一般原則：“相似相溶”原理；溶劑對樣本有較強(qiáng)的滲透能力；沸點45～80℃；不能與樣本發(fā)生反應(yīng)作用；毒性低，價格便宜。2023/2/648三、樣品的前處理（一）提取4.溶劑的選擇（1）難溶于水的被測物石油醚、乙醚、氯仿、二氯甲烷、苯、四氯化碳等作提取溶劑。（2）易溶于水的被測物水、酸性水溶液、堿性水溶液、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等作提取溶劑。2023/2/649（一）提取5.幾種常用的提取方法（1）浸漬、漂洗法對附著在樣本表面的成分的提取效果較好。（2）振蕩法（3）勻漿、搗碎法2023/2/650（一）提取

5.幾種常用的提取方法（4）索氏提取器法少量多次萃取用該方法。用它提取固體樣品中的油脂、脂溶性色素、脂溶性纖維素等十分普遍，常用石油醚、乙醚等作為提取劑，樣品受熱溫度低，提取效率高，操作方便，但是花費時間長。三、樣品的前處理2023/2/651三、樣品的前處理（一）提?。?）索氏提取器法2023/2/652三、樣品的前處理（一）提取（5）超臨界CO2萃取技術(shù)和液態(tài)CO2提取技術(shù)主要用于提取香精油、保健成分和其它天然有機(jī)成分。這兩種提取方法使用的溶劑（CO2）對原介質(zhì)和待提取物化學(xué)惰性高、在最終樣品中無殘留，提取效率高、樣品不必過于破碎，因此是高級的提取方法。2023/2/653三、樣品的前處理（一）提取（5）超臨界CO2萃取技術(shù)和液態(tài)CO2提取技術(shù)超臨界流體萃取分離過程是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進(jìn)行的。當(dāng)氣體處于超臨界狀態(tài)時,成為性質(zhì)介于液體和氣體之間的單一相態(tài),具有和液體相近的密度,粘度雖高于氣體但明顯低于液體,擴(kuò)散系數(shù)為液體的10～100倍;因此對物料有較好的滲透性和較強(qiáng)的溶解能力,能夠?qū)⑽锪现心承┏煞痔崛〕鰜怼?023/2/654三、樣品的前處理（一）提?。?）超臨界CO2萃取技術(shù)和液態(tài)CO2提取技術(shù)液態(tài)CO2提取技術(shù)除了要求有低溫條件以保證CO2不大量揮發(fā)損失外，其他方面與一般的溶劑提取無任何差別。超臨界CO2萃取技術(shù)則要求用專門的儀器，這種儀器既包括提取室，又包括分離室。CO2在提取室內(nèi)以超臨界狀態(tài)與樣品接觸，達(dá)到飽和提取后，轉(zhuǎn)入分離室，在脫離超臨界狀態(tài)的同時CO2與提取的物質(zhì)分離，此后，CO2被重新轉(zhuǎn)入超臨界狀態(tài)重復(fù)使用，如此反復(fù)提取與分離，直到提取與分離徹底完成。2023/2/655壓縮機(jī)

萃取釜

制冷MVC-760L

二氧化碳循環(huán)泵

2023/2/656三、樣品的前處理2023/2/657三、樣品的前處理（一）提?。?）固相萃取技術(shù)固相萃取就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。

2023/2/658三、樣品的前處理自動固相萃取儀2023/2/659三、樣品的前處理（一）提取（7）固相微萃取技術(shù)這一技術(shù)使用表面涂有選擇性吸附高分子材料的石英纖維作為提取器，可以直接將其插入樣液，也可將其插入樣品瓶的頂空，通過一段時間的擴(kuò)散達(dá)到分配平衡，然后將石英纖維直接插入氣相色譜或液相色譜的進(jìn)樣器，在那里對解析萃取的待測物進(jìn)行分析。60Fiber-SPME三、樣品的前處理2023/2/661三、樣品的前處理（8）超聲波輔助萃取優(yōu)點：價廉快速，簡便安全，批量處理樣品。2023/2/662三、樣品的前處理（二）有機(jī)物破壞法分析測定食品中重金屬和其他礦物質(zhì)時，常首先將有機(jī)物破壞。尤其是進(jìn)行微量元素分析時，由于這些成分可能與食品中的蛋白質(zhì)或有機(jī)酸結(jié)合牢固，嚴(yán)重干擾分析結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性。破除這種干擾的方法就是在不損失礦物質(zhì)的前提下全盤破壞有機(jī)質(zhì)。有機(jī)物破壞法分為以下兩類：2023/2/663三、樣品的前處理（二）有機(jī)物破壞法1.干法（灰化法）：將樣品灰化。用灰分來測定這些元素。該法的優(yōu)點在于破壞徹底、操作簡便、使用試劑少，適用于除砷、汞、鉛、銻等以外的金屬元素的測定。等離子灰化機(jī)2023/2/664三、樣品的前處理（二）有機(jī)物破壞法干法灰化又分直接灰化法（用于含Cu、Pb、Zn樣品中的有機(jī)物破壞）Ga(OH)2法（用于含砷有機(jī)樣品的破壞）NaOH法（適用于含錫樣品的有機(jī)物破壞）2023/2/665三、樣品的前處理（二）有機(jī)物破壞法2.濕法在酸性溶液中，利用強(qiáng)氧化劑使有機(jī)質(zhì)分解的方法稱為濕法。該法的優(yōu)點是使用的分解溫度低于干法，因此減少了金屬元素?fù)]散損失的機(jī)會，應(yīng)用范圍較為廣泛。2023/2/666三、樣品的前處理（二）有機(jī)物破壞法2.濕法按使用氧化劑的不同，濕法又被分為以下幾類：（1）硫酸——硝酸消化法（2）高氯酸——硝酸——硫酸消化法（3）高氯酸（或雙氧水）——硫酸消化法（4）硝酸——高氯酸消化法2023/2/667三、樣品的前處理（三）沉析在食品質(zhì)量與安全分析實驗中，沉析分離技術(shù)是經(jīng)常用到的。通常用沉析法去除溶液中的蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)。促進(jìn)蛋白沉析的方法通常由以下幾種：鹽析——加入NaCL或（NH4）2SO4有機(jī)溶劑沉析法——加入乙醇或丙酮等電點沉析2023/2/668三、樣品的前處理（三）沉析1、鹽析在存有蛋白質(zhì)的液體分散系中加入一定量的氯化納或硫酸銨，可以使蛋白質(zhì)沉析下來。鹽析中的加鹽可以是粉狀鹽，也可以是飽和鹽溶液。調(diào)解適當(dāng)?shù)膒H和溫度，可達(dá)到很好的鹽析效果。2023/2/669三、樣品的前處理（三）沉析2、有機(jī)溶劑沉析法可用于蛋白質(zhì)和多糖的沉析。在存有蛋白質(zhì)和（或）多糖的液體分散系中加入一定量的乙醇或丙酮等有機(jī)溶劑，可以降低介質(zhì)的極性和介電常數(shù)，從而降低蛋白質(zhì)和（或）多糖的溶解度，就會使蛋白質(zhì)和（或）多糖沉析下來。由于向多水分散系中加入有機(jī)溶劑是放熱反應(yīng)，這種沉析要在低溫下進(jìn)行。2023/2/670三、樣品的前處理（三）沉析3、等電點沉析蛋白質(zhì)的電荷狀況與介質(zhì)的pH有密切關(guān)系，當(dāng)pH達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點時，蛋白質(zhì)就會發(fā)生沉析，這樣可使它與其他還原性物質(zhì)分開。2023/2/671三、樣品的前處理（四）層析目的：樣品的凈化、同類物質(zhì)的分級、被測組分的富集。原理：樣品組分隨流動相進(jìn)入層析床，在床內(nèi)與固定相接觸，經(jīng)吸附、離子交換、分子篩或在兩相分配平衡等作用，分別在床內(nèi)不同位置展成條帶，再經(jīng)隨后的洗脫作用先后脫離床體，經(jīng)分別收集，待測組分就得凈化，不同類甚至同類不同種的物質(zhì)就得到分離。層析可分為分為柱層析和薄層層析。2023/2/672三、樣品的前處理（四）層析3.柱層析（1）含義：將固定相放在水中分散后，一次性加入柱子，保證柱床中始終充滿水，可以有效對樣品進(jìn)行分離的方法。（2）常用固定相硅膠或氧化鋁細(xì)粉、離子交換樹脂、多糖凝膠和改性纖維素。（3）影響柱層析效果的因素選定的固定相選定的展開液和洗脫液的極性或其pH和離子強(qiáng)度相對于樣品量的柱徑和柱長裝柱和進(jìn)樣的操作水平洗脫的速率2023/2/673三、樣品的前處理柱層析2023/2/674三、樣品的前處理（四）層析4.薄層層析（1）含義：將固定相鋪在玻璃板或塑吸板上形成薄層，讓展開劑（流動相）帶動著樣品由板的一端向另一端擴(kuò)散。（2）常用固定相硅膠和氧化鋁（3）薄層層析的顯跡方法物理法——紫外燈照射法化學(xué)法——蒸汽顯跡和噴霧顯跡薄層色譜掃描儀法——可用于顯跡，也可以用于定量2023/2/675三、樣品的前處理薄層層析2023/2/676三、樣品的前處理（五）透析透析膜是一種半透膜，如玻璃紙、腸衣和人造的商品透析袋，它們只允許小分子透過。（六）蒸餾法利用物質(zhì)間不同的揮發(fā)性，通過蒸餾將它們分離。2023/2/677三、樣品的前處理定氮蒸餾裝置蒸餾裝置2023/2/678三、樣品的前處理（七）濃縮干燥由于提取、層析等前處理過程引入了許多溶劑，可能會降低待測組分的濃度或不適宜直接進(jìn)樣，后續(xù)分析有可能需要將這些溶劑部分或全部去除，此過程稱為濃縮或干燥。自然揮發(fā)法可以采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸干或濃縮可以采用冷凍干燥樣品少時，可以采用氮氣吹干法，易氧化、蒸汽壓高的樣品不能采用2023/2/679三、樣品的前處理旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器2023/2/680三、樣品的前處理冷凍干燥機(jī)2023/2/681三、樣品的前處理返回氮氣吹干儀2023/2/682第三節(jié)試驗方法原理及方法選擇一、試驗方法概述二、試驗方法原理返回2023/2/683一、試驗方法概述方法主要有：感官分析方法——最初的和最適宜現(xiàn)場檢驗的方法化學(xué)分析方法——原理清晰、結(jié)果準(zhǔn)確、所需設(shè)備少、具體方法積累多儀器分析方法——靈敏度高、速度快、對于微量多組分分析更為適宜生物試驗方法——傳統(tǒng)生物分析速度慢、結(jié)果準(zhǔn)確、需設(shè)備簡單現(xiàn)代生物分析靈敏度高、速度快、結(jié)果可靠2023/2/684二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法食品質(zhì)量感官鑒別的基本方法，其實質(zhì)就是依靠視覺、嗅覺、味覺、觸覺和聽覺等來鑒定食品的外觀形態(tài)、色澤、氣味、滋味和硬度（稠度）。不論對何種食品進(jìn)行感官質(zhì)量評價，上述方法總是不可缺少的，而且常是在理化和微生物檢驗方法之前進(jìn)行。2023/2/685二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法1.視覺檢驗

通過被檢物作用于視覺器官所引起的反映對食品進(jìn)行評價的方法稱為視覺檢驗。這是判斷食品質(zhì)量的一個重要感官手段。食品的外觀形態(tài)和色澤對于評價食品的新鮮程度、食品是否有不良改變以及蔬菜、水果的成熟度等有著重要意義。視覺鑒別應(yīng)在白晝的散射光線下進(jìn)行，以免燈光隱色發(fā)生錯覺。鑒別時應(yīng)注意整體外觀、大小、形態(tài)、塊形的完整程度、清潔程度，表面有無光澤、顏色的深淺色調(diào)等。2023/2/686二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法1.視覺檢驗在鑒別液態(tài)食品時，要將它注人無色的玻璃器皿中，透過光線來觀察；也可將瓶子顛倒過來，觀察其中有無夾雜物下沉或絮狀物懸浮，據(jù)此判斷食品是否受到了污染或變質(zhì)。檢驗時應(yīng)從外往里檢驗，先檢驗整體外形，如罐裝食品有無鼓罐或凹罐現(xiàn)象；軟包裝食品是否有脹袋現(xiàn)象等，再檢驗內(nèi)容物，然后再給予評價。2023/2/687二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法2.嗅覺檢驗通過被檢物作用于嗅覺器官而引起的反映評價食品的方法稱為嗅覺檢驗。人的嗅覺器官相當(dāng)敏感，甚至用儀器分析的方法也不一定能檢查出來極輕微的變化，用嗅覺鑒別卻能夠發(fā)現(xiàn)。2023/2/688二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法1.嗅覺檢驗當(dāng)食品發(fā)生輕微的腐敗變質(zhì)時，就會有不同的異味產(chǎn)生。如核桃的核仁變質(zhì)所產(chǎn)生的酸敗而有哈喇味，西瓜變質(zhì)會帶有餿昧等。食品的氣味是一些具有揮發(fā)性的物質(zhì)形成的，受溫度的影響較大，所以在進(jìn)行嗅覺鑒別時常需稍稍加熱，但最好是在15℃～25℃的常溫下進(jìn)行，因為食品中的氣味揮發(fā)性物質(zhì)常隨溫度的高低而增減。在鑒別食品的異味時，液態(tài)食品可滴在清潔的手掌上摩擦，以增加氣味的揮發(fā)；識別畜肉等大塊食品時，可將一把尖刀稍微加熱刺入深部，拔出后立即嗅聞氣味。2023/2/689二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法1.嗅覺檢驗嗅覺器官長時間受氣味濃的物質(zhì)刺激會疲勞，靈敏度降低，因此，食品氣味鑒別的順序應(yīng)當(dāng)是先識別氣味淡的，后鑒別氣味濃的，檢驗一段時間后，應(yīng)休息一會，以免影響嗅覺的靈敏度。在鑒別前禁止吸煙。

2023/2/690二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法3.味覺檢驗通過被檢物作用于味覺器官所引起的反應(yīng)評價食品的方法稱為味覺檢驗。感官鑒別中的味覺對于辨別食品品質(zhì)的優(yōu)劣是非常重要的一環(huán)。味覺器官不但能品嘗到食品的滋味如何，而且對于食品中極輕微的變化也能敏感地察覺。如做好的米飯存放到尚未變餿時，其味道即有相應(yīng)的改變。2023/2/691二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法3.味覺檢驗味覺是由味蕾產(chǎn)生的，味蕾的靈敏度與食品的溫度有密切關(guān)系。進(jìn)行食品的滋味鑒別時，最好使食品處在20℃～45℃之間，以免溫度的變化會增強(qiáng)或減低對味覺器官的刺激。味覺檢驗前不要吸煙或吃刺激性較強(qiáng)的食物，以免降低感覺器官的靈敏度。檢驗時取少量被檢食品放入口中，細(xì)心品嘗，然后吐出，用溫水漱口。幾種不同味道的食品在進(jìn)行感官評價時，應(yīng)當(dāng)按照刺激性由弱到強(qiáng)的順序，最后鑒別味道強(qiáng)烈的食品。在進(jìn)行大量樣品鑒別時，中間必須休息，每鑒別一種食品之后必須用溫水漱口。對已有腐敗跡象的食品，不要進(jìn)行味覺檢驗。

2023/2/692二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法4.觸覺檢驗通過被檢物作用于觸覺器官所引起的反映評價食品的方法稱為觸覺檢驗。觸覺檢驗主要是借助手、皮膚等器官的觸覺神經(jīng)來檢驗食品的膨、松、軟、硬、彈性（稠度），以評價食品品質(zhì)的優(yōu)劣。例如，對谷物可抓起一把，憑手感評價其水分；根據(jù)魚體肌肉的硬度和彈性，常?？梢耘袛圄~是否新鮮或腐??；評價動物油脂的品質(zhì)時，常須鑒別其稠度等。在感官測定食品的硬度（稠度）時，要求溫度應(yīng)在15℃～20℃之間，因為溫度的升降會影響到食品狀態(tài)的改變。2023/2/693二、試驗方法原理（一）食品質(zhì)量感官鑒別法此外，在品嘗食品時，除了味覺外，還有脆性、粘性、彈性、硬度、冷熱、油膩性和接觸壓力等觸感。進(jìn)行感官檢驗時，通常先進(jìn)行視覺檢驗，再進(jìn)行嗅覺檢驗，然后進(jìn)行味覺檢驗及觸覺檢驗。2023/2/694二、試驗方法原理（二）化學(xué)分析法滴定法（1）分類酸堿滴定法絡(luò)合滴定法氧化還原滴定法沉淀滴定法2023/2/695二、試驗方法原理（2）主要步驟寫出滴定反應(yīng)方程式，確定被測成分與滴定成分的定量關(guān)系配制標(biāo)準(zhǔn)溶液將樣品配成溶液，該溶液同時作為反應(yīng)介質(zhì)，因此，消除干擾和副反應(yīng)的物質(zhì)也應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r候加入溶液用標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定樣品溶液計算2023/2/696二、試驗方法原理（二）化學(xué)分析法2.紫外——可見分光光度法（1）原理利用某些物質(zhì)的分子吸收200～800nm光譜區(qū)的輻射來進(jìn)行分析測定的方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子和分子軌道上的電子在電子能級間的躍遷，廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量測定。2023/2/697（2）紫外——可見分光光度計的簡易結(jié)構(gòu)光源單色器樣品室檢測器信號指示裝置光源

在整個紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。

可見光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長范圍在320～2500nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。2023/2/698單色器

將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出任一波長單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。2023/2/699樣品室

樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見區(qū)一般用玻璃池。檢測器

利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)檢流計、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動控制和結(jié)果處理2023/2/6100光的吸收基本定律——朗伯-比爾定律透光率（透射比）Transmittance透光率定義：T取值為0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光It2023/2/6101光吸收的基本定律(1)朗伯-比爾定律（Lambert-Beerlaw）

當(dāng)一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質(zhì)時，一部分被吸收，一部分透過介質(zhì)，一部分被器皿的表面反射。如圖所示，設(shè)入射光強(qiáng)度為I0吸收光強(qiáng)度為Ia，透過光強(qiáng)度為It，反射光強(qiáng)度為Ir。I‘0I‘rI‘tI‘a(chǎn)2023/2/6102Lambert-Beerlaw入射光強(qiáng)度透射光強(qiáng)度透光度吸光度摩爾吸光系數(shù)：L·mol–1·cm-1溶液厚度溶液濃度其物理意義：一定溫度下，一定波長的單色光通過均勻的、非散射的溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和厚度的乘積成正比。2023/2/6103二、試驗方法原理（三）儀器分析法1.原子吸收光譜法（Atomicabsorptionspectroscopy）（1）原理原子吸收光譜法簡稱原子吸收，是基于被測元素基態(tài)原子在蒸汽狀態(tài)對共振輻射的吸收進(jìn)行元素定量分析的方法。原子吸收中基態(tài)原子吸收原子共振輻射光發(fā)生電子躍遷，檢測波長范圍在60～1250nm，這和紫外—可見分光光度法相同。2023/2/6104二、試驗方法原理（2）原子吸收與紫外分光光度法的區(qū)別紫外中，由樣品溶液中的分子吸收單色光而發(fā)生電子躍遷，在原子吸收中，是由樣品在一定條件下轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的蒸汽態(tài)基態(tài)原子吸收原子共振輻射光而發(fā)生電子躍遷。紫外中，分子吸收單色光產(chǎn)生的是帶狀光譜，在原子吸收中，基態(tài)原子吸收原子共振輻射光產(chǎn)生的是線狀光譜。紫外中，入射光是由氘燈、鎢燈和單色器產(chǎn)生的單色光，在原子吸收中，入射光是由空心陰極燈產(chǎn)生的原子共振輻射光。2023/2/6105二、試驗方法原理（3）原子吸收儀的構(gòu)造

原子吸收分光光度計裝置示意圖

空心陰極燈原子化器檢測器信號指示裝置燃?xì)夂椭細(xì)膺M(jìn)樣器2023/2/6106二、試驗方法原理（4）操作步驟配制標(biāo)準(zhǔn)溶液配制樣品試液開啟儀器預(yù)熱和調(diào)整燈電流開燃?xì)夂椭細(xì)忾y及時點火調(diào)節(jié)原子化溫度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣測定樣品試液進(jìn)樣測定2023/2/6107二、試驗方法原理（三）儀器分析法2.近紅外光譜分析法（Nearintra－redspectoum，NIR）（1）波長范圍700～2500nm（2）特點可用于水溶液樣品，含水固體和泥漿狀樣品，樣品可不經(jīng)溶劑稀釋，制備溴化鉀片等處理而直接測定，速度快，效果優(yōu)、無損、無污染、可進(jìn)行多組分同時測定。分析對象多樣，可以直接分析顆粒、粉末、片劑、纖維或是溶液、乳濁液甚至是活體的生物組織等。2023/2/61082.近紅外光譜分析法（Nearintra－redspectoum，NIR）（3）近紅外光譜儀的分類傅立葉變換聲光掃描光柵掃描光電列陣固定光路型（4）工作過程近紅外反射光譜分析——要求樣品力度一致和表面光滑近紅外投射光譜分析——可重復(fù)性較高，但靈敏度較低二、試驗方法原理2023/2/6109二、試驗方法原理（三）儀器分析法3、色譜法（1）概念和參數(shù)A.色譜法是一組相關(guān)分離方法的總稱，這些方法包括兩個相，一相是固定相，通常是表面積很大的多孔性固體或涂在固體表面上的高黏度的涂層；另一相是流動相，通常是液體或氣體。2023/2/61103、色譜法

B.分配系數(shù)和分配比在色譜過程中，不同組分在固定相和流動相中差別分配的原因是它們的分配系數(shù)或分配比有差別，而這一差別可能來自兩相對這些物質(zhì)的物理吸附力、化學(xué)吸附力、溶解度、離子配對鍵合力、擴(kuò)散阻力和特異性親和力的不同。二、試驗方法原理2023/2/6111B-1分配系數(shù)

在一定溫度和壓力下，一組分在固定相和流動相之間分配達(dá)平衡時的濃度比值。即：

K=一組分在固定相中的濃度/該組分在流動相中的濃度=Cs/CmK值除與自身本質(zhì)、流動相、固定相和溫度有關(guān)外，不受其他因素影響。二、試驗方法原理2023/2/6112B-2分配比在一定溫度和壓力下，一組分在兩相間分配達(dá)到平衡時，分配在固定相和流動相中的質(zhì)量比。即：k=一組分在固定相中的質(zhì)量/該組分在流動相中的質(zhì)量=Ms/Mmk值越大，說明組分在固定相中的量越多，相當(dāng)于色譜的分離系統(tǒng)（色譜柱）對組分的容量大，是衡量色譜柱對分離組分保留能力的重要參數(shù)。它不僅隨柱溫、柱壓變化而變化，而且還與流動相及固定相的體積有關(guān)。

K=Ms/Mm=（Cs·Vs）/（Cm·Vm）二、試驗方法原理2023/2/6113C氣相和液相色譜中流動相和固定相狀態(tài)的不同是色譜種類劃分的主要依據(jù)。

C-1氣相流動相為氣體的稱為氣相。

C-2液相流動相為液體的稱為液相。二、試驗方法原理2023/2/6114D一組參數(shù)一組物質(zhì)的色譜行為可用一系列參數(shù)描述，這些參數(shù)是檢測器輸出的該物質(zhì)的色譜信號強(qiáng)度對時間做圖所得到的色譜流出曲線的種種特征。二、試驗方法原理煙葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留氣譜圖2023/2/6115二、試驗方法原理色譜圖色譜柱流出物通過檢測器時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間的曲線圖，其縱坐標(biāo)為信號強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為保留時間。2023/2/6116二、試驗方法原理（三）儀器分析法（色譜工作圖）2023/2/6117從色譜圖中，可得許多信息：1色譜峰的個數(shù)，可判斷所含組分的最少個數(shù)；2根據(jù)色譜峰的保留值，可以進(jìn)行定性分析；3根據(jù)色譜峰的面積或峰高，可以進(jìn)行定量分析；4色譜峰的保留值及其區(qū)域?qū)挾?，評價柱效；5色譜峰兩峰間的距離。二、試驗方法原理2023/2/6118

死時間（tM）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時間；

調(diào)整保留時間（tR

＇）：tR＇=tR－tM

（三）儀器分析法（保留值的基本參保數(shù)）1.基線無試樣通過檢測器時，檢測到的信號即為基線。2.保留值

（1）時間表示的保留值

保留時間（tR）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時所需的時間；2023/2/6119

（2）用體積表示的保留值

保留體積（VR）：

VR=tR×F0F0為柱出口處的載氣流量，單位：mL/min。

死體積（VM）：

VM=tM×F0

調(diào)整保留體積(VR＇)：

V

R＇=VR

－VM

2023/2/61203.相對保留值r21

組分2與組分1調(diào)整保留值之比：

r21=t′R2

/t′R1=V′R2/V′R1

相對保留值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，與其他色譜操作條件無關(guān)，它表示了固定相對這兩種組分的選擇性。2023/2/61214.區(qū)域?qū)挾?/p>

用來衡量色譜峰寬度的參數(shù)，有三種表示方法：（1）標(biāo)準(zhǔn)偏差()：即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半。（2）半峰寬(Y1/2)：色譜峰高一半處的寬度Y1/2=2.354（3）峰底寬(Wb)：Wb=42023/2/6122二、試驗方法原理2023/2/6123二、試驗方法原理2023/2/6124二、試驗方法原理1100型液譜2023/2/6125（LC-MS）二、試驗方法原理2023/2/6126二、試驗方法原理紅外光譜儀2023/2/6127氣相色譜二、試驗方法原理2023/2/6128離子色譜二、試驗方法原理1292023/2/6（四）現(xiàn)代生物技術(shù)方法酶聯(lián)免疫吸附測定法核酸檢驗法1302023/2/6

經(jīng)典的化學(xué)分析方法（滴定分析、重量分析、簡單的吸光光度法）是以簡單離子或分子為檢測對象的常量或微量分析，面對生物體系成分復(fù)雜且待測物濃度較低的測試條件則往往無能為力。

于是，一系列針對生物體系中化學(xué)成分的測量方法應(yīng)運而生。免疫化學(xué)分析即其重要成員，它將免疫學(xué)知識與化學(xué)分析手段有機(jī)結(jié)合，為生命體系中高特異性、超微量的分析提供了解決方法。酶聯(lián)免疫吸附測定法1312023/2/6一、基本原理

它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）②酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）③酶作用的底物（顯色劑）酶聯(lián)免疫吸附測定法1322023/2/6

測量時，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。1332023/2/6

其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。

這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標(biāo)儀）加以測定。

其方法簡單，方便訊速，特異性強(qiáng)。酶聯(lián)免疫吸附測定法1342023/2/6二、酶結(jié)合物

酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原,半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物。是ELISA成敗的關(guān)鍵試劑，它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng)，還具有酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用，但不同的酶選用不同的底物，將得到不同的顏色反應(yīng)。酶聯(lián)免疫吸附測定法1352023/2/6酶底物顯色反應(yīng)

測定波長

辣根過氧化物酶鄰苯二胺

四甲替聯(lián)苯胺

氨基水楊酸

鄰聯(lián)苯甲胺

2,2‘-連胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)銨鹽

橘紅色

黃色

棕色

蘭色

藍(lán)綠色492460449

425

642

堿性磷酸酯酶

4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽黃色

紅色400

500葡萄糖氧化酶

ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭黃色

深藍(lán)色405420β-Ｄ－半乳糖苷酶

甲基傘酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)熒光

黃色

360,450

420

酶聯(lián)免疫吸附測定法1362023/2/6ELISA的種類和變化

（一）雙抗體夾心法（二）間接法（三）競爭法（四）雙位點一步法（五）捕獲法測IgM抗體（六）應(yīng)用親和素和生物素的ELISA

酶聯(lián)免疫吸附測定法1372023/2/6間接法。此法是測定抗體最常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體，加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗滌后，加入酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測定。酶聯(lián)免疫吸附測定法1382023/2/6雙抗體夾心法。此法常用于測定抗原,將已知抗體吸附于固相載體,加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測定。酶聯(lián)免疫吸附測定法1392023/2/6酶聯(lián)免疫吸附測定法競爭法。此法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將抗原吸附于固相載體；加入待測抗原和一定量特異性抗體，使固相抗原與待測抗原二者競爭與抗體結(jié)合；經(jīng)過洗滌分離，最后結(jié)合于固相的抗體與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。1402023/2/6ELISA應(yīng)用實例1412023/2/6河豚毒素植物毒素如罌粟鹼、嗎啡、藻類毒素苯并芘主要有除草劑與殺蟲劑兩大類例如殺暝松（FN）、甲氟磷酸異已酶（SOMAN）、草不綠（Alachor）、西維因（Carbaryl）、多菌靈及克菌丹（Captan）等。農(nóng)藥的檢測：植物激素(IAA、GA、CTK、ABA)2023/2/6142ELISA試劑盒2023/2/6143酶聯(lián)免疫井1442023/2/6DNM-9602G酶標(biāo)分析儀DNM-9602標(biāo)配酶標(biāo)分析儀

DNM-9602A酶標(biāo)分析儀幾種酶標(biāo)分析儀1452023/2/6核酸檢驗法利用紫外－可見分光光度計檢測DNA含量和質(zhì)量。瓊脂糖凝膠電泳法測定檢測DNA分子大小。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。在凝膠電泳中，DNA分子的遷移速度與分子量的對數(shù)值呈反比關(guān)系。利用PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品中的外源DNA片段。（一些行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已出臺，國家標(biāo)準(zhǔn)和國際標(biāo)準(zhǔn)尚未出臺）1462023/2/6核酸檢驗法多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction）簡稱PCR技術(shù)，是80年代中期發(fā)展起來的一種體外擴(kuò)增特異DNA片段的技術(shù)。此法操作簡便，可在短時間內(nèi)在試管中獲得數(shù)百萬個特異的目的DNA序列的拷貝，PCR技術(shù)雖然問世僅數(shù)年時間，但它已迅速滲透到分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域，引起了生物技術(shù)發(fā)展的一次革命，目前它在分子克隆，目的基因檢測，遺傳病的基因診斷，法醫(yī)學(xué)，考古學(xué)等方面得到了廣泛的應(yīng)用。PCR技術(shù)實際上是在模板DNA，引物和４種脫氧核苷酸存在的條件下依賴于DNA聚合酶的酶促化合反應(yīng)，PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。反應(yīng)分三步：①變性（denaturation）；②退火（annealing）；③延伸（extension）。返回各種分析測試儀器在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用2023/2/61472023/2/61482023/2/61492023/2/61502023/2/61512023/2/61522023/2/61532023/2/61542023/2/6155第四節(jié)試驗誤差及消除方法一、誤差分類及其減免指南二、誤差的表示與傳遞返回2023/2/6156一、誤差分類及其減免指南分析結(jié)果與真實值之間的差值稱為誤差。根據(jù)誤差的來源和性質(zhì)，可以將誤差分為系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差。2023/2/6157一、誤差分類及其減免指南（一）系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差是由某種固定的原因引起的誤差。1.特點對分析結(jié)果的影響比較恒定；在同一條件下，重復(fù)測定，重復(fù)出現(xiàn)；影響準(zhǔn)確度，不影響精密度；可以消除。2023/2/6158一、誤差分類及其減免指南（一）系統(tǒng)誤差2.產(chǎn)生的原因方法誤差:方法誤差是由于分析方法本身不夠完善而引起的。儀器誤差:儀器誤差是由于所用儀器不夠精確所引起的誤差。試劑誤差:試劑誤差是由于測定時所用試劑或蒸餾水不純所引起的誤差。主觀誤差:操作誤差是由于分析操作人員所掌握的分析操作，與正確的分析操作有差別所引起的。2023/2/6159一、誤差分類及其減免指南（一）系統(tǒng)誤差3.

減免指南方法誤差——采用標(biāo)準(zhǔn)方法；儀器誤差——校正儀器；試劑誤差——做空白、對比實驗；主觀誤差——更換操作人員或通過培訓(xùn)糾正操作人員主觀錯誤。2023/2/6160一、誤差分類及其減免指南（一）隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差也稱偶然誤差，它是由某些無法控制和無法避免的偶然因素造成的。1.特點不恒定，可大可小，可正可負(fù)；難以校正：不能通過校正或小心操作來完全消除偶然誤差；服從正態(tài)分布：小誤差出現(xiàn)的幾率大，大誤差出現(xiàn)的幾率小。2023/2/6161一、誤差分類及其減免指南（一）隨機(jī)誤差在分析過程中還會遇到由于過失或差錯造成的所謂“過失誤差”。這是由于操作者責(zé)任心不強(qiáng)、粗心大意或違反操作規(guī)則等原因造成的，如讀錯刻度、加錯試劑、試液濺失、記錄和計算錯誤等。這種由于過失而造成的錯誤是可以避免的，不在誤差的討論范圍之內(nèi)。2023/2/6162一、誤差分類及其減免指南（一）隨機(jī)誤差2.產(chǎn)生的原因偶然因素，例如：實驗室環(huán)境溫度、壓力波動，偶然出現(xiàn)的振動，操作人員操作精度、讀數(shù)準(zhǔn)確性的正常波動等。2023/2/6163一、誤差分類及其減免指南（一）偶然誤差3.減免指南增加平行測定的次數(shù)，可以減小隨機(jī)誤差。必須注意的是，過多的增加平行測定次數(shù)，收效并不大，卻消耗了更多的試劑和時間。在一般分析中，平行測定4～6次已經(jīng)足夠，學(xué)生的驗證性教學(xué)實驗，平行測定2～3次即可。2023/2/6164

（一）絕對誤差和相對誤差1、絕對誤差（Ea）Ea=X-T測量值-真值=絕對誤差2、相對誤差（Er）Er=Ea/T×100%Er=100（測量值-真值）/真值

二、誤差的表示與傳遞2023/2/6165二、誤差的表示與傳遞（二）平均偏差與標(biāo)準(zhǔn)偏差1、平均偏差又稱算數(shù)平均偏差，用來表示一組數(shù)據(jù)的精密度。d=∑|x-x|/nx——某次測定數(shù)據(jù)x——一組平行測定數(shù)據(jù)的平均值n——平行測定次數(shù)2023/2/6166二、誤差的表示與傳遞（二）平均偏差與標(biāo)準(zhǔn)偏差2、標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差又稱均方根偏差S=∑(x-x)2/(n-1)變異系數(shù)CV%=S/X2023/2/6167二、誤差的表示與傳遞（三）誤差的傳遞1、系統(tǒng)誤差傳遞加減運算：△y=△x1+△x2……+△xn計算結(jié)果的絕對系統(tǒng)誤差等于各個直接測量值的絕對系統(tǒng)誤差之和。乘除運算：△y/y=△x1/x1+△x2/x2…+△xn/xn2023/2/6168（三）誤差的傳遞2、偶然誤差的傳遞加減運算：Sy2=Sx12+Sx22+……+Sxn2乘除運算：（Sy/y）2=（Sx1/x1）2+……+（Sxn/xn）2二、誤差的表示與傳遞返回2023/2/6169第五節(jié)試驗數(shù)據(jù)的整理和處理一、原始數(shù)據(jù)的整理二、可疑數(shù)據(jù)的取舍——過失誤差的判斷三、有效數(shù)字返回2023/2/6170一、原始數(shù)據(jù)的整理要保留好原始記錄。把原始數(shù)據(jù)按照一定的順序和范圍進(jìn)行整理。2023/2/6171二、可疑數(shù)據(jù)的取舍——過失誤差的判斷（一）Q檢驗法此法是將數(shù)據(jù)從小到大排列,如設(shè)為可疑值,按下式求統(tǒng)計量Q,Q稱為舍棄商.

上式的分母是極差,分子是可疑值與最臨近值之差,把Q與值比較,若,可疑值應(yīng)舍棄,否則保留,若是可疑值,Q從下式求出:

值與置信度和測量次數(shù)有關(guān),如下表所示2023/2/6172（一）Q檢驗法Q值表

測定次數(shù),n345678910置信度90%()0.940.760.640.560.510.470.440.4196%()0.980.850.730.640.590.540.510.4899%()0.990.930.820.740.680.630.600.572023/2/6173（二）格魯布斯法（Grubbs法）該法用到正態(tài)分布中反映測量值集中與波動的兩數(shù)和S,因而可靠性較高.應(yīng)用此法時,在計算了和S后,將測量值從小到大排列,同Q檢驗法一樣,應(yīng)按測量次數(shù)多少,確定檢驗或,若兩個都做檢驗,設(shè)x為可疑值,由下式求統(tǒng)計量T:

把T與表值比較,若,可疑值舍棄,否則保留,若為可疑值,T由下式求出:

值與測定次數(shù)和顯著性水準(zhǔn)有關(guān),如表2-42023/2/6174（二）格魯布斯法(表2-4)

值表測定次數(shù),n顯著性水準(zhǔn)α測定次數(shù),n顯著性水準(zhǔn)α0.050.0250.010.050.0250.0131.151.151.1582.032.132.2241.461.481.4992.112.212.3251.671.711.75102.182.292.4161.821.891.94152.412.552.7171.942.022.10202.562.712.882023/2/6175三、有效數(shù)字有效數(shù)字就是指在分析工作中實際上能測定到的數(shù)字，只有最后一位數(shù)字是不準(zhǔn)確，可能有±1的絕對誤差，而其余各位數(shù)字都是確定的。有效數(shù)字是測定結(jié)果的大小及精度的真實記錄，測定結(jié)果必須用有效數(shù)字來表示。在確定有效數(shù)字的位數(shù)時，數(shù)字“0”是否為有效數(shù)字，取決于它在數(shù)據(jù)中所處的位置。在小數(shù)點前面的“0”只起定位作用，不是有效數(shù)字；數(shù)據(jù)中間和最后一位的“0”是有效數(shù)字。2023/2/6176三、有效數(shù)字

有效數(shù)字位數(shù)確定之后，就要將多余的數(shù)字舍棄。舍棄多余數(shù)字的過程為數(shù)字修約，修約時所采用的方法稱為數(shù)字修約方法。數(shù)字修約通常采用“四舍六入五成雙”的方法。該方法規(guī)定：當(dāng)被修約的數(shù)小于或等于4時，則舍去；大于或等于

6時，則進(jìn)位；等于

5

且后面沒有數(shù)字或有數(shù)字“0”時，若前面是偶數(shù)則舍去，如是奇數(shù)則進(jìn)位；等于

5且后面有不為“0”的數(shù)字時，該數(shù)字總比5大，以進(jìn)位為宜。需要注意的是，在數(shù)字修約時只允許一次修約到所需位數(shù)，不能分次連續(xù)修約。2023/2/6177三、有效數(shù)字三、有效數(shù)字的運算規(guī)則1、加減運算取決于小數(shù)點后位數(shù)最少的數(shù)據(jù)的位數(shù)。0.0121+25.64+1.057=25.7091結(jié)果為25.712、乘除運算取決于小數(shù)點后位數(shù)最多的數(shù)據(jù)的位數(shù)。0.0325×5.103×60.0/139.8=0.071179184結(jié)果為0.0712返回2023/2/6178復(fù)習(xí)思考題舉例說明某農(nóng)產(chǎn)品的樣品采集與保存過程。舉例說明不同樣品的制備方法。舉例說明各樣品前處理方法的適宜樣品。名詞解釋：采樣、扦樣、原始樣品、平均樣品、保留樣品、試驗樣品、陳列樣品、復(fù)檢樣品、標(biāo)準(zhǔn)樣品、縮分、樣品制備、樣品前處理。返回2023/2/6179復(fù)習(xí)思考題試述現(xiàn)代儀器分析法主要包括那些方法，其各自的特點是什么？紫外分光光度法與原子吸收光譜法的主要區(qū)別有哪些？從色譜圖中可以得到那些信息？試述ELISA的測定原理。試述試驗誤差的分類，各種試驗誤差的特點、產(chǎn)生原因和減免措施。返回2023/2/6180課前復(fù)習(xí)題1.樣品采集的要求有哪些？（1）具有充分的代表性（2）方法不得隨意（3）執(zhí)行操作規(guī)范（4）強(qiáng)調(diào)真實性（5）把握典型性。2023/2/6181課前復(fù)習(xí)題2.簡述不同狀態(tài)樣品的縮分方法。顆粒狀樣品采用四分法。液體樣品的縮分只要將原始樣品攪勻或搖勻，直接按平均樣品的需要量倒取或吸取即可。不均勻的大個樣品的縮分：先按大小分類，然后將尺寸同類的樣品縮分，最后把各類縮分樣再混合，構(gòu)成平均樣品或直接構(gòu)成試驗、復(fù)檢和保留樣品。2023/2/6182課前復(fù)習(xí)題采樣縮分需檢驗的批量農(nóng)產(chǎn)品原始樣品平均樣品復(fù)檢樣品保留樣品試驗樣品3.簡述樣品采集基本程序。2023/2/6183課前復(fù)習(xí)題4.如何采集流水作業(yè)線上的樣品？流水作業(yè)線上的取樣位點一般都設(shè)在作業(yè)線上的一定位置，每隔一定時間，從該位置取出流經(jīng)此位置的一件或一定量的樣品作為小樣，然后將一定時間范圍內(nèi)的小樣合并，就形成原始樣品。5.如何抽取總貨批量較小的固體包裝樣品？在總貨批量相對較小時，常將總貨批作為一個檢驗批，采集的包裝數(shù)量一般為該貨批總包裝數(shù)的5％，最少為5個，最多為15個。如果總包裝數(shù)少于5個，則打開每一外包裝采集，每箱中抽取的小包裝視小包裝的大小而定，最少取一包。將抽出的樣品合并作為原始樣品。2023/2/6184課前復(fù)習(xí)題6.簡述樣品采集的注意事項。一切采樣工具、容器、塑料袋、包裝紙等都應(yīng)清潔、干燥、無異味、無污染。采樣后，對每件樣品都要做好記錄，采樣時樣品應(yīng)及時貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)注明貨主、品名、檢驗批編號、樣品編號、采樣日期、地點、堆位、生產(chǎn)日期、班次、采樣負(fù)責(zé)人。如果發(fā)現(xiàn)貨品有污染的跡象或?qū)儆诟泄佼惓悠?，?yīng)將污染或異常的貨品單獨抽樣，裝入另外的容器內(nèi)，貼上特別的標(biāo)簽，詳細(xì)記錄污染貨品的堆位及大約數(shù)量，以便分別化驗。生鮮、易腐的樣品應(yīng)在采集后4h內(nèi)迅速送到實驗室進(jìn)行分析或處理，應(yīng)盡量避免樣品在分析前發(fā)生變化。盛裝樣品的容器應(yīng)當(dāng)是隔絕空氣、防潮的玻璃容器或其它適宜和結(jié)實的容器。2023/2/6185課前思考題7.分別說明大豆（散裝）、含有小包裝的豆奶粉、礦泉水（瓶裝）和散裝豆油的樣品采集方法。散裝豆油：在批量產(chǎn)品的每一大儲存容器中，于不同深度、不同部位，分別采集每份約0.1～0.2L的5份獨立樣品（小樣），將5份樣品充分混合成約0.5～1L的混合樣品。如某一儲存容器中采出的樣品感官測定異常，則應(yīng)單獨留樣。礦泉水（瓶裝）：如果沒有規(guī)定檢驗批，一般可隨機(jī)抽?。▁為該貨批的總箱數(shù)）箱，然后從每箱中隨機(jī)抽出1瓶，合并為原始樣品。礦泉水（桶裝）：如果未規(guī)定檢驗批量，可以一貨批中隨機(jī)抽取數(shù)個（數(shù)量一般為一貨批總包裝件數(shù)的5％左右）包裝。用采樣管在每一抽取的包裝內(nèi)上、中、下部分分別吸取0.1～0.2L樣品，如果感官無異常，將各包裝抽取的樣品充分混合，從中再取2～4L的混合樣品作為原始樣品。大豆：在每