ve含量測(cè)定課件

維生素E的測(cè)定

一、概述

維生素是維持人體正常生命活動(dòng)所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為對(duì)維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有20余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺(tái)物。維生素都具有以下共同特點(diǎn)：這些化合物或其前體化合物都在天然食物中存在；它們不能供給機(jī)體熱能。也不是構(gòu)成組織的基本原料，主要功用是通過作為輔酶的成份調(diào)節(jié)代謝過程，需要量極??；它們一般在體內(nèi)不能合成，或合成量不能滿足生理需要，必須經(jīng)常從食物中攝??；長(zhǎng)期缺乏任何一種維生素都會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。二、脂溶性V的測(cè)定

VA、VD、VE、VK與類脂物一起存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)：1.溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。2.耐酸堿性：維生素A、D對(duì)酸不穩(wěn)定，對(duì)堿穩(wěn)定，維生素E對(duì)堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。耐熱性、耐氧化性

耐熱性氧化性VA

好，能經(jīng)受煮沸易被氧化（光、熱促進(jìn)其氧化）VD好，能經(jīng)受煮沸不易被氧化VE好，能經(jīng)受煮沸在空氣中能慢慢被氧化（光、熱、堿促進(jìn)其氧化）VK好，能經(jīng)受煮沸易被光、氧化劑及醇破壞

（一）鈰量法1、原理：

VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對(duì)一生育醌，過量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。終點(diǎn)：亮黃→灰紫;空白試驗(yàn).2、反應(yīng)條件（1）VE在H2SO4酸性條件下水解為宜。堿性溶液中游離生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中進(jìn)行,如在堿性中會(huì)生成堿式鹽而影響測(cè)定。（2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,α-生育酚溶于酸而不溶于水,滴定過程中應(yīng)有一定濃度的乙醇。（3）本法適用于純度高的VE供試品。[檢查方法]

取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，根據(jù)消耗硫酸鈰滴定液的量來進(jìn)行計(jì)算

紫外分光光度法[原理]:維生素E在堿性溶液中加熱水解生成游離生育酚，并被三氯化鐵氧化為對(duì)生育醌，同時(shí)生成亞鐵離子。后者與聯(lián)吡啶生成血紅色的配離子，再進(jìn)行比色測(cè)定。但由于操作麻煩，專屬性不高，又容易有干擾，現(xiàn)已被GC取代。生育酚[O]對(duì)-生育醌★氣相色譜法(ChP)六十年代起開始研究維生素E的氣相色譜法。GC特點(diǎn)選擇性好靈敏度高速度快分離效能好氣相色譜法(GLC)測(cè)定維生素E的優(yōu)點(diǎn)

可分離維生素E、其異構(gòu)體及雜質(zhì)，可選擇性地測(cè)定維生素E

。適宜測(cè)定純度不高的維生素E及維生素E制劑。中國(guó)藥典測(cè)定維生素E及維生素E制劑均采用氣相色譜法。（二）氣相色譜法1、色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：2m×4mmI.D.硼硅玻璃柱，內(nèi)裝硅藻土（80-100目）或高分子多孔小球固定相：硅酮（OV-17）涂布濃度2%的填充柱固定液→100%二甲基聚硅氧烷毛細(xì)管柱載氣：N2，流速:含2%固定相：以18-20分鐘為宜；含5%固定相：以30-32分鐘為宜柱溫：265℃內(nèi)標(biāo)：正三十二烷檢測(cè)器：FID（氫火焰離子化檢測(cè)器）4、溶液配制：內(nèi)標(biāo)溶液：正三十二烷的環(huán)己烷溶液（1.0mg/ml）對(duì)照溶液：對(duì)照品溶解于內(nèi)標(biāo)溶液中(1mg/ml)供試品溶液：供試品約50mg，用內(nèi)標(biāo)溶液，溶解并稀釋至50ml3、供試品測(cè)定

f×Ax×MsAs

Ax：供試品峰面積F：校正因子

As:內(nèi)標(biāo)物的峰面積2、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：n≥500（按維生素E計(jì)算）R≥2（維生素E與內(nèi)標(biāo)物正三十二烷的分離度）mg=★定量法:內(nèi)標(biāo)法加校正因子1KAA=內(nèi)對(duì)2KAA=內(nèi)樣實(shí)際工作中的計(jì)算方法本品含C31H52O3應(yīng)為96.0~102.0%2、測(cè)定方法：取供試品液和對(duì)照品液各20μl注入高效液相色譜儀中，記錄峰高HX和Hr3、計(jì)算：供試品中維生素E的量mx(mg)=式中：mr—為生育酚對(duì)照品的量，Hx、Hr—為生育酚供試品、對(duì)照品中檢測(cè)得峰高。維生素E的熒光分光光度法同步掃描直接（內(nèi)源）熒光法[原理]：維生素大多含有芳香環(huán)結(jié)構(gòu)（大的共軛鍵結(jié)構(gòu)），本身具有較強(qiáng)的天然熒光，因此可以利用內(nèi)源熒光檢測(cè)維生素。如血液中維生素E295nm激發(fā)，325nm處測(cè)量。掃描過程中使激發(fā)波長(zhǎng)（ex）和發(fā)射波長(zhǎng)（em）彼此間保持固定的波長(zhǎng)間隔em-ex=△（本實(shí)驗(yàn)中△為常數(shù)40nm）在△保持固定的情況下，同步熒光的信號(hào)強(qiáng)度便與待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比直接295nm激發(fā)，325nm處測(cè)量。則溶劑Raman光譜嚴(yán)重干擾測(cè)定!同步熒光掃描技術(shù)（可變角同步掃描技術(shù)）（三）熒光分光光度法1、藥物本身