動(dòng)物模型謝強(qiáng)敏課件

人類疾病動(dòng)物模型概述免疫缺陷動(dòng)物腫瘤動(dòng)物模型系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型臨床專科疾病動(dòng)物模型中醫(yī)證候動(dòng)物模型本章主要內(nèi)容人類疾病動(dòng)物模型近日，中國(guó)科學(xué)院“動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”揭牌儀式在昆明動(dòng)物所舉行，重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任徐林研究員和學(xué)術(shù)委員會(huì)主任孫漢董院士共同為重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室揭牌。同濟(jì)大學(xué)裴鋼院士、昆明植物所周俊院士、上海神經(jīng)科學(xué)所丁玉強(qiáng)研究員等11位專家出席了揭牌儀式。云南省科技廳基礎(chǔ)研究處領(lǐng)導(dǎo)參加揭牌儀式表示祝賀，昆明動(dòng)物所黨委書記楊君興研究員代表研究所領(lǐng)導(dǎo)班子致辭。昆明動(dòng)物所“動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”于2005年12月20日成立，后被中國(guó)科學(xué)院列入三期創(chuàng)新工程重點(diǎn)建設(shè)的侯選項(xiàng)目，以添補(bǔ)我國(guó)在該領(lǐng)域的技術(shù)平臺(tái)空白。重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室以現(xiàn)代醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化和生物技術(shù)為主要目標(biāo)、以動(dòng)物毒素和非人靈長(zhǎng)類為基礎(chǔ)和支撐，力圖建立和完善幾種人類重大疾病的動(dòng)物模型，驗(yàn)證這些模型在新藥篩選和藥效學(xué)評(píng)價(jià)中的有效性，形成具有國(guó)際水平的新藥篩選和藥效學(xué)評(píng)價(jià)的疾病動(dòng)物模型技術(shù)平臺(tái)，致力于具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)新藥、新途徑、新技術(shù)研究與開發(fā)。該實(shí)驗(yàn)室于2008年12月19日被正式批準(zhǔn)為中國(guó)科學(xué)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”。揭牌儀式后，學(xué)術(shù)委員會(huì)就重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的整體情況、研究工作、學(xué)科建設(shè)和運(yùn)行管理以及今后工作的總體規(guī)劃，進(jìn)行了認(rèn)真的討論，為重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室今后的發(fā)展提出了很多寶貴的意見和建議。動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

一、人類疾病動(dòng)物模型的定義和意義

1．定義人類疾病動(dòng)物模型(animalmodelofhumandiseases)是指醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。應(yīng)用動(dòng)物模型是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)生命科學(xué)客觀規(guī)律的實(shí)驗(yàn)方法和手段。通過(guò)動(dòng)物模型的研究，進(jìn)而有意識(shí)地改變那些自然條件下不可能或不容易排除的因素，更能準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將研究結(jié)果推及于人類疾病，從而更有效地認(rèn)識(shí)人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律并研究防治措施。第一節(jié)人類疾病動(dòng)物模型概述

2．應(yīng)用動(dòng)物模型的意義

應(yīng)用動(dòng)物模型的意義主要表現(xiàn)在如下幾個(gè)方面：

(1)避免人體實(shí)驗(yàn)造成的危害動(dòng)物可以作為人類的替難者，可在人為設(shè)計(jì)的特定實(shí)驗(yàn)條件下反復(fù)實(shí)驗(yàn)研究。使用動(dòng)物模型除了能克服在人類研究中經(jīng)常遇到的倫理和社會(huì)道德限制外，還能采用某些不能應(yīng)用于人類研究的方法和途徑，甚至為了實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰€可以損傷動(dòng)物組織、器官以至處死。

(2)應(yīng)用動(dòng)物模型可研究平時(shí)不易見到的疾病平時(shí)臨床很難見到放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、戰(zhàn)傷等疾病，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求能復(fù)制該疾病的動(dòng)物模型，供研究使用。

(3)可提供發(fā)病率低，潛伏期和病程長(zhǎng)的疾病的動(dòng)物模型有些疾病如免疫性、代謝性、內(nèi)分泌和血液等疾病在臨床上發(fā)病率低，人們可選用動(dòng)物種群中發(fā)病率高的類似于人的疾病作為動(dòng)物模型，也可通過(guò)不同方法復(fù)制這些疾病的動(dòng)物模型從事研究工作。還有些疾病如腫瘤、慢性氣管炎、動(dòng)脈粥樣硬化、遺傳病、肺心病、類風(fēng)濕等疾病發(fā)生發(fā)展速度緩慢，潛伏期長(zhǎng)，病程也長(zhǎng)，短的幾年，長(zhǎng)的十幾年甚至幾十年，有的疾病要隔代或者幾代才能顯性發(fā)病。大多動(dòng)物由于生命周期比較短，在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行一代或幾代的觀察就顯得十分容易．應(yīng)用動(dòng)物模型來(lái)研究就克服了以上不足。

(4)克服復(fù)雜因素，增加方法學(xué)上的可比性臨床上許多疾病是十分復(fù)雜的：病人并非患有一種疾病，有的幾種疾病同時(shí)并存，即使某單一疾病，由于病人的年齡、性別、體質(zhì)、遺傳以及社會(huì)因素對(duì)其疾病發(fā)生發(fā)展都會(huì)有影響，產(chǎn)生不同的效果。而用動(dòng)物復(fù)制的疾病模型，就可以選擇相同品種、品系、性別、年齡、體重、健康狀態(tài)以及在相同的環(huán)境因素內(nèi)進(jìn)行觀察研究，這樣對(duì)該疾病及其發(fā)展過(guò)程的研究就可以排除其他影響因素，使得到的結(jié)果更加準(zhǔn)確，也可單一變換某一因素，使實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果更加深入，增加了因素的可比性。

二、人類疾病動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)原則成功的動(dòng)物模型常常依賴于最初周密的設(shè)計(jì)，動(dòng)物模型設(shè)計(jì)一般應(yīng)遵循下原則。

1．相似性

動(dòng)物模型應(yīng)盡可能近似人類疾病，最好能找到與人類疾病相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病。如大鼠自發(fā)性高血壓就是研究人類原發(fā)性高血壓的理想動(dòng)物模型；小型豬自發(fā)性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化就是研究人類冠心病的良好動(dòng)物模型：自發(fā)性狗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與人類幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分相似，同樣是理想的動(dòng)物模型。與人類疾病完全相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病不易多得，往往需要研究人員加以復(fù)制，為了盡量做到與人類疾病相似，首先要在動(dòng)物選擇上加以注意；其次是復(fù)制動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法上不斷探索改進(jìn)；另外在觀察指標(biāo)等方面都應(yīng)加以周密的設(shè)計(jì)。

2.重復(fù)性理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)的，甚至是可以標(biāo)準(zhǔn)化的。例如用一次定量放血法可百分之百造成出血性休克，百分之百死亡，這就符合可重復(fù)性和達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)化要求。又如用狗做心肌梗死模型照理很合適，因?yàn)樗墓跔顒?dòng)脈循環(huán)與人相似，而且在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中它最適宜做暴露心臟的剖胸手術(shù)，但狗結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的后果差異太大，不同狗同一動(dòng)脈同一部位的結(jié)扎，其后果很不一致，無(wú)法預(yù)測(cè)，無(wú)法標(biāo)準(zhǔn)化。相反，大小白鼠、地鼠和豚鼠結(jié)扎冠脈的后果就比較穩(wěn)定一致，可以預(yù)測(cè)，因而可以標(biāo)準(zhǔn)化。

3．可靠性復(fù)制的動(dòng)物模型應(yīng)力求可靠地反映人類疾病，即可特異地、可靠地反映該種疾病代謝、結(jié)構(gòu)變化，同時(shí)應(yīng)具備該種疾病的主要癥狀和體征，并經(jīng)過(guò)一系列檢測(cè)(如心電圖、臨床生理、生化指標(biāo)檢驗(yàn)、病理切片等)得以證實(shí)。如果易自發(fā)地出現(xiàn)某些相應(yīng)病變的動(dòng)物，就不應(yīng)選用；易產(chǎn)生與復(fù)制疾病相混淆的疾病或臨床癥狀者也不宜選用。例如鋁中毒，選用大鼠復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)，大鼠本身易患進(jìn)行性腎病，容易與鉛中毒所致的腎病相混淆，選用蒙古沙鼠就比選用大鼠可靠性好，因?yàn)槊晒派呈笾挥秀U中毒才會(huì)使其出現(xiàn)腎病變。

5．易行性和經(jīng)濟(jì)性復(fù)制動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)，應(yīng)盡量做到方法容易執(zhí)行和合乎經(jīng)濟(jì)原則。除了動(dòng)物選擇上要考慮易行性和經(jīng)濟(jì)性原則外，在選擇模型復(fù)制方法和指標(biāo)的檢測(cè)觀察上也要注意這一原則。

三、動(dòng)物模型的分類人類疾病動(dòng)物模型經(jīng)過(guò)近30年的開發(fā)研究，現(xiàn)已累積2000多個(gè)動(dòng)物模型在醫(yī)學(xué)發(fā)展中占有極其重要的地位。為了能更好地應(yīng)用、開發(fā)和研究動(dòng)物模型，人們將其進(jìn)行了分類，如按動(dòng)物模型產(chǎn)生原因進(jìn)行分類，按醫(yī)學(xué)系統(tǒng)范圍分類，按模型種類分類和按中醫(yī)證候動(dòng)物模型分類。現(xiàn)將各種分類方法分述如下：

（一）按產(chǎn)生原因分類

1．誘發(fā)性動(dòng)物模型(experimentalanimalmodel)又稱為實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型。是指研究者通過(guò)使用物理的、化學(xué)的、生物的和復(fù)合的致病因素作用于動(dòng)物，造成動(dòng)物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時(shí)的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的病變，即為人工誘發(fā)出特定的疾病動(dòng)物模型。

(2)化學(xué)因素誘發(fā)動(dòng)物模型

常見的化學(xué)因素如化學(xué)藥致癌、化學(xué)毒物中毒、強(qiáng)酸強(qiáng)堿燒傷、某種有機(jī)成分的增加或減少導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)性疾病等。應(yīng)用化學(xué)物質(zhì)復(fù)制動(dòng)物模型，如應(yīng)用羥基乙胺復(fù)制大鼠急性十二指腸潰瘍動(dòng)物模型、應(yīng)用D-氨基半乳糖復(fù)制大鼠肝硬化動(dòng)物模型、以乙基亞硝基脲復(fù)制大鼠神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤動(dòng)物模型、以缺碘飼料復(fù)制大鼠缺碘性甲狀腺腫動(dòng)物模型和應(yīng)用膽固醇、膽鹽、甲基巰氧嘧啶及動(dòng)物脂肪油復(fù)制雞、兔、大鼠的動(dòng)脈粥樣硬化癥動(dòng)物模型。不同品種、品系的動(dòng)物對(duì)化學(xué)藥物耐受量不同，在應(yīng)用時(shí)應(yīng)引起注意。有些化學(xué)藥物代謝易造成許多組織、器官損傷，有可能影響實(shí)驗(yàn)觀察，應(yīng)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中摸索好穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)條件。

(3)生物因素誘發(fā)動(dòng)物模型

常見的生物因素如細(xì)菌、病毒、寄生蟲、生物毒素等。在人類疾病中，由生物因素導(dǎo)致發(fā)生的人畜共患病(傳染性或非傳染性)占很大的比例。傳染病、寄生蟲病、微生物學(xué)和免疫學(xué)等研究經(jīng)常使用生物因素復(fù)制動(dòng)物模型。如以柯薩奇B族病毒復(fù)制小鼠、大鼠、豬等心肌炎動(dòng)物模型；以福氏Ⅳ型痢疾桿菌或志賀桿菌復(fù)制猴的細(xì)菌性痢疾動(dòng)物模型；以錐蟲病原體感染小鼠，復(fù)制錐蟲病小鼠動(dòng)物模型；以鉤端螺旋體感染豚鼠，復(fù)制由鉤端螺旋體引起的肺出血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

(4)復(fù)合因素誘發(fā)動(dòng)物模型以上3種誘發(fā)動(dòng)物模型的因素都是單一的，有些疾病模型應(yīng)用單一因素誘發(fā)難以達(dá)到實(shí)驗(yàn)的要求，必須使用多種復(fù)合因素誘導(dǎo)才能復(fù)制成功，這些動(dòng)物模型的復(fù)制往往需要時(shí)間較長(zhǎng)，方法比較繁瑣，但其與人類疾病比較相似。如復(fù)制大鼠或豚鼠慢性支氣管炎動(dòng)物模型可使用細(xì)菌加寒冷方法或香煙加寒冷，也可使用細(xì)菌加二氧化硫等方法來(lái)復(fù)制；以四氯化碳(40％棉籽油溶液)、膽固醇、乙醇等因素復(fù)制大鼠肝硬化動(dòng)物模型；以二甲基偶氮苯胺和60Co射線方法復(fù)制大鼠肝癌動(dòng)物模型。

其問(wèn)題是許多這類動(dòng)物模型來(lái)源比較困難，種類有限。動(dòng)物自發(fā)性腫瘤模型因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物品種、品系不同，其腫瘤所發(fā)生的類型和發(fā)病機(jī)制也有差異。由于誘發(fā)性動(dòng)物模型和自發(fā)性動(dòng)物模型有一定差異，加之有些人類疾病至今尚不能用人工的方法在動(dòng)物身上誘發(fā)出來(lái)，因此近十幾年來(lái)醫(yī)學(xué)界對(duì)自發(fā)性動(dòng)物模型的應(yīng)用和開發(fā)十分重視。許多學(xué)者通過(guò)對(duì)不同種動(dòng)物的疾病進(jìn)行大量普查，以發(fā)現(xiàn)自發(fā)性疾病的動(dòng)物，然后通過(guò)遺傳育種將自發(fā)性疾病保持下去，并培育成具有該病表現(xiàn)癥狀和特定遺傳性狀的基因突變動(dòng)物，供實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用。

3．抗疾病型動(dòng)物模型(negativeanimalmodel)

是指特定的疾病不會(huì)在某種動(dòng)物身上發(fā)生，從而可以用來(lái)探討為何這種動(dòng)物對(duì)該疾病有天然的抵抗力。如哺乳動(dòng)物均易感染血吸蟲病，而居于洞庭湖流域的東方田鼠卻不能復(fù)制血吸蟲病，因此將之用于血吸蟲病的發(fā)病機(jī)制和抗病機(jī)制的研究。

4.生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型(biomedicalanimalmodel)

指利用健康動(dòng)物生物學(xué)特征來(lái)提供人類疾病相似表現(xiàn)的疾病模型。如沙鼠缺乏完整的基底動(dòng)脈環(huán)，左右大腦供血相對(duì)獨(dú)立，是研究中風(fēng)的理想動(dòng)物模型；鹿的正常紅細(xì)胞是鐮刀形的，多年來(lái)被供作鐮刀形紅細(xì)胞貧血研究；兔胸腔的特殊結(jié)構(gòu)用于胸外手術(shù)研究比較方便；但這類動(dòng)物模型與人類疾病存在著一定的差異，研究人員應(yīng)加以分析比較。

2．各系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型(animalmodelofdifferentsystemdisease)

指與人類各系統(tǒng)疾病相應(yīng)的人類疾病動(dòng)物模型。各系統(tǒng)疾病模型分為消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型，呼吸、心血管、泌尿、神經(jīng)、血液與造血、內(nèi)分泌、骨骼等系統(tǒng)的動(dòng)物模型，還包括按科分類，如傳染病、婦科病、兒科病、皮膚科病、五官科病、外科病、寄生蟲病、地方病、維生素缺乏病、物理?yè)p傷疾病和職業(yè)病等動(dòng)物模型。

(三)按模型種類分類疾病模型的種類包括整體動(dòng)物、離體模型（器官和組織、細(xì)胞株和數(shù)學(xué)、物理模型）。整體動(dòng)物模型是常用的疾病模型，也是研究人類疾病常用的手段。

2．動(dòng)物因素對(duì)動(dòng)物模型復(fù)制的影響復(fù)制動(dòng)物模型的動(dòng)物種類繁多，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家養(yǎng)動(dòng)物和野生動(dòng)物。野生動(dòng)物屬自然生態(tài)類型，其微生物感染復(fù)雜，遺傳背景不清楚，來(lái)源困難，很難飼養(yǎng)，因此不便使用；家養(yǎng)動(dòng)物飼養(yǎng)方便，來(lái)源容易，但微生物控制不嚴(yán)，遺傳背景不清楚也不提倡使用；應(yīng)盡可能使用標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。此外，動(dòng)物種類、品系、年齡和體重、性別、生理狀態(tài)和健康因素等均對(duì)動(dòng)物模型質(zhì)量有不同程度的影響。

3．實(shí)驗(yàn)技術(shù)因素對(duì)動(dòng)物模型復(fù)制的影響

(1)實(shí)驗(yàn)季節(jié)動(dòng)物體對(duì)外界的反應(yīng)情況，同樣受春、夏、秋、冬不同季節(jié)的影響，不同實(shí)驗(yàn)季節(jié)，動(dòng)物的機(jī)體反應(yīng)性在某些方面有一定的改變，這種影響在進(jìn)行跨季節(jié)的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)引起重視。

(2)晝夜不同時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體溫、血糖、基礎(chǔ)代謝率、內(nèi)分泌激素的分泌等隨著晝夜的不同發(fā)生節(jié)律性的變化。在復(fù)制動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)中某種處理的時(shí)間順序?qū)Y(jié)果的影響。

(3)麻醉深度的影響在復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)往往需要將動(dòng)物麻醉后才能進(jìn)行各種手術(shù)，實(shí)施某些致模因素。不同麻醉藥物和不同麻醉劑量有不同的藥理作用和不良反應(yīng)，如麻醉過(guò)深動(dòng)物處于深度抑制狀態(tài)，甚至瀕死狀態(tài)，動(dòng)物各種反應(yīng)受到抑制，結(jié)果的可靠性受影響；麻醉過(guò)淺，在動(dòng)物身上進(jìn)行手術(shù)或?qū)嵤┠承┲履Ｒ蛩?，將造成?dòng)物強(qiáng)烈的疼痛刺激，引起動(dòng)物全身特別是呼吸、循環(huán)、消化等功能發(fā)生改變，同樣會(huì)影響造模的準(zhǔn)確性。

(4)手術(shù)技巧的影響在實(shí)驗(yàn)手術(shù)造模時(shí)，首先要選擇好最佳的手術(shù)路線，以免過(guò)大、過(guò)繁的手術(shù)給機(jī)體帶來(lái)影響。手術(shù)技術(shù)熟練與否也是影響因素，技術(shù)熟練可以減少對(duì)動(dòng)物的刺激、創(chuàng)傷和出血，將提高造模的成功率。

(5)實(shí)驗(yàn)給藥的影響在造模過(guò)程中給藥是常規(guī)工作，但對(duì)造模也是影響因素，如給藥的途徑、劑量、熟練程度等影響。

(6)對(duì)照組對(duì)造模的影響在復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)常常因忽視或錯(cuò)誤應(yīng)用對(duì)照的問(wèn)題，而造成動(dòng)物模型的失敗或誤導(dǎo)錯(cuò)誤結(jié)論，應(yīng)根據(jù)不同要求設(shè)置好對(duì)照組。

4．環(huán)境因素和營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)復(fù)制動(dòng)物模型的影響營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)復(fù)制動(dòng)物模型，特別是長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)，影響顯著，應(yīng)予以重視。如采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飼料則問(wèn)題就會(huì)解決。造模過(guò)程中應(yīng)注意給水量充分和給予符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的飲水。環(huán)境因素是影響造模及其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素，居住條件、飼料、營(yíng)養(yǎng)、光照、噪聲、氨濃度、溫度、濕度、氣流速度等任何一項(xiàng)都不容忽視。第二節(jié)免疫缺陷動(dòng)物

一、概述

免疫缺陷動(dòng)物是指由于先天性遺傳突變或用人工方法造成一種或多種免疫系統(tǒng)組成成分缺陷的動(dòng)物。1962年，蘇格蘭醫(yī)師Issacson等首先發(fā)現(xiàn)無(wú)胸腺裸小鼠。1969年，丹麥學(xué)者Rygaard首次成功地將人類惡性腫瘤移植于裸小鼠體內(nèi)，在裸小鼠體內(nèi)腫瘤存活并生長(zhǎng)，開創(chuàng)了免疫缺陷動(dòng)物研究和應(yīng)用的新局面。從此，免疫缺陷動(dòng)物逐漸廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究，成為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和遺傳學(xué)研究等的重要模型動(dòng)物，受到越來(lái)越密切的關(guān)注。

二、免疫缺陷動(dòng)物的分類目前，世界各國(guó)相繼培育出一系列免疫缺陷動(dòng)物，從嚙齒類擴(kuò)展到馬和牛等大型哺乳類動(dòng)物，從單一的T淋巴細(xì)胞免疫缺陷到幾種免疫細(xì)胞聯(lián)合缺陷，如T和NK細(xì)胞，T和B細(xì)胞以及T、B和NK細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷動(dòng)物；從自發(fā)突變的先天性免疫缺陷到后天獲得性免疫缺陷。

三、常用免疫缺陷動(dòng)物的生物學(xué)特征

(一)裸小鼠指先天性無(wú)胸腺、無(wú)毛的裸體小鼠，常簡(jiǎn)稱裸小鼠。導(dǎo)致這種異常狀態(tài)的裸基因(nu)是一個(gè)隱性突變基因，位于11號(hào)染色體上。目前裸基因已經(jīng)回交到不同的小鼠品系中，即將其導(dǎo)人不同的遺傳背景。帶有裸基因的小鼠品系包括NIH-nu、BALB/c-nu、C3H-nu和C57BL/6-nu等。各個(gè)品系裸小鼠因其遺傳背景不同，所表現(xiàn)的細(xì)胞免疫反應(yīng)和實(shí)驗(yàn)檢查指標(biāo)也不盡相同。

帶有純合裸基因的小鼠具有兩個(gè)主要的缺陷特征：①毛發(fā)生長(zhǎng)發(fā)育異常；表現(xiàn)為全身形似無(wú)毛。呈裸體外表；②無(wú)胸腺，僅有胸腺殘跡或僅有異常的胸腺上皮，這種上皮不能使T細(xì)胞正常分化，缺乏成熟T細(xì)胞的輔助、抑制及殺傷功能，因而細(xì)胞免疫力低下，不能執(zhí)行正常T細(xì)胞功能。此外，B細(xì)胞功能基本正常，成年裸小鼠（6～8周齡）較普通鼠有較高水平的NK細(xì)胞活性，但幼鼠（3～4周齡）的NK細(xì)胞活性低下。裸小鼠粒細(xì)胞數(shù)比普通小鼠低。裸小鼠問(wèn)世五十多年來(lái)，已廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、寄生蟲學(xué)、毒理學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究中。

(二)裸大鼠裸大鼠(nuderat)在1953年由英國(guó)Rowett首先發(fā)現(xiàn)，基因符號(hào)為rnu，純合子裸大鼠(rnu／rnu)具有與裸小鼠基本相似的特征，無(wú)胸腺，缺乏功能性T淋巴細(xì)胞，B細(xì)胞功能基本正常，NK細(xì)胞活力增強(qiáng)，抵抗力差，易患呼吸道疾病，繁殖方法與裸小鼠相同，但軀干部仍有稀少被毛而并非像裸小鼠那樣完全無(wú)毛，頭部及四肢更多。裸大鼠同樣能接受人類正常組織和腫瘤的異種移植，但因其體型大，用一只裸大鼠可為常規(guī)血液學(xué)和血清生物化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)提供足夠的血樣，也可為各種研究提供足夠的瘤組織，同時(shí)裸大鼠易于進(jìn)行外科手術(shù)，為各種部位腫瘤移植和腫瘤供血研究提供了方便。B淋巴細(xì)胞缺陷動(dòng)物模型

該模型代表動(dòng)物為XID小鼠，特點(diǎn)是B淋巴細(xì)胞功能減退，為X-鏈隱性突變系，基因符號(hào)為“Xid”。純合型雌鼠（Xid/Xid）和雜合型雄鼠（Xid/Y）對(duì)Ⅱ型抗原（非胸腺依賴性抗原）如葡聚糖、肺炎球菌脂多糖以及雙鏈DNA等沒有反應(yīng)。NK細(xì)胞缺陷動(dòng)物模型Beige（bg）小鼠為NK細(xì)胞活性缺陷的突變系小鼠，bg是隱性突變基因，位于13號(hào)染色體上。其內(nèi)源性NK細(xì)胞功能缺乏，是由于細(xì)胞溶解作用的識(shí)別過(guò)程受損傷所致。（1）SCID小鼠：SCID小鼠的所有T和B淋巴細(xì)胞功能測(cè)試均為陰性，對(duì)外源性抗原無(wú)細(xì)胞免疫及抗體反應(yīng)，體內(nèi)缺乏攜帶前B細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞表面標(biāo)志的細(xì)胞。但是，其非淋巴性造血細(xì)胞分化不受突變基因的影響，巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、紅細(xì)胞等呈正常狀態(tài)。自然殺傷（NK）細(xì)胞及淋巴因子激活（LAK）細(xì)胞也呈正常狀態(tài)。值得注意的是少數(shù)SCID小鼠可出現(xiàn)極小程度的免疫功能恢復(fù)，此即為SCID小鼠的滲漏現(xiàn)象。嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠（2）Motheaten小鼠：Motheaten小鼠突變基因（me）位于第6對(duì)染色體上，出生后2h內(nèi)即可出現(xiàn)皮膚膿腫，有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷，表現(xiàn)為對(duì)胸腺依賴和不依賴抗原均無(wú)反應(yīng)。對(duì)T、B細(xì)胞分裂素的增殖反應(yīng)嚴(yán)重受損，細(xì)胞毒和NK細(xì)胞活性減低。

將分布于3種小鼠的3個(gè)隱性突變基因即NK細(xì)胞缺陷的beige基因、T細(xì)胞缺陷的nu基因以及B細(xì)胞缺陷的xid基因經(jīng)過(guò)雜交、篩選并導(dǎo)入，育成了T、B、NK細(xì)胞三聯(lián)免疫缺陷的beige-nude-xid小鼠（BNX小鼠）。T、B、NK細(xì)胞功能三聯(lián)免疫缺陷小鼠(dominanthemimeliamice)其基因符號(hào)為Dh，是顯性突變基因，位于1號(hào)染色體上，現(xiàn)有品系為B6C6-Dh。純合子（Dh/+）缺乏脾臟，其泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化道和骨骼有一定程度的畸形?；伟l(fā)生于早期胚胎的臟壁中胚層。由于缺脾，在一定程度上損傷了體液免疫反應(yīng)。這種小鼠無(wú)需特殊飼養(yǎng)條件。如果將nu基因和Dh基因結(jié)合在一起，即可培育出無(wú)胸腺和無(wú)脾臟的La-sat小鼠。顯性半肢畸形小鼠第三節(jié)腫瘤動(dòng)物模型

腫瘤動(dòng)物模型(animalmodelsoftumor)在腫瘤病因?qū)W、發(fā)病機(jī)制及防治等方面的研究上具有重要意義。本節(jié)介紹誘發(fā)性動(dòng)物腫瘤模型和動(dòng)物自發(fā)性腫瘤及可移植瘤株。

一、誘發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型

(animalmodelofinducedtumor)指使用致癌因素(carcinogens)在實(shí)驗(yàn)條件下誘發(fā)動(dòng)物發(fā)生腫瘤的動(dòng)物模型，它是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)研究的常用方法。常用于驗(yàn)證可疑致癌因素的作用，也越來(lái)越多地應(yīng)用于腫瘤發(fā)生機(jī)理的研究及防治效果的觀察上，在腫瘤病因?qū)W、遺傳學(xué)、生物學(xué)等方面的研究中有重要地位。由于誘發(fā)因素和條件可人為控制，誘發(fā)率遠(yuǎn)高于自然發(fā)病率，故在腫瘤實(shí)驗(yàn)研究中優(yōu)于自發(fā)瘤。用于誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性腫瘤的動(dòng)物種類很多，它們因種族不同而對(duì)相同致癌因素有不同的反應(yīng)性。常用的動(dòng)物以哺乳動(dòng)物為主，其中嚙齒類動(dòng)物的使用最多，應(yīng)用最廣，包括各種大鼠、小鼠、豚鼠等。

誘發(fā)性腫瘤模型的原理是利用外源性致癌因素引起細(xì)胞遺傳特性異常而呈現(xiàn)出異常生長(zhǎng)和高增殖活性，形成腫瘤。致癌因素主要有化學(xué)性、物理性及生物性致癌物，而化學(xué)性致癌物(chemicalcarcinogens)最常見，已確知的多達(dá)一千余種，用于誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性腫瘤的種類亦很多，如苯并芘、甲基膽蒽、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉毒素類。各種致癌物的致癌強(qiáng)度、致癌譜等特性相差較大，同一種致癌物經(jīng)不同途徑給藥所致腫瘤部位或類型可有很大差異。有些化學(xué)性致癌物具有明顯的親器官或組織特性。因此，實(shí)驗(yàn)工作中應(yīng)根據(jù)需要選用適當(dāng)致癌物和致癌途徑，并確定其他影響因素或?qū)嶒?yàn)條件。

(一)誘發(fā)方法誘發(fā)性動(dòng)物腫瘤的誘發(fā)方式包括原位誘發(fā)和異位誘發(fā)。原位誘發(fā)是指將致癌物直接與動(dòng)物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過(guò)涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等；異位誘發(fā)是將與致癌物接觸后的動(dòng)物組織或器官埋置于該動(dòng)物或另一正常動(dòng)物皮下而產(chǎn)生的該組織或器官的腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。

放射性物質(zhì)致瘤方法主要是用放射線照射或局部注射同位素。

能誘發(fā)動(dòng)物腫瘤的病毒亦很多，例如用小鼠白血病病毒(murineleukovirus，MLV)、雞白血病病毒(fowlleukosisvirus，F(xiàn)LV)和貓白血病病毒(felineleukosisvirus，F(xiàn)eLV)分別誘發(fā)小鼠、雞和貓白血病；Rous雞肉瘤病毒可誘發(fā)田鼠、雞、鴨、鵪鶉、猴和蛇等動(dòng)物發(fā)生肉瘤；貓肉瘤病毒(felinesarcomavirus，F(xiàn)SV)可使大鼠、貓、犬和猴發(fā)生肉瘤；人腺病毒能誘發(fā)小鼠、田鼠發(fā)生肉瘤和淋巴瘤。

在進(jìn)行誘發(fā)動(dòng)物腫瘤的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)盡量簡(jiǎn)便可行，有較好的重復(fù)性，并利于與人腫瘤比較研究；選擇對(duì)所用致癌物敏感的方法和種系動(dòng)物。致癌物的劑量應(yīng)能保證動(dòng)物存活率較高、誘發(fā)期較短而又可誘發(fā)較高頻率的腫瘤。常用的給藥基本方法和途徑有口服、注入、埋藏和涂抹等方式。

1．涂抹法將致癌物涂抹于動(dòng)物背側(cè)及耳部皮膚，主要用于誘發(fā)皮膚腫瘤(如乳頭狀瘤、鱗癌等)。常用的致癌物有煤焦油、3，4-苯并芘及20-甲基膽蒽等。

2．經(jīng)口給藥法本法是將化學(xué)致癌物溶于飲水或以某種方式混合于動(dòng)物食物中自然喂養(yǎng)或灌喂動(dòng)物而使之發(fā)生腫瘤。食管癌、胃癌、大腸癌等腫瘤常用此方法。

3．注射法注射法是將化學(xué)致癌物制成溶液或懸浮物，經(jīng)皮下、肌肉、靜脈或體腔等途徑注入體內(nèi)而誘發(fā)腫瘤。本法亦常用，其中皮下和靜脈注射又最常用。

4．氣管灌注法常用于誘發(fā)肺癌。將顆粒性致癌物制成懸浮液直接注入或用導(dǎo)液管注入動(dòng)物氣管內(nèi)。多使用金倉(cāng)鼠和大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

5．穿線法適用于將多環(huán)芳烴類致癌物直接置于某特定部位或器官，如宮頸、食管和腺胃等。方法是將一定量的致癌物放置于無(wú)菌試管內(nèi)，加熱使致癌物升華，吸附于預(yù)制的線結(jié)上；將含有致癌物的線結(jié)穿人靶器官或靶組織而誘發(fā)腫瘤。

6．埋藏法將致癌物包埋于皮下或其他組織內(nèi)，或?qū)⒔?jīng)致癌物作用過(guò)的器官、組織移植于同種或同種系動(dòng)物皮下進(jìn)行腫瘤的誘發(fā)實(shí)驗(yàn)。

(二)常見腫瘤的動(dòng)物模型

1．肺癌(carcinomaofthelung)

誘發(fā)模型較多，方法也很成熟。常用方法有：

(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)小鼠肺癌模型：采用小白鼠每周皮下注射l%DEN水溶液一次(劑量為56mg/kg體重，總劑量為868mg)。觀察時(shí)間100天左右。此模型誘發(fā)率約40％。若將DEN總劑量增到1176mg時(shí)，半年誘發(fā)率可達(dá)90％以上。

(2)烏拉坦誘發(fā)肺多發(fā)性腫瘤模型采用A系小鼠(1～1.5月齡)，每次每只腹腔注射10％烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3ml，間隔3～5天，共注射2～3個(gè)月，每只動(dòng)物用量共約100mg。觀察3個(gè)月，誘發(fā)率可達(dá)100％。

(3)氣管內(nèi)灌注致癌物誘發(fā)肺癌模型向氣管內(nèi)注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠或甲基膽蒽等物質(zhì)。常用的有：①猴氣管內(nèi)灌注3,4-苯并芘與氧化鐵的混合液，每周1次，共10次，可誘發(fā)肺鱗狀細(xì)胞癌。②大鼠吸入硫酸銨氣溶劑可誘發(fā)肺腺癌。

2．鼻咽癌(nasopharyngeal

carcinoma)

(1)二甲基膽蒽(DMC)誘發(fā)大鼠鼻咽癌模型將結(jié)晶DMC置于錐形塑料管中(可用直徑2～3mm硬質(zhì)塑料管在酒精燈上拉制)，使塑料管尖端進(jìn)入并長(zhǎng)期留置鼻咽腔。MC循小孔緩慢溢出，至半年以上，取材。誘發(fā)率可達(dá)60％以上。

(2)二乙基亞硝胺(DEN)滴鼻法誘發(fā)大鼠鼻咽癌用磨平針尖的8號(hào)針頭從前鼻插入大白鼠(體重120g左右)鼻咽腔，經(jīng)注射器灌注1％吐溫80新配的33.3％DEN混懸液0.02m1，每周1次，共15～20次。

3．食管癌(carcinomaoftheesophagus)

(1)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)大鼠食管癌模型將MBNA溶于飲水中，并摻人飼料，喂養(yǎng)Wistar大鼠(體重100g以上)，使之每日攝入量達(dá)0.75～1.5mg/kg體重，經(jīng)3個(gè)月左右可誘發(fā)食管癌。亦可用0.2％或0.005％MBNA水溶液給大鼠經(jīng)口灌喂，每天1次(1mg/kg體重)，經(jīng)11個(gè)月可使誘發(fā)率達(dá)53％。

(2)二烴黃樟素(Dihydrosaforle)誘發(fā)大鼠食管癌模型將二烴黃樟素加入大鼠飼料(濃度2500～10000mg/kg)喂養(yǎng)大鼠，誘發(fā)率達(dá)20％～75％。

4．胃癌(carcinomaofthestomach)

(1)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)小鼠胃癌模型用細(xì)線打結(jié)后，使MC加溫液化并滲人線結(jié)中；小鼠(體重20g左右)腺胃粘膜面穿掛含MC的線結(jié)。埋線后4～8個(gè)周可成功地誘發(fā)胃癌。MC的濃度為0.5～0.1g20-甲基膽蒽浸入10～20根線。

(2)不對(duì)稱亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌模型用0.25mg/kg體重的不對(duì)稱亞硝胺，經(jīng)7～8個(gè)月可誘發(fā)昆明種小鼠前胃癌。

(3)甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)大鼠胃癌模型在SD大鼠飲水中按2mg/kg體重加入甲基亞硝基醋酸尿素，每周5次飲用，經(jīng)520天可使100％大鼠發(fā)生腺胃癌。

(4)金黃倉(cāng)鼠胃癌模型雄性金黃倉(cāng)鼠口服甲基硝基亞硝基胍(MNNG)（83ug/m1）4個(gè)月，約1年后30％～40％的倉(cāng)鼠發(fā)生胃腺癌并出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移。亦可用濃度為91ug/ml的乙基硝基亞硝基胍(ENNG)口服喂養(yǎng)雄性金黃倉(cāng)鼠12個(gè)月，可誘發(fā)胃腺癌和十二指腸腺癌。此外，用MNNG（125ug/ml水溶液）經(jīng)口給藥，亦可使A/Jms、RP/Jms等系小鼠誘發(fā)胃癌。

(5)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)小鼠前胃癌模型選用A系、昆明種或615系小鼠，以每天0.25或1mg/kg體重的劑量用40.07％MBNA水溶液灌胃，每天1次。第7～8個(gè)月可誘發(fā)出85％～100％的前胃鱗狀細(xì)胞癌。

(6)肌氨酸乙酯和亞硝酸鈉誘發(fā)雞胃癌模型采用6月齡林縣家雞，喂以肌氨酸乙酯及亞硝酸鈉，誘發(fā)家雞腺胃腺癌。

5.大腸癌(carcinomaofthelargeintestine)

(1)二甲基芐肼（DMH）誘發(fā)大腸癌模型將DMH先配成濃度為100ml中含400mg的溶液，加入EDTA27mg，用0.1mol/LNaOH將pH值調(diào)整至6.5。用上述DMH經(jīng)皮下注射給4周齡雄性Wistar大鼠，每次劑量21mg/kg體重，每周1次，連續(xù)21周；最后一次給藥后l～4周處死動(dòng)物。

(2)甲基硝基亞硝基胍(MNNG)誘發(fā)大鼠大腸癌模型用MNNG在Wistar大鼠采用直腸灌人法誘發(fā)大腸癌。

6．肝癌(carcinomaoftheliver)(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)大白鼠肝癌模型

0.25％DEN水溶液灌胃(按10mg/kg體重)，每周剩余6d用0.025％DEN水溶液讓其自由飲用。共約4個(gè)月即可誘發(fā)出肝癌，5～6個(gè)月誘癌率達(dá)80％以上。亦可用0.005％DEN的飲水喂養(yǎng)8個(gè)月誘發(fā)。

(2)4-二甲基氨基偶氮苯(DAB)誘發(fā)大鼠肝癌模型使用含有0.06％DAB的飼料喂養(yǎng)大鼠，同時(shí)控制飼料中維生素B2含量(不超過(guò)1.5～2mg/kg體重)。經(jīng)4～6個(gè)月可誘發(fā)成功。

(3)2-乙酰氨基芴(2AAF)誘發(fā)動(dòng)物肝癌給成年大鼠含0.03％2AAF標(biāo)準(zhǔn)飼料，每日每只2～3mg2AAF，經(jīng)3～4個(gè)月即可誘發(fā)成功。此方法也可用于誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔等動(dòng)物肝癌。

(4)亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發(fā)小鼠肝癌用1％OAAT苯溶液涂于動(dòng)物兩肩胛間皮膚上，隔日1次，每次2～3滴，一般涂100次。7個(gè)月以上誘發(fā)肝腫瘤率55％。亦可用2.5mgOAAT溶于葵花籽油中，皮下注射C3H小鼠，每10天一次。

(5)黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌在大鼠飼料中加入黃曲霉素，含0.011～0.015mg/kg，喂養(yǎng)6個(gè)月，誘發(fā)率達(dá)80％。

(6)二甲氨誘發(fā)肝癌模型將二甲氨用食用菜油配制成3％的溶液，按98g精白碎米加2ml3%二甲氨溶液的比例配制飼料(相當(dāng)于每克碎米含0.06mg二甲氨)，喂養(yǎng)雄性大白鼠(體重150～200g)4～6周，停藥1周(以精白碎米代替)，后改用基礎(chǔ)飼料加0.12％二甲氨繼續(xù)喂養(yǎng)12～13周，即可誘發(fā)出肝癌。

(7)黃曲霉素B2誘發(fā)麻鴨肝癌模型采用半月齡雛鴨，自由食取肝癌高發(fā)區(qū)啟東霉玉米配合飼料(內(nèi)含黃曲霉素B1)，同時(shí)飲高發(fā)區(qū)淺井水，直至動(dòng)物自然死亡，可見麻鴨發(fā)生肝細(xì)胞癌。

7．腦腫瘤(braintumor)(1)乙基亞硝基脲(ENU)誘發(fā)大鼠膠質(zhì)瘤用0.5％～1％ENU按60mg/kg體重給藥于Wistar大鼠。給藥途徑有兩種，即經(jīng)孕鼠胎盤給藥致其子代鼠成瘤和經(jīng)新生幼鼠皮下給藥致瘤。前者是選用正常妊娠的健康Wistar大鼠(體重340g左右)，在妊娠晚期(距預(yù)產(chǎn)期前7天)經(jīng)尾靜脈一次性緩慢注射1％ENU溶液；后者是選用3日齡健康Wistar大鼠(體重約4g)，于肩胛部或腰骶部一次性皮下注射0.5％ENU溶液。觀察12個(gè)月，誘發(fā)出腦、脊髓膠質(zhì)瘤。用此方法誘發(fā)的膠質(zhì)瘤在組織學(xué)上以混合性少突星形細(xì)胞瘤為主，偶伴發(fā)腎纖維肉瘤和肺癌。

(2)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)腦腫瘤藏旭等用20％MC的膽固醇小塊埋入A系、C3HA系或昆明種小鼠大腦頂部皮層內(nèi)，誘發(fā)出大腦膠質(zhì)瘤和纖維肉瘤。

8.宮頸癌(cervicalcarcinoma)

用穿線法將附有0.1mgMC的棉紗線結(jié)穿入雌性小白鼠的宮頸部，并固定縫線。觀察半年左右處死動(dòng)物，取宮頸組織。

二、動(dòng)物自發(fā)性腫瘤及移植瘤株人類腫瘤在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中幾乎都能找到相似的腫瘤性疾病。利用高發(fā)病率品系動(dòng)物研究自發(fā)性腫瘤性疾病，更能接近人群發(fā)病情況，對(duì)研究人體腫瘤的防治有重要意義。

動(dòng)物自發(fā)性腫瘤(spontaneoustumorsinanimals)是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)的人工處置，在自然情況下所發(fā)生的腫瘤。動(dòng)物自發(fā)瘤發(fā)生于近交系動(dòng)物，隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系的不同，腫瘤發(fā)生類型和發(fā)病率有很大差異。其中，小鼠的各種自發(fā)性腫瘤在腫瘤發(fā)生、發(fā)展的研究中具有重要意義。自發(fā)性腫瘤模型與誘發(fā)性腫瘤模型具有一定差異(如對(duì)藥物的敏感性是不同的)，但大部分自發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型是通過(guò)人為定向培養(yǎng)而成的，畢竟不同于人類自然發(fā)病情況，因此自發(fā)瘤模型和誘發(fā)瘤模型之間優(yōu)缺點(diǎn)是相對(duì)的。目前研究自發(fā)瘤的動(dòng)物主要為哺乳類和鳥類。

(一)動(dòng)物移植瘤瘤株腫瘤移植實(shí)驗(yàn)在腫瘤研究中具有重要作用。動(dòng)物自發(fā)瘤可移植性腫瘤就是將動(dòng)物自發(fā)性腫瘤移植到同系、同種或異種動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)并經(jīng)傳代后組織學(xué)類型穩(wěn)定，生長(zhǎng)特性(包括接種成活率、生長(zhǎng)速度、自動(dòng)消退率、宿主壽命與宿主反應(yīng)等)已趨穩(wěn)定；其侵襲和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，以及對(duì)化療藥物的敏感程度均已確定；能在同種或異種動(dòng)物體內(nèi)繼續(xù)傳代，形成可移植性腫瘤即瘤株。

移植瘤株的穩(wěn)定性至關(guān)重要。為了達(dá)到可靠的穩(wěn)定性，通常需連續(xù)傳代15～20代。但即使已建立的瘤株再傳代后，其生物學(xué)特性亦可發(fā)生一定程度的改變，如形態(tài)學(xué)上的改變、惡性程度以及轉(zhuǎn)移特性的變化等。移植瘤的建立方法一般是選擇自發(fā)瘤或誘發(fā)瘤組織塊，無(wú)菌條件下放人組織培養(yǎng)皿內(nèi)，按1︰（3～5）的比例加入滅菌生理鹽水，制成瘤細(xì)胞懸液。取濃度約為106～107/ml的細(xì)胞懸液0.2ml接種于同系雌性小鼠皮下。如此傳代，使其移植成功率、生物學(xué)特性等趨于穩(wěn)定。亦可采用組織塊接種法。腹水瘤的移植方法為直接將抽取的含瘤細(xì)胞的腹水(0.1～0.2ml）接種于動(dòng)物腹腔。

(二)常用動(dòng)物自發(fā)瘤移植瘤株

1．小鼠可移植性乳腺癌黃華漳等于1973年采用TA2系小鼠自發(fā)乳腺癌，接種同系雌性小鼠皮下，建立移植瘤成功。孫文義等亦建立了TA2系小鼠自發(fā)B型乳腺癌瘤株MA-737，該移植瘤具有肺轉(zhuǎn)移和侵襲腹腔特性。此后又相繼在615系小鼠自發(fā)B型乳腺癌建立瘤株(如鄭升等建立的Ca615，張鴻翔等建立的MC-615，劉金友等建立的Ca759和Ca763，劉世葉等建立的Ma782/5S，張眾等建立的B0和B9。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院建立的MAC887和MAC-891，還建立了為數(shù)不多的小鼠自發(fā)型乳腺癌可移植性瘤株(如錢振超等建立的Ca761及中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院建立的MAC-8712等)。

魏泓等于1989年用BALB/c雌性小鼠自發(fā)乳腺梭形細(xì)胞癌，建立了可移植性乳腺梭形細(xì)胞癌株SCC-891，生物學(xué)特性穩(wěn)定，不出現(xiàn)腫瘤自然消退現(xiàn)象；對(duì)抗癌藥的敏感性廣泛。這一特殊類型的乳腺腫瘤瘤株的建立為實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤藥及抗癌藥篩選提供了有用的研究工具，同時(shí)由于使用了應(yīng)用最廣泛的近交系BALB/c小鼠而方便了該瘤株的研究和使用。除上述品系的小鼠外，沈德鈞等于1990年用12月齡NIH雌性種小鼠自發(fā)B型乳腺癌在同系小鼠皮下移植，傳代建立了ZMB-902瘤株。

2．小鼠可移植性肺腺癌吳德全等于1976年用18月齡雄性615系小鼠自發(fā)肺乳頭狀腺癌組織采取埋塊法在同系成年小鼠皮下移植及傳代，建立P615瘤株。該瘤株可在CFWX615系小鼠皮下移植，成功率達(dá)100％，腹腔內(nèi)移植成功率達(dá)100％。錢振超等于1978年也建立了615近交系小鼠肺腺癌瘤株HP615，馬克韶等采用615系雄性小鼠與昆明種雌性小鼠培養(yǎng)出的T739近交系小鼠自發(fā)乳頭型肺腺癌建立移植瘤株LA-795，具有高侵襲性轉(zhuǎn)移率。

3．小鼠可移植性肝癌小鼠肝癌瘤株的建立可通過(guò)動(dòng)物自發(fā)瘤或化學(xué)誘發(fā)瘤。錢振超等用10月齡第5l代經(jīng)產(chǎn)雌615系小鼠自發(fā)性肝細(xì)胞癌，在同系小鼠建立了H615瘤株；強(qiáng)家模等用二乙基亞硝胺(DENA)喂Wistar大鼠誘發(fā)肝細(xì)胞癌，移植到經(jīng)免疫抑制Wistar幼大鼠腹腔內(nèi)并傳代。亦可皮下或肝內(nèi)移植，建株各代宿主血清甲胎蛋白(a-fetoprotein，AFP)均陽(yáng)性。

4．小鼠可移植性宮頸癌小鼠宮頸癌瘤株多用誘發(fā)瘤移植建立。楊滋等于1958年采用含20-甲基膽蒽的線結(jié)穿入KM幼鼠宮頸誘發(fā)出鱗狀細(xì)胞癌后，接種KM雌小鼠皮下移植及傳代，建立小鼠宮頸未分化癌瘤株U14，移植成功率達(dá)96.7％。薛克勛等于1986年用U14瘤株復(fù)蘇后移植于615雌小鼠皮下并傳代，仍保持原生物學(xué)特性，移植率達(dá)100％。

5．小鼠可移植性食管癌國(guó)內(nèi)建立的小鼠可移植性食管癌瘤株較少，主要是丁瑞等建立的SGA-73食管鱗癌瘤株。該瘤株是由甲基膽蒽異位誘發(fā)津白1系小鼠食管鱗癌在同系小鼠皮下移植，傳代而建立，已傳40代以上。

6．小鼠可移植性胃腫瘤

20世紀(jì)70年代國(guó)內(nèi)先后建立了幾個(gè)胃腫瘤瘤株。林柄水等用甲基亞硝基脲灌胃法誘發(fā)津白1系小鼠前胃鱗狀細(xì)胞癌，在同系小鼠皮下移植、傳代，建立GS-741瘤株。李寶貴等利用甲基芐基亞硝胺灌喂615系小鼠胃鱗癌，同系小鼠皮下移植后傳代，建立FC瘤株。之后，林炳水等又用甲基膽蒽原位掛線法在津白2系小鼠誘發(fā)胃纖維肉瘤并建株S-784。該瘤株傳百多代，生物學(xué)特性穩(wěn)定。FC瘤株還具有侵襲肌組織能力和很高的肺轉(zhuǎn)移率（86％～90％)。

7．小鼠可移植性腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤早在1957年，中央衛(wèi)生研究院(現(xiàn)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院)病理室就采用20-甲基膽蒽溶于膽固醇中，埋置于KM小鼠大腦皮層誘法的未分化神經(jīng)膠質(zhì)瘤(即膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)在同系小鼠皮下移植及傳代建立B22瘤株。移植成功率達(dá)100％，已傳數(shù)百代，平均生存時(shí)間為2～4周。陳炳恒等于1964年用上述相似方法也建立KM小鼠可移植性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤株G422，可在同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植(成功率均為100％)，已傳350余代，無(wú)自發(fā)消退。尚未見采用動(dòng)物自發(fā)腦瘤建株的報(bào)道。

8.動(dòng)物可移植性肉瘤劉家勇等于1978年TA1系小鼠自發(fā)性纖維肉瘤同系雄小鼠皮下移植并傳代，建立小鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率100％，已傳86代。李殿俊等用3，4-苯并芘誘發(fā)的WKA大鼠皮下纖維肉瘤移植于經(jīng)免疫抑制的同系大鼠皮下，建立WBT-2大鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率達(dá)100％（包括肌肉、腹腔移植），無(wú)自然消退現(xiàn)象。以此瘤株經(jīng)WKA大鼠靜脈接種，多次連續(xù)移植，又建立了可移植性肺轉(zhuǎn)移肉瘤瘤株WBT-2M，其肺轉(zhuǎn)移率可達(dá)100％。此后于1981年國(guó)內(nèi)又建立615系小鼠纖維肉瘤瘤株FSC。它是由甲基膽蒽碘油皮下注射誘發(fā)的纖維肉瘤經(jīng)移植傳代而建立的。

滑膜肉瘤是動(dòng)物的一種少見腫瘤，錢振超等利用615系小鼠自發(fā)性滑膜肉瘤在同系小鼠皮下移植和傳代，建立ZM755瘤株，并已傳200多代。除大鼠和小鼠外的其他動(dòng)物可移植性肉瘤報(bào)道很少。章魁華等于1982年應(yīng)用二甲基苯并蒽丙酮液在敘利亞金黃地鼠采取涂抹頰囊粘膜的方法誘發(fā)頰肉瘤（組織起源不明），并在同種封閉群小鼠頰粘膜下、皮下或腹腔內(nèi)移植或傳代，成功率均為100％。移植后具有侵襲周圍組織能力和肺及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性(轉(zhuǎn)移率分別為9％和12％)。

9．小鼠可移植性淋巴造血系腫瘤國(guó)內(nèi)已建立的動(dòng)物淋巴造血系腫瘤(主要包括惡性淋巴瘤和白血病)可移植瘤株幾乎均建立于小鼠，其中惡性淋巴瘤瘤株有楊簡(jiǎn)等建立的L1及其腹水瘤、錢振超等建立的L797及其腹水瘤、孫慧等建立的L-TA2等，白血病瘤株有陳妙蘭等建立的LⅢ、李敏民建立的L615等。值得一提的是，由于人的惡性淋巴瘤的分類方法進(jìn)展較快，動(dòng)物淋巴瘤的一些名稱顯得陳舊、混亂，亟待統(tǒng)一。第四節(jié)系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

一、消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)肝、膽、胰腺疾病動(dòng)物模型1．肝纖維化動(dòng)物模型(animalmodelofliverfibrosis)

任何可引起肝損傷的因素長(zhǎng)期、反復(fù)作用于肝臟，均可產(chǎn)生肝細(xì)胞變性、壞死，繼而肝細(xì)胞再生和纖維組織增生，導(dǎo)致肝纖維化，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展為肝硬化、肝癌等?；诖嗽斫⒘嗽S多肝纖維化模型、化學(xué)性損傷模型、免疫性模型、生物學(xué)模型、乙醇性模型和營(yíng)養(yǎng)性模型。

(1)免疫性肝纖維化模型免疫性肝纖維化的產(chǎn)生機(jī)制是由Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)引起的，白蛋白和血清的大分子物質(zhì)，作為異種抗原進(jìn)入大鼠體內(nèi)后，刺激其產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，當(dāng)抗原再次進(jìn)入機(jī)體后抗原抗體結(jié)合，形成抗原-抗體免疫復(fù)合物(IC)，IC可激活(或結(jié)合)補(bǔ)體，由于抗原的反復(fù)、長(zhǎng)期刺激，過(guò)量的免疫復(fù)合物來(lái)不及被清除，沉積于肝臟的血管壁內(nèi)外，引起血管炎和血管周圍炎，造成肝損傷，形成廣泛的進(jìn)行性慢性炎癥病變。如此反復(fù)導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死，肝細(xì)胞再生，纖維增生等變化，最后發(fā)展為肝纖維化、肝硬化。

動(dòng)物選用雄性Wistar大鼠，體重130g左右。取豬血清0.5ml，腹腔內(nèi)注射。每周2次，共8次(豬血清的制備：取新鮮豬血，離心制血清，濾過(guò)除菌，分裝放低溫冰箱備用)。大鼠于第3周出現(xiàn)較多的肝細(xì)胞變性、壞死，第4周增生的膠原纖維形成纖維束，呈侵襲性生長(zhǎng)，從中央靜脈到門管區(qū)之間相互伸延，發(fā)生肝纖維化。該模型的特點(diǎn)：①肝纖維化出現(xiàn)得早，出現(xiàn)率高達(dá)86.7％；②對(duì)動(dòng)物整體損傷輕微，動(dòng)物毛發(fā)光澤、生長(zhǎng)、發(fā)育情況與正常無(wú)區(qū)別；③肝纖維化組織中大量膠原增生，故Ⅲ、Ⅳ型前膠原的mRNA增多。

臨床上，慢性活動(dòng)性肝炎患者循環(huán)免疫復(fù)合物多為陽(yáng)性，故豬血清模型可用于慢性肝炎所致肝纖維化的研究，對(duì)于研究免疫復(fù)合物的形成、沉積和清除及對(duì)于防治免疫損傷性肝纖維化有效藥物的篩選，具有理論和實(shí)際意義。

(2)化學(xué)損傷性肝纖維化動(dòng)物模型雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射，第一次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細(xì)胞變性壞死和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，變性、壞死的細(xì)胞數(shù)和嚴(yán)重程度明顯超過(guò)豬血清模型，炎細(xì)胞浸潤(rùn)也超過(guò)豬血模型。6周后出現(xiàn)增生的纖維束，纖維增生明顯晚于和少于豬血清肝纖維化模型?；瘜W(xué)損傷性肝纖維化模型中肝細(xì)胞變性壞死，比免疫性肝纖維化模型嚴(yán)重且炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，在其大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1排明顯增多。

(3)四氯化碳肝硬化動(dòng)物模型

Wistar或SD大鼠，體重180～200g，皮下注射40％～50％四氯化碳油溶液(0.3ml/100g體重)，每周2次，第2周始，隔日以20％～30％乙醇1ml灌胃(或作為唯一飲料)，飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)，共10周。實(shí)驗(yàn)中大鼠成活率60％～80％。四氯化碳所致高膽固醇飲食大鼠肝硬化是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型，該模型可靠且復(fù)制時(shí)間短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)研究。

2．膽石癥動(dòng)物模型(animalmodelofcholelithiasis)

我國(guó)人群中膽結(jié)石疾病，特別是原發(fā)性膽管結(jié)石發(fā)病率高，手術(shù)后復(fù)發(fā)又非常普遍，最后常因反復(fù)感染發(fā)生膽汁性肝硬化而死亡。因此是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中極為重要的課題之一。近年來(lái)對(duì)膽結(jié)石病的研究和診斷水平有了很大的提高和發(fā)展，但臨床上開展膽石癥的治療研究仍然存在著一定的局限性，因此臨床研究不易獲取符合研究需要的，系統(tǒng)性和可比性的病理標(biāo)本。而膽結(jié)石動(dòng)物模型的建立為臨床研究膽石癥開辟了一條新的研究途徑。自從1952年Dam及Christensen以倉(cāng)鼠成功地復(fù)制成膽固醇結(jié)石的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型以來(lái)，各國(guó)學(xué)者廣泛地開展了這方面的研究。

動(dòng)物可用敘利亞倉(cāng)鼠、健康成年家兔、大鼠、家犬或猴等，具體方法有：

(1)食餌法：①選用敘利亞倉(cāng)鼠，50～60g左右，基本食餌的特點(diǎn)為高糖，不含不飽和脂肪酸。食餌配制方法：蔗糖74％，酪蛋白2l％，食鹽4.4％，膽堿0.1％，濃縮魚肝油0.5％。按每只倉(cāng)鼠每日5～9g，分兩次喂養(yǎng)，同時(shí)每周喂青菜、麥芽1～2次，以補(bǔ)充維生素等，維持動(dòng)物生命。14～21d倉(cāng)鼠膽囊內(nèi)形成明顯結(jié)石，22d后成石率高達(dá)100％。②選用雌性豚鼠，體重250～300g。成石飼料的配制：在基礎(chǔ)食物中加入酪蛋白1％，蔗糖1.5％，豬油1％，纖維素1％，膽酸0.02％，膽固醇0.05％。2個(gè)月后在90％的豚鼠膽囊中可產(chǎn)生以膽色素為主的結(jié)石，其成分和結(jié)構(gòu)與人類的膽色素結(jié)石相似。③選用成年家犬，成石飼料成分：50％蔗糖、10％酪蛋白、20％玉米淀粉、5％動(dòng)物油、1％膽固醇，輔以礦物質(zhì)和維生素，特點(diǎn)為高蛋白、高碳水化合物，其中膽固醇為關(guān)鍵成分。12周后結(jié)石成石率達(dá)100％，結(jié)石為膽色素結(jié)石。本模型適用于飲食與結(jié)石生成關(guān)系及代謝和防治研究，以及膽石生成過(guò)程中膽色素、膽汁酸和糖蛋白三者間的相互關(guān)系的研究。

(2)感染成石法健康成年家兔，大鼠或家犬，采用無(wú)菌條件下剖腹術(shù)，顯露十二指腸，從十二指腸乳頭逆行插入一塑料管進(jìn)入膽囊，從中注入蛔蟲卵或大腸桿菌懸液。蛔蟲卵懸液濃度為每毫升含3萬(wàn)～15萬(wàn)個(gè)蛔蟲卵。7個(gè)月后膽囊呈慢性炎癥，囊內(nèi)結(jié)石形成。此模型除用于防治研究外，還可進(jìn)行有關(guān)膽系感染的功能代謝變化的分析與觀察研究。

(3)狹窄成石法可選用健康成年家兔、家犬或猴，家兔誘發(fā)率高。

①膽囊結(jié)扎法：健康成年家兔，無(wú)菌條件下剖腹手術(shù)，分清膽管與肝管，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住膽囊頸部以產(chǎn)生部分梗阻。6個(gè)月后膽囊中有明顯結(jié)石形成。

②膽總管結(jié)扎法：家兔剖腹后顯露膽總管，在十二指腸上緣處預(yù)先經(jīng)雙鯨蠟基-26烷磷酸鈉(dicetylsodiumphosphate)浸漬外敷纖維素粘膠(cellophane)的細(xì)帶松松結(jié)扎一道。4個(gè)月后出現(xiàn)膽總管狹窄或完全梗阻，70％～80％出現(xiàn)膽囊結(jié)石，這種結(jié)石質(zhì)軟，色深，有的屬于純膽色素結(jié)石，但大多為含膽色素與膽固醇的混合結(jié)石，此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂捎糜谶M(jìn)行膽色素混合結(jié)石的發(fā)病學(xué)與防治研究。

(4)切除迷走神經(jīng)干成石法健康成年家兔或狗，性別不拘。①采用無(wú)菌手術(shù)探明家兔膽道及膽囊正常，然后顯露胃、賁門及食管，將食管懸吊，顯露兩側(cè)迷走神經(jīng)干，從食管下端切除兩側(cè)迷走神經(jīng)干各1.5～2.0cm。手術(shù)結(jié)束后，在腹腔內(nèi)注入50％葡萄糖20ml，術(shù)后繼續(xù)禁食16～20h。術(shù)后家兔膽汁成分明顯改變，4～5周有膽固醇結(jié)石形成。②將狗麻醉后行無(wú)菌剖腹術(shù)。在隔下右側(cè)腎上腺上方找出右側(cè)內(nèi)臟大神經(jīng)，用止血鉗小心分離，直達(dá)交感神經(jīng)節(jié)，在神經(jīng)干的局部撒無(wú)菌的浮石粉(pumicepowder，一種對(duì)神經(jīng)組織有刺激作用的物質(zhì))，將放藥粉的局部與腹腔內(nèi)臟分隔，再沿胃的賁門上至食管，切斷兩側(cè)的迷走神經(jīng)干，隨后縫合腹膜，術(shù)后2個(gè)月剖腹檢查，可見多數(shù)動(dòng)物呈現(xiàn)慢性或亞急性膽囊炎的變化，組織學(xué)檢查顯示膽囊粘膜下水腫，有淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)和不同程度的結(jié)締組織增生，約有半數(shù)個(gè)體的膽囊內(nèi)可找到大小不一、單個(gè)或多個(gè)膽色素結(jié)石。此模型可用于探討中西藥物治療措施，或?qū)δ懯纬珊湍懙拦δ艿挠绊懠捌錂C(jī)制的研究。3.膽管囊腫動(dòng)物模型(animalmodelofbileductcyst)

膽管囊腫的基本發(fā)病環(huán)節(jié)有：①病變處部分或全部管壁薄弱，可能因胚胎發(fā)育的異?；蚋腥?，外傷或胰管系結(jié)構(gòu)異常所致胰液逆流而引起，或者是新生期病變部發(fā)育不全；②在存在或不存在病變部位遠(yuǎn)側(cè)膽道梗阻情況下，肝膽汁分泌與膽囊膽汁排泄所致膽道內(nèi)壓的增高。膽道梗阻亦可因不同的先天性或獲得性病因而引起。采用綿羊或山羊(出生后14d內(nèi))，雌雄不拘，具體方法為：(1)膽總管遠(yuǎn)端結(jié)扎術(shù)戊巴比妥鈉(1.5～4mg/kg體重)腹腔內(nèi)注射麻醉，顯露肝門部，在膽總管與近側(cè)小腸段匯接點(diǎn)的上方(一般距幽門約4～5cm)，用1號(hào)絲線將膽總管全周縫扎，造成膽總管完全梗阻，關(guān)腹。

(2)膽總管置管膽囊結(jié)扎術(shù)麻醉、手術(shù)顯露方法同前。用1號(hào)絲線近肝總管處全周縫扎膽囊管，再將膽總管前壁縱行切開，在膽總管內(nèi)置人一硅膠管，內(nèi)徑0.1cm，長(zhǎng)約3.0cm，在硅膠管兩端約0.5cm處，分別用1號(hào)絲線全周縫扎肝總管和膽總管，使置入之硅膠管固定在膽管內(nèi)，造成膽總管不全性梗阻。

①對(duì)初生體弱動(dòng)物，需要輸液，可在關(guān)腹前腹腔內(nèi)置人熱生理鹽水；②術(shù)后麻醉清醒前注意保溫，防止肺部感染；③注意勿進(jìn)食過(guò)早，以免導(dǎo)致擴(kuò)張，視動(dòng)物狀況，可以喂水、糖或奶粉，2～3d后再輔以青飼料。術(shù)后膽道造影或直接觀察見膽管節(jié)段性擴(kuò)張，寬度達(dá)鄰近膽管3倍或3倍以上，或直接見膽囊憩室，即為復(fù)制成功。

注意事項(xiàng)

該模型可應(yīng)用于①為膽管囊腫病發(fā)病學(xué)研究從實(shí)驗(yàn)上提供依據(jù)；②研究遠(yuǎn)側(cè)膽道梗阻后梗阻性黃疽的近期發(fā)展與后果，以及分析其死亡原因；③不全梗阻可使動(dòng)物在較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)成活，這種較長(zhǎng)期存活的膽汁淤滯的膽道擴(kuò)張模型，可以于探索膽石成因之間的關(guān)系及結(jié)石生成的規(guī)律，也可對(duì)擴(kuò)張膽道上皮增殖和誘發(fā)腫瘤的可能性進(jìn)行觀察。

4.急性胰腺炎動(dòng)物模型(animalmodelofacutepancreatitis)

理想的急性胰腺炎(acutepancreatltls，AP)動(dòng)物模型是研究AP發(fā)病機(jī)制和藥物防治的前提。目前制備AP模型的方法很多，現(xiàn)有的一些模型中，有食物(CDED)誘導(dǎo)法、十二指腸閉袢法、總膽管結(jié)扎法或靜脈滴注大劑量鈴蟾肽法等，由于不能控制胰腺的病變程度，均不適合于評(píng)價(jià)藥物的最大治療效應(yīng)。下面介紹兩種穩(wěn)定、可靠，能反映胰腺病變依次加重的急性胰腺炎系列模型。

(1)牛膽酸鈉誘導(dǎo)大鼠急性胰腺炎系列模型

Wistar大鼠，重180～260g；NaTc(Sigma公司產(chǎn))實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成1.0％，2.0％，3.5％備用。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，允許飲水，3％戊巴比妥鈉(40mg/kg體重)腹腔注射麻醉。剖腹后經(jīng)十二指腸用4號(hào)頭皮針頭插入胰管開口，向內(nèi)逆行注入NaTc溶液(0.1ml/100g體重)。1.0％和2.0％NaTc誘導(dǎo)AP后12h，血清淀粉酶依次升高，組織水腫和炎癥細(xì)胞滲出逐漸加重，病理學(xué)上屬輕度和重度水腫型急性胰腺炎。3.5％NaTc誘導(dǎo)AP后，除血淀粉酶水平持續(xù)升高外，胰腺組織水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)一步加重，并出現(xiàn)典型胰腺細(xì)胞壞死和出血，病理學(xué)上已屬壞死型胰腺炎；電鏡顯示細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)也證實(shí)上述形態(tài)改變。隨著NaTc誘導(dǎo)濃度的提高，胰腺損傷依次加重。本模型適合評(píng)價(jià)藥物對(duì)水腫型和(或)壞死型胰腺炎的最大防治效應(yīng)，故具有一定的實(shí)用價(jià)值。

(2)犬急性壞死型胰腺炎模型成年雜種狗，10～15kg，雌雄不拘。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水，麻醉后經(jīng)上腹正中切口人腹，尋及十二指腸，于胰管開口附近切開十二指腸壁，置一細(xì)塑料管于主胰管內(nèi)，然后向內(nèi)注入胰蛋白酶和狗自身膽汁混合液2～3ml(0.3ml/kg體重，配方為1ml膽汁+4ml胰酶溶液，內(nèi)含4mg胰蛋白酶)，滯留5min后拔去塑料管，荷包縫合十二指腸壁，關(guān)腹。本實(shí)驗(yàn)采用胰管內(nèi)加壓注射自身膽汁和胰蛋白酶混合物，術(shù)后1h即見血清淀粉酶明顯升高，持續(xù)24h，6h達(dá)峰值；胰腺大體和鏡下病理改變呈典型的壞死、出血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，表明此方法可成功誘發(fā)犬急性壞死性胰腺炎模型。

5．慢性胰腺炎動(dòng)物模型(animalmodelofchronicpancreatitis)

是由于連續(xù)炎癥造成胰腺功能不可逆性損害。盡管對(duì)該病的研究已經(jīng)取得很大進(jìn)展，但是它的發(fā)病機(jī)制及與其相關(guān)的診斷和治療仍有許多問(wèn)題有待解決。許多學(xué)者在努力尋求適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型。成年雜種貓，在隔夜禁食后，全麻(30mg/kg體重異戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射)下施行剖腹手術(shù)，將尼龍導(dǎo)管插入主胰管，縫合固定后，燒灼閉合導(dǎo)管外露端，造成主胰管完全梗阻或先將一根尼龍導(dǎo)管插入主胰管內(nèi)，緩慢注入94％乙醇1.5ml，然后截下1cm長(zhǎng)的導(dǎo)管留置在主胰管內(nèi)，最后用26號(hào)細(xì)針頭均勻點(diǎn)狀注射94%乙醇1.5ml于胰腺實(shí)質(zhì)內(nèi)。6周后胰腺小葉變成圓形，被向心性纖維包繞，小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)及其周圍組織均有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，葉間胰管明顯擴(kuò)張，管腔內(nèi)偶見多形核粒細(xì)胞。11周后胰腺結(jié)構(gòu)發(fā)生嚴(yán)重紊亂。26周后，胰腺小葉數(shù)目減少，間質(zhì)纖維組織明顯增生，單核細(xì)胞浸潤(rùn)。6周后出現(xiàn)典型的慢性胰腺炎，26周后慢性胰腺炎的發(fā)生率為100％。

(二)胃腸疾病動(dòng)物模型

1．動(dòng)物胃粘膜腸上皮化生模型(animalmodelofintestinalmetaplasia)(1)烷基硝基亞硝基胍類誘發(fā)胃粘膜腸化生模型隨著烷基碳原子數(shù)的增加，致癌性依次減弱，但誘發(fā)腸化生的能力依次增強(qiáng)。其中丙基硝基亞硝基弧(PNNG)是目前誘發(fā)動(dòng)物胃粘膜腸化生較為理想的藥物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般選用4～6周齡，體重100～200g的雄性大鼠，飲水中加藥，飲水瓶涂成黑色或以錫箔紙包裹，以免致癌物遇光分解。藥物先用去離子水或蒸餾水配制成濃度為1g/L的儲(chǔ)存液，4℃保存，每天用前再稀釋成所需濃度的溶液，讓動(dòng)物自由飲用。所用劑量為50～83ug/ml，投藥時(shí)間16～20周。(2)X線胃局部照射誘發(fā)胃粘膜腸化生模型選用5～8周齡的Wistar或JCL/SD大鼠。大鼠麻醉后置于X線光束下，動(dòng)物體用0.6cm厚的鉛皮加以保護(hù)，鉛皮中央正對(duì)胃區(qū)處留有直徑為1.8cm的小孔，經(jīng)此孔進(jìn)行X線照射。照射劑量每次5Gy，每日1次，共6次。

(3)X線照射和N-甲基-N-硝基亞硝基胍(MNNG)聯(lián)合誘發(fā)鼠胃粘膜腸化生模型

5周齡SD雄性大鼠，先用X線照射，每次0.5Gy，每日1次，共6次，8周后投給50ug/ml的MNNG溶液自由飲用4個(gè)月，觀察至第15個(gè)月時(shí)，其腸化生發(fā)生率可達(dá)100％。(4)PNNG誘發(fā)犬胃粘膜腸化生模型選用3周歲，體重11kg左右的Beagle犬自由飲用150ug/mlPNNG溶液40周，后改為自來(lái)水。第128周左右可出現(xiàn)典型的腸化生，無(wú)論胃鏡或顯微鏡下觀察，均與人類胃粘膜腸化生相類似。

(5)帶蒂胃壁瓣腸移植大鼠胃粘膜腸化生模型選用體重180～200gWistar大鼠，常規(guī)麻醉后打開腹腔，于大鼠腺胃前壁正中部取一大小約1.5cm×1cm梭形胃壁瓣，保留胃小彎側(cè)血管2～4條，0/7號(hào)線縫合胃壁。分別在十二指腸中部、空腸末端及中結(jié)腸縱形切開腸管，切口長(zhǎng)約1.5cm，0.05％洗必泰紗條清潔傷口，將梭形胃壁瓣粘膜面向著腸腔進(jìn)行側(cè)側(cè)吻合，0/7號(hào)線連續(xù)縫合，腹膜腔內(nèi)放入0.9％NaCl溶液5ml，常規(guī)關(guān)閉腹腔。術(shù)后第3個(gè)月時(shí)，移植至空腸和結(jié)腸的胃壁瓣粘膜即顯示有腸化生，術(shù)后6個(gè)月后，移植到腸道各段的胃壁瓣粘膜均可見廣泛的腸化生。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腸化生模型可用于①研究胃粘膜腸化生發(fā)生的原因及組織來(lái)源；②探討胃粘膜腸化生與胃癌發(fā)生的關(guān)系；③胃粘膜腸化生逆轉(zhuǎn)治療藥物的篩選和療效觀察。2．幽門螺桿菌感染動(dòng)物模型(animalmodelofhelicobaeterpyloriinfection)(1)Hp感染悉生小獵狗模型給予106～109cfu的Hp菌液經(jīng)口感染悉生獵狗，組織學(xué)檢查胃粘膜可見局灶性或彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淋巴濾泡形成，并伴有輕至中度中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，與人的胃炎相似，中性粒細(xì)胞是持續(xù)存在的，而在悉生小豬則是短暫存在。人和豬的Hp感染通常局限在胃內(nèi)，而在小狗除胃以外，在胃腸道其他部位如咽部、食管、十二指腸、空腸、結(jié)腸也檢出Hp。(2)Hp感染家豬模型實(shí)驗(yàn)豬在實(shí)驗(yàn)前經(jīng)檢查無(wú)Hp存在。經(jīng)西咪替丁抑酸處理后給予Hp口服感染，每天3次，每次3ml(1.5×108cfu/m1)共4d，可在胃竇和胃體檢測(cè)到Hp，并產(chǎn)生與人類組織學(xué)相同的慢性活動(dòng)性胃炎。

(3)Hp感染小鼠模型

109cfu的Hp菌液經(jīng)口感染無(wú)特異病原CD1小鼠、BALB/c小鼠和普通級(jí)CD1小鼠，1周后及其后的4～8周內(nèi)，小鼠體內(nèi)可查到程度不同的感染，其胃粘膜的病理變化與人感染Hp的變化相似，主要表現(xiàn)為胃腺體消失，上皮細(xì)胞脫落，潰瘍形成及粘膜固有層炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。此模型可用于觀察Hp感染的病理過(guò)程及細(xì)菌疫苗應(yīng)用的研究。

3．消化性潰瘍動(dòng)物模型(animalmodelofpeptlculcer)(1)應(yīng)激性大鼠潰瘍模型大鼠禁食24h，將動(dòng)物固定于特制木板上，垂直浸入(23±0.5)℃水浴中，水深平劍突，24h后取出，脫頸處死，打開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，胃內(nèi)注入1％甲醛溶液8ml，將胃取出浸入甲醛溶液中，30min后沿胃大彎剖開，測(cè)量每個(gè)潰瘍長(zhǎng)徑，計(jì)算全胃潰瘍長(zhǎng)徑之和為潰瘍指數(shù)。此模型方法簡(jiǎn)便，成功率高，可用于應(yīng)激性潰瘍發(fā)生機(jī)制和粘膜保護(hù)藥物的研究。

(2)組胺性大鼠潰瘍模型大鼠禁食24h，腹部皮下注射磷酸組胺50mg/kg，1h后再重復(fù)注射一次，2h后處死動(dòng)物，按前述方法固定胃和記錄潰瘍指數(shù)。此方法可同時(shí)誘發(fā)食管、胃、十二指腸等發(fā)生潰瘍?？捎糜跐儼l(fā)生機(jī)制及治療藥物的研究。

(3)水楊酸性大鼠胃潰瘍模型大鼠禁食24h，灌胃給水楊酸100mg/kg體重，4h后脫頸處死，按前述方法固定胃，在普通放大鏡下計(jì)數(shù)腺胃出現(xiàn)的潰瘍點(diǎn)數(shù)目，以出血點(diǎn)個(gè)數(shù)作為觀察指標(biāo)。

(4)利血平性小鼠潰瘍模型小鼠腹部皮下注射利血平5mg/kg體重，繼續(xù)禁食18h，脫頸處死，解剖取胃，固定標(biāo)本，用解剖顯微鏡計(jì)數(shù)胃潰瘍個(gè)數(shù)。

4.潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型(animalmodelofulcerativecolitis)(1)大鼠乙酸潰瘍性結(jié)腸炎模型乙酸屬有機(jī)酸，與腸粘膜接觸可直接導(dǎo)致炎癥損傷。選用雄性SD大鼠，體重300～350g，試驗(yàn)前禁食16h，戊巴比妥鈉腹腔麻醉。用導(dǎo)管經(jīng)肛門插入結(jié)腸內(nèi)8cm，注入8％乙酸2ml，20s后立即注入5ml生理鹽水沖洗。其病理特點(diǎn)為結(jié)腸粘膜彌漫性充血水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)糜爛，嚴(yán)重者可見潰瘍形成。但早期僅見單純急性炎癥，病變進(jìn)展及愈合均迅速。與人類潰瘍性結(jié)腸炎病變進(jìn)展與愈合交替的特點(diǎn)不同，該模型炎性介質(zhì)代謝與人類潰瘍性結(jié)腸炎相似。其優(yōu)點(diǎn)為制模簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，但不能反映人類潰瘍性結(jié)腸炎免疫學(xué)變化。

(2)聚糖硫酸鈉誘發(fā)小鼠急慢性潰瘍性結(jié)腸炎選無(wú)特定病原菌CBA/J(H-2k)或BALB/c(H-2d)雄性小鼠，8～9周齡。飲水中給予5％～10％葡聚糖硫酸鈉(DSS)飲用8～9d，即可看到結(jié)腸粘膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)、多發(fā)性糜爛、隱窩膿腫等急性炎癥表現(xiàn)。慢性潰瘍性結(jié)腸炎模型可先給予5％DDS飲用7d，再飲用自來(lái)水10d，如此3～5個(gè)循環(huán)，結(jié)腸粘膜不僅有糜爛、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且有淋巴濾泡形成及粘膜再生改變，部分粘膜出現(xiàn)異型增生，此模型病理改變類似于人類潰瘍性結(jié)腸炎模型，不僅可用于發(fā)病機(jī)制、治療藥物研究，而且適用于與結(jié)腸癌相關(guān)的研究。

(3)免疫學(xué)方法誘發(fā)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型選用Wistar大鼠，體重120～130g。取一只健康大鼠的結(jié)腸內(nèi)容物，劃線于伊紅-美藍(lán)平板，37℃培養(yǎng)24h，取典型菌落擴(kuò)增并做數(shù)值鑒定，確定為大腸桿菌后，冰箱保存?zhèn)溆谩Ｃ庖咔叭【N擴(kuò)增，用福爾馬林殺死細(xì)菌，生理鹽水洗兩次并調(diào)濃度為1.2×108/ml。免疫動(dòng)物分別于第1，10，17，24d共接受4次免疫。第1次于后足跖處注射細(xì)菌懸液0.2m1；第2、3次分別于腹部和背部皮下多點(diǎn)注射0.4ml和0.6ml；第4次腹腔內(nèi)注射1.2ml。結(jié)腸病理改變可見粘膜水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及血管炎改變。粘膜內(nèi)可見多處隱窩膿腫及潰瘍形成，同時(shí)可看到細(xì)胞免疫功能下降和免疫復(fù)合物增加。

二、呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)慢性支氣管炎動(dòng)物模型(animalmodelofchronicbronchitis)

常用簡(jiǎn)便方法是給動(dòng)物吸入二氧化硫或煙霧。

1．二氧化硫吸入刺激法分別選小鼠吸入二氧化硫2％，每天10s，60d，第14～18d出現(xiàn)支氣管病變，27d后出現(xiàn)重型氣管炎病變；吸入二氧化硫1％，每天20s，25d，第20d出現(xiàn)慢性支氣管炎病變；大鼠吸入二氧化硫23ml/10L空氣，每日30min，第56d出現(xiàn)慢性支氣管炎病變；吸入二氧化硫3ml/L空氣，每日5min，每周6次，