常用分子生物學(xué)技術(shù)及基因診斷練習(xí)題

常用分子生物學(xué)技術(shù)及基因診斷、治療一、選擇題（一）A型題.印跡技術(shù)可以分為A.DNA印跡B.RNA印跡C.蛋白質(zhì)印跡D.斑點(diǎn)印跡E.以上都對(duì).PCR實(shí)驗(yàn)延伸溫度一般是A.90℃B.72℃C.80℃D.95℃E.60℃.Westernblot中的探針是A.RNAB.單鏈DNAC.cDNAD.抗體E.雙鏈DNA.Northernblotting與Southernblotting不同的是A.基本原理不同B.無(wú)需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化C.探針必須是RNAD.探針必須是DNAE.靠毛細(xì)作用進(jìn)行轉(zhuǎn)移.可以不經(jīng)電泳分離而直接點(diǎn)樣在NC膜上進(jìn)行雜交分析的是A.斑點(diǎn)印跡B.原位雜交C.RNA印跡D.DNA芯片技術(shù)E.DNA印跡.下列哪種物質(zhì)在PCR反應(yīng)中不能作為模板A.RNAB.單鏈DNAC.cDNAD.蛋白質(zhì)E.雙鏈DNA.RT-PCR中不涉及的是A.探針B.cDNAC.逆轉(zhuǎn)錄酶D.RNAE.dNTP.關(guān)于PCR的基本成分?jǐn)⑹鲥e(cuò)誤的是A.特異性引物B.耐熱性DNA聚合酶C.dNTPD.含有Zn2+的緩沖液E模板.cDNA文庫(kù)構(gòu)建不需要A.提取mRNAB.限制性內(nèi)切酶裂解mRNAC.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNAD.將cDNA克隆入質(zhì)?；蚴删wE.重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞.目前主要克隆的致病基因是A.糖尿病致病基因B.惡性腫瘤致病基因C.單基因致病基因D.多基因致病基因E.高血壓致病基因.目前基因治療中選用最多的基因載體是A.噬菌體B.脂質(zhì)體C.逆轉(zhuǎn)錄病毒D.腺病毒相關(guān)病毒E.腺病毒.目前基因治療多采用的方法是A.基因增補(bǔ)B.基因置換C.基因矯正D.基因滅活E.基因疫苗（二）B型題A.SouthernblottingB.NorthernblottingC.WesternblottingD.dotblottingE.insituhybridization.不需要電泳、轉(zhuǎn)膜等程序.電泳前不需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化.靠電轉(zhuǎn)移完成生物大分子的轉(zhuǎn)移.直接在組織切片或細(xì)胞涂片上進(jìn)行雜交A.逆轉(zhuǎn)錄PCRB.原位PCRC.實(shí)時(shí)PCRD.多重PCRE.RFLP.將目的基因擴(kuò)增與定位相結(jié)合.能動(dòng)態(tài)檢測(cè)反應(yīng)過(guò)程中的產(chǎn)物量.將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一項(xiàng)技術(shù).在同一反應(yīng)中采取多對(duì)引物A.基因疫苗B.基因矯正C.基因置換D.基因增補(bǔ)E.基因失活.目前基因治療采用最多的方法是.將致病基因的異常堿基進(jìn)行修正的基因治療方法是.將正常基因經(jīng)體內(nèi)基因同源重組原位替換致病基因的基因治療方法是.利用特定的反義核酸阻斷變異基因異常表達(dá)的基因治療方法是（三）X型題.核酸探針可以是A.人工合成寡核甘酸片段B.基因組DNA片段C.RNA片段D.cDNA全長(zhǎng)或部分片段E.核甘酸.核酸分子雜交可以形成的雜化雙鏈有A.DNA/DNAB.RNA/RNAC.DNA/RNAD.寡核甘酸/RNAE.寡核甘酸/DNA.PCR技術(shù)主要用于A.目的基因的克隆B.基因的體外突變C.DNA和RNA的微量分析D.DNA序列測(cè)定E.基因突變分析.基因組DNA文庫(kù)建立需要A.基因組進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化B.DNA片段克隆到相應(yīng)載體中C.重組體感染宿主菌D.篩選目的基因可以通過(guò)核酸分子雜交的方法進(jìn)行E.以為噬菌體為載體的人基因組DNA文庫(kù)的克隆數(shù)目至少應(yīng)在106以上.用于構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)的載體有A.酵母人工染色體B.粘粒C.入噬菌體D.腺病毒E.脂質(zhì)體.基因診斷較常規(guī)診斷其特點(diǎn)有A.屬于病因診斷B.特異性強(qiáng)C.適用范圍窄D.靈敏度高E.有放大效應(yīng).基因失活的常用技術(shù)包括A.基因疫苗B.核酶C.小干擾RNAD.反義核酸E.基因置換.克隆羊多莉的產(chǎn)生屬于A.同種異體細(xì)胞轉(zhuǎn)移技術(shù)B.同種異體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)C.試管內(nèi)受精D.無(wú)性繁殖E.同種異體細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù).基因治療的基本程序包括A.治療性基因的選擇B.基因載體的選擇C.靶細(xì)胞的選擇D.基因轉(zhuǎn)移E.回輸體內(nèi).目前可用作基因治療的基因載體包括A.腺病毒相關(guān)病毒B.噬菌體C?腺病毒D.逆轉(zhuǎn)錄病毒E.粘粒二、是非題.Southernblot主要用于RNA的定性和定量分析。.蛋白質(zhì)印跡分析技術(shù)中蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移，可以用電轉(zhuǎn)移，也可以靠毛細(xì)作用轉(zhuǎn)移。.實(shí)時(shí)PCR技術(shù)與普通PCR技術(shù)相比，它可以動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物的量。.生物芯片可以是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白質(zhì)芯片。.基因矯正是用正常的基因通過(guò)體內(nèi)基因同源重組，替換致病基因來(lái)達(dá)到治療目的。.目前基因治療多采用基因增補(bǔ)的方式。.RNA印跡技術(shù)中，RNA分子在轉(zhuǎn)移前需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶切割。.PCR反應(yīng)中變性主要是使模板DNA完全變性為單鏈。.實(shí)時(shí)PCR技術(shù)中，TaqDNA聚合酶在鏈延伸過(guò)程中遇到熒光探針，可發(fā)揮3'-5'核酸外切酶活性。.內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變發(fā)生在生殖細(xì)胞可引起惡性腫瘤。三、填空題.分子雜交是利用DNA和這一基本性質(zhì)來(lái)進(jìn)行DNA或RNA定性、定量分析的。.在印跡技術(shù)中，將DNA片段在瓊脂糖凝膠中使其成為，利用使膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移到膜上，使之成為固相化分子。.印跡技術(shù)的基本流程依次為、、和。.Southernblotting主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。.Northernblotting主要用于檢測(cè)的表達(dá)水平，敏感性較PCR，但其具有和的優(yōu)點(diǎn)。.Westernblotting主要用于檢測(cè)樣品中的存在、細(xì)胞中以及的相互作用研究等。.PCR的基本反應(yīng)步驟包括、、。.目前克隆致病相關(guān)基因主要有和兩大策略。.根據(jù)受體細(xì)胞的類型不同，基因治療分為的基因治療和的基因治療兩大類。.目前使用的基因載體有和兩大類。.在人類基因治療實(shí)施中，導(dǎo)入基因的方式有和兩大類。四、名詞解釋.probe.blottingtechnologe.genelibary．genechip．genetherapy.genediagnosis.geneinactivation.genereplacement.geneaugmentation.PCR五、問答題.簡(jiǎn)述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理。.簡(jiǎn)述逆轉(zhuǎn)錄PCR、原位PCR和實(shí)時(shí)PCR技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。.簡(jiǎn)述基因診斷的概念及特點(diǎn)。.何為基因治療，目前基因治療有哪些基本策略？.試述基因治療的基本程序。.欲生產(chǎn)一種藥用多肽，科學(xué)家已經(jīng)將此多肽的基因與某真核表達(dá)質(zhì)粒重組在一起。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，利用PCR方法鑒定此重組表達(dá)質(zhì)粒是否含有這一多肽的基因。.請(qǐng)為某一單基因遺傳?。ǖ捅磉_(dá)或不表達(dá)）的患者設(shè)計(jì)一個(gè)基因治療方案。參考答案一、選擇題（一）A型題1.E2,B3.D4.B5.A6.D7.A8.D9.B10.C11.D12,A（二）B型題1.D2.B3.C4.E5.B6.C7.A8.D9.D10.B11.C12.E（三）X型題1ABCD2ABCDE3ABCDE4ABCDE5ABC6ABDE7.BCDE8.BD9.ABCD10.ACD二、是非題.X2.X3.J4.J5.X.6,V7.X8.V9.X10,X三、填空題.變性復(fù)性.變性單鏈毛細(xì)作用NC.電泳轉(zhuǎn)移雜交放射自顯影或化學(xué)顯色.DNA重組質(zhì)粒噬菌體.mRNA差特異性強(qiáng)假陽(yáng)性率低.特異性蛋白質(zhì)的存在特異性蛋白質(zhì)的半定量分析蛋白質(zhì)分子.變性退火延伸.功能克隆定位克隆.體細(xì)胞生殖細(xì)胞10病毒載體非病毒載體四、名詞解釋.探針，是指帶有特殊可檢測(cè)標(biāo)記（放射性核素或其它化合物標(biāo)記）的核酸片段，它具有特定的序列，能夠與待測(cè)的核酸片斷互補(bǔ)結(jié)合，因此可用于檢測(cè)核酸樣品中特定的基因。.印跡技術(shù)，是指將在凝膠中分離的生物大分子轉(zhuǎn)移或直接放在固定化介質(zhì)上并加以檢測(cè)分析的技術(shù)。它包括DNA印跡技術(shù)、RNA印跡技術(shù)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)等。.基因文庫(kù)，是指一個(gè)包含了某一生物體全部DNA序列的克隆群體?；蛭膸?kù)可以分為基因組DNA文庫(kù)和cDNA文庫(kù)。.基因芯片，又稱DNA微陣列，包括DNA芯片①NAchip)和cDNA芯片(cDNAchip)，是指將許多特定的DNA片段或cDNA片段作為探針，有規(guī)律地緊密排列固定于支持物上，然后與待測(cè)的熒光標(biāo)記樣品進(jìn)行雜交，雜交后用熒光檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)芯片進(jìn)行掃描，通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)每一位點(diǎn)的熒光信號(hào)做出檢測(cè)、比較和分析，從而迅速得出定性和定量的結(jié)果。.基因診斷，是指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，直接檢測(cè)基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對(duì)疾病作出診斷的方法。.基因治療，從廣義上講，是指將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，以達(dá)到治療疾病目的的方法。.基因失活，是指將特定的序列導(dǎo)入細(xì)胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)，已達(dá)到治療疾病的目的。.基因置換，是指用正常的基因通過(guò)體內(nèi)基因同源重組，原位替換致病基因，使細(xì)胞內(nèi)的DNA完全恢復(fù)正常狀態(tài)。.基因增補(bǔ)，是指將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異?；颍ㄟ^(guò)目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá)產(chǎn)物彌補(bǔ)缺陷基因的功能或使原有的功能增強(qiáng)。10聚合酶鏈反應(yīng)，指以DNA分子為模板，以一對(duì)與模板序列相互補(bǔ)的寡核甘酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，完成新的DNA的合成，重復(fù)這一過(guò)程使目的DNA片段得到擴(kuò)增。這一技術(shù)可以將微量目的DNA片段擴(kuò)增一百萬(wàn)倍以上。五、問答題.簡(jiǎn)述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。答：印記技術(shù)是指將在凝膠中分離的生物大分子轉(zhuǎn)移或直接放在固定化介質(zhì)上并加以檢測(cè)分析的技術(shù)。它主要包括DNA印跡技術(shù)(Southernblot)、RNA印跡技術(shù)(Northernblot)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Westernblot)等。DNA印跡技術(shù)主要用于基因組DNA的定性和定量分析，例如對(duì)基因組中特異基因的定位及檢測(cè)等，此外亦可用于分析重組質(zhì)粒和噬菌體。RNA印跡技術(shù)主要用于檢測(cè)某一組織或細(xì)胞中已知的特異mRNA的表達(dá)水平，也可以比較不同組織和細(xì)胞中的同一基因的表達(dá)情況。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)，也叫免疫印跡，用于檢測(cè)樣品中特異性蛋白質(zhì)的存在、細(xì)胞中特異蛋白質(zhì)的半定量分析以及蛋白質(zhì)分子的相互作用研究等。.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。答：PCR技術(shù)類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。以DNA分子為模板，以一對(duì)與模板序列互補(bǔ)的寡核甘酸片段為引物，在DNA聚合酶作用下，利用4種脫氧核甘酸，完成新的DNA的合成，重復(fù)這一過(guò)程使目的DNA片段得到擴(kuò)增。這一技術(shù)可以將微量目的DNA片段擴(kuò)增100萬(wàn)倍以上?；静襟E是首先待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。這種變性-復(fù)性-延伸的過(guò)程就是一個(gè)PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。主要用于目的基因的克隆、基因的體外突變、DNA和RNA的的微量分析、DNA序列測(cè)定和基因突變分析等。3簡(jiǎn)述逆轉(zhuǎn)錄PCR、原位PCR和實(shí)時(shí)PCR技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。答：逆轉(zhuǎn)錄PCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。即首先以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA，再以后者為模板通過(guò)PCR反應(yīng)來(lái)擴(kuò)增目的基因。原位PCR是在固定液固定、石蠟包埋的組織切片或細(xì)胞涂片上的單個(gè)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的PCR反應(yīng)，然后用特異性探針進(jìn)行原位雜交，即可檢出待測(cè)DNA或RNA是否在該組織或細(xì)胞中存在。實(shí)時(shí)PCR的基本原理是引入了熒光標(biāo)記分子，并使熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比，對(duì)每一反應(yīng)時(shí)刻的熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)分析，計(jì)算出PCR產(chǎn)物量。根據(jù)動(dòng)態(tài)變化數(shù)據(jù)，可以精確計(jì)算出樣品中最初的含量差異。逆轉(zhuǎn)錄PCR與傳統(tǒng)PCR相比，將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合起來(lái)，可以對(duì)已知序列的RNA進(jìn)行定性及半定量分析。常規(guī)PCR或RT-PCR技術(shù)的產(chǎn)物不能在組織細(xì)胞中定位原位，因而不能與特定的組織細(xì)胞特征表型相聯(lián)系，原位PCR技術(shù)可以將目的基因的擴(kuò)增與定位相結(jié)合。實(shí)時(shí)PCR技術(shù)與傳統(tǒng)PCR反應(yīng)相比，在常規(guī)正向和反向引物之間，增加了一特殊引物作為探針。該技術(shù)可以通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中的產(chǎn)物量，消除了產(chǎn)物堆積對(duì)定量分析的干擾。4簡(jiǎn)述基因診斷的概念及特點(diǎn)。答：基因診斷是指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，直接檢測(cè)基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對(duì)疾病作出診斷的方法。基因診斷與其他診斷方法相比，基因診斷的方法特點(diǎn)是：(1)針對(duì)性強(qiáng)，以基因作為檢查材料和探察目標(biāo)，屬于“病因診斷”。(2)特異性強(qiáng)，用分子雜交技術(shù)選用特定基因序列作為探針，故有很高的特異性。(3)靈敏度高，所用技術(shù)具有放大效應(yīng)，故診斷靈敏度高(4)適用性強(qiáng)，診斷范圍廣。5何為基因治療，目前基因治療有哪些基本策略？答：從廣義上講，是指將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，以達(dá)到治療疾病目的的方法，均謂之基因治療。(1)缺陷基因精確的原位修復(fù)包括對(duì)致病基因的突變堿基進(jìn)行矯正的基因矯正和用正?；蛲ㄟ^(guò)重組原位替換致病基因的基因置換。這兩種方法是對(duì)缺陷基因精確的原位修復(fù)，不涉及基因組的任何改變，是最為理想的治療方法，但技術(shù)上目前尚未突破。(2)基因增補(bǔ)是指將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異常基因，而通過(guò)目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá)產(chǎn)物彌補(bǔ)缺陷基因的功能或使原有的功能增強(qiáng)。目前基因治療多采用此法。(3)基因失活是指將特定的序列導(dǎo)入細(xì)胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)，已達(dá)到治療疾病的目的。(4)基因疫苗主要是指DNA疫苗，是第三代疫苗。其將編碼外源性抗原的基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒中，直接導(dǎo)入人體內(nèi)，抗原基因在一定時(shí)間內(nèi)持續(xù)表達(dá)，不斷刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，達(dá)到治病或防病目的。.試述基因治療的基本程序。答：基本程序如下：(1)治療性基因選擇選擇對(duì)疾病有治療作用的特定目的基因。(2)基因載體的選擇有病毒載體和非病毒載體，常用的是病毒載體。(3)靶細(xì)胞的選擇基因治療根據(jù)受體細(xì)胞種類的不同分為體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的基因治療，目前進(jìn)行的基因治療均是體細(xì)胞基因治療和間接體