魚類生理學具體實驗內(nèi)容

魚類生理學試驗試驗一 反射中樞活動的某些根本特征及反射弧的分析試驗工程學時：3** 要求：■必修□選修一、試驗目的及要求：通過對某些脊髓反射〔如脊蛙的屈肌反射〕的分析，了解反射弧完整性與反射活動的關(guān)肌反射為指標，觀看反射中樞活動的某些根本特征，并分析它們產(chǎn)生的機制。二、試驗根本原理：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的參與下，機體對刺激所產(chǎn)生的具有適應意義的規(guī)性律性反響過程稱為反射。將動物的高位中樞切除僅保存脊髓的動物成為脊髓動物〔如脊蛙射過程的某些特征。反射活動的構(gòu)造根底是反射弧。典型的反射弧由感受器、傳入神經(jīng)、神經(jīng)中樞、傳出到破壞，反射活動就無法實現(xiàn)。特征。如：反射時〔從刺激作用于感受器至效應器消滅反響所經(jīng)受的時間〕的長短、反射活動空間范圍的大小、反射活動持續(xù)時間的久暫以及引起反射活動的刺激條件等等。三、主要儀器設備及試驗耗材：蟾蜍、硫酸溶液0.1%,0.3%,0.5%,1秒表、玻璃平皿、肌夾、搪瓷杯、小濾紙〔約1c×1c、燒杯。四、試驗內(nèi)容或步驟：1、試驗預備神經(jīng)干下穿一條細線備用。手術(shù)完后，用肌夾夾住動物下頜，懸掛在鐵架臺上。2、試驗工程〔l〕反射中樞活動的某些根本特征①反射時的測定：在平皿內(nèi)盛適量0.1%硫酸溶液，將蟾蜍一側(cè)后肢的一個腳趾尖浸入度要全都。三次所測時間的平均值，即為此反射的反射時〔兩次試驗間隔至少2～3mi。0.3%、0.5%、1%的硫酸溶液再重復上述測定，比較四種濃度硫酸所測之反射時是否一樣?！?〕反射弧的分析①用浸有1%硫酸溶液的小濾紙片貼在下腹部。觀看雙后肢有何反響？待反響消滅后，的細線，剪斷坐骨神經(jīng)，再重復上述試驗，比較兩次結(jié)果有何不同？②分別將左右后肢趾尖浸入盛有1%硫酸的小平皿內(nèi)〔兩側(cè)浸沒的范圍相等且僅限于趾尖，雙側(cè)后肢是否都發(fā)生反響？〔趾尖皮膚肯定要剝干凈，再用1硫酸溶液浸泡該趾尖〔切不行將其他趾尖浸入④將一1%硫酸紙片貼于左后肢皮膚，觀看引起的反響，用搪瓷杯中清水洗掉紙片及硫酸，擦干皮膚后，將探針插入脊髓腔內(nèi)反復搗毀脊髓，再重復剛剛的試驗。結(jié)果如何？[方法評估]操作簡潔、易于把握，為常規(guī)試驗方法。[應用意義]為了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)某些特征及活動規(guī)律的驗證性試驗統(tǒng)內(nèi)反射中樞的活動規(guī)律及反射弧的完整與反射活動的關(guān)系。[留意事項]1、離斷顱腦部位要適當，太高可能保存局部腦組織而消滅自主活動，太低也會影響反射的引出。2、每次用硫酸溶液或紙片處理后，應快速用搪瓷杯中的清水洗去皮膚上殘存的硫酸，并用紗布擦干，以保護皮膚并防止沖淡硫酸溶液。測定反射時的硫酸濃度應由低到高。3五、思考題1、何謂反射時，反射時與刺激強度之間有何關(guān)系？2試驗二 魚類血液紅細胞和白細胞的計數(shù)試驗工程學時：3** 試驗要求：■必修□選修附件一 魚類紅細胞與白細胞的計數(shù)〔必修〕[目的與原理]含量及其差異。顯微鏡下計數(shù)肯定容積的紅、白細胞數(shù)。再將所得的結(jié)果換算為每立方mm血液中紅、白細胞個數(shù)。[試驗對象]鯉、鯽或草魚。[試劑與器材]顯微鏡，血細胞計數(shù)板，計數(shù)器，魚用注射器1ml或5m棉球，紗布，擦鏡紙，小試管及試管架，移液管1ml及2m，紅、白細胞稀釋液〔或0.850.9的NaCl溶液，75的酒精，蒸餾水，抗凝劑1肝素鈉溶液或10草酸鉀溶液。[試驗步驟]1、生疏血細胞計數(shù)板的構(gòu)造：血細胞計數(shù)板為一長方形厚玻璃板。其中計數(shù)室方格大小的劃分，各種產(chǎn)品略有不同，但根本原理一樣。其中心橫溝的兩邊各有一計數(shù)室，兩計數(shù)〔圖1-5-9個大方格〔圖1-5-。大方格每邊長1.0m。四角的大方格每個又分為16個中方格，這是用以2516個小方格〔用單線，中方格每邊長為0.2m，計數(shù)紅細胞時，數(shù)中心大方格的5個中方格〔即四角和中心的中方格〕內(nèi)的紅細胞數(shù)目〔1-5-。計數(shù)室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1m，因此，放上蓋玻片后，計數(shù)板與蓋玻片之間的距離為0.1mm，此為計數(shù)室的高度。22ml0.85~0.9%NaCl2ml1ml移液管在另一干凈的小試管內(nèi)參加白細胞稀釋液0.38ml，備用。是將魚腹部向上固定在魚解剖臺上，或用紗據(jù)解剖部位確認已刺入心臟，可稍后拔針管，如有血液吸入即可，否則重拔出再刺。圖1-5-1血細胞計數(shù)室構(gòu)造 圖1-5-2血細胞計數(shù)區(qū)尾動脈取血方法〔血紅蛋白〕吸血管吸10μl20μl血液至白細胞稀釋液試管內(nèi)，輕輕擠出血液并反復吸洗2～3次。然后將血液與稀釋液混和均勻，但不行用力振蕩，以免細胞裂開。3、充液：將蓋玻片先蓋在計數(shù)板上，用干凈的吸血管吸取搖勻的稀釋血液，而流入計數(shù)室內(nèi)。但必需留意，如滴入過多時，流出室外凹溝中，易造成蓋玻片浮起，體積不準；過少時，經(jīng)屢次充液，易造成氣泡，所以都應洗去重充液。4、計數(shù)：稀釋血液滴入計數(shù)室后，須靜置2—3分鐘，然后低倍鏡下計數(shù)〔顯微鏡焦距準確，縮小光圈并降低聚光器。使視野較暗。計數(shù)白細胞時，數(shù)四角四個大方格內(nèi)的白細〔共5個中方格〕數(shù)上不數(shù)下，〔圖1-5-計數(shù)白細胞時，如覺察每個大方格白細胞數(shù)相差1015個，表示血細胞分布不均勻。應將計數(shù)板洗凈，重搖勻稀釋血液，再充液計數(shù)。5．計算紅細胞數(shù)目：將5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細胞總數(shù)乘以10，000．即得每立方mm血液中紅細胞總數(shù)。1-5-3血細胞計數(shù)方式〔實心圈表示計數(shù)的紅細胞，空心圈表示不應計數(shù)的紅細胞〕

3=5個中格紅細胞數(shù)×稀釋mm倍數(shù)/5個中格容積〔1〕 稀釋倍數(shù)等于稀釋液2ml除以參加血1μ〔0.01m，為200倍。〔2〕 50.2×0.2×0.1×5=0.02mm3。白細胞數(shù)目：將4個大方格內(nèi)數(shù)得白細胞總數(shù)乘以50，即每立方mm血液的白細胞總數(shù)。計算公式為：白細胞數(shù)/3=4個大方格白細胞數(shù)×稀釋倍數(shù)/4個大格容積mm〔1〕0.38ml+20μL〔0.02ml〕/0.02ml20倍?！?〕計數(shù)室41×1×0.1×4=0.4mm3。[方法評估]自動化分析方法，但該方法由于經(jīng)典、便利、有用，仍較廣泛用于血液檢驗和科研實踐中。[應用意義]紅細胞是血液中數(shù)量最多的有形成分，在正常狀況下幾乎占血容量的1／2，故使血液呈紅色粘稠混懸液。紅細胞數(shù)量正常狀況下保持相對穩(wěn)定的。多數(shù)魚100—300萬個/mm3，400/mm3低者數(shù)十萬/mm3。細胞數(shù)量常因魚種、年齡、外界環(huán)境變化、機體不同生理狀況〔運動狀況、患病、養(yǎng)分狀況等〕而消滅肯定的差異。環(huán)境變化如長期缺氧紅細胞代償性增多。魚類白細胞數(shù)量隨種類、年齡、生理狀況〔產(chǎn)卵、疾病以及一些外界環(huán)境因素影響而變化，此外，魚類白細胞還與飼養(yǎng)條件、養(yǎng)分狀況有關(guān)：飽食消化力旺盛時多，長期饑餓白細胞〔特別是嗜酸性白細胞〕顯著削減。[留意事項]1、各種用具要事前清洗。清洗吸管時依據(jù)蒸餾水〔兩次〕→95%酒精〔兩次〕→乙醚〔兩次〕的方法清洗。計數(shù)室用蒸餾水洗后，再用軟紗布或擦鏡紙吸干。2、采血要求快速、準確，不能凝血，也不能有氣泡，否則棄去重采。3、血吸管用完后必需馬上清洗干凈，以防血液凝固堵塞管口。[思考題]1、綜合試驗所得結(jié)果，與紅、白細胞的正常值相比照，有何變異？為什么？2、為什么機體正常血細胞數(shù)可維持在相對穩(wěn)定的數(shù)量水平？3、試爭論魚類紅細胞的正常值及其應用意義？4、白細胞數(shù)量的變化有何生理意義？5、血細胞計數(shù)室中心的大方各中每一種方格的容積是多少？附 血細胞稀釋液1、白細胞稀釋液冰醋酸〔破壞紅細胞〕 1.5毫升1%龍膽紫〔染白細胞核便于計數(shù)〕 1毫升蒸餾水 加至100毫升2、紅細胞稀釋液NaCl (維持滲透壓) 0.5克Na2SO4 (使溶液比重增加，紅細胞分布不易下沉) 2.5克HgCl〔固定紅細胞外形〕 0.25克蒸餾水 加至100毫升附件二魚類血涂片的制作和白細胞分類計數(shù)〔必修〕[目的與原理]同魚類白細胞分類計數(shù)和血細胞形態(tài)特征、變形率等的觀看。酶和酸性磷酸酶，吞噬力量與中性粒細胞相當或稍弱，能吞噬抗原-抗體復合物，此外，嗜酸性粒細胞具有抗炎作用。嗜堿性粒細胞含有多種化學物質(zhì)，如組織胺、肝素和5-羥色胺等，當抗原-抗體發(fā)生反響時，或機體在嚴寒環(huán)境中時，都能引起嗜堿性粒細胞釋放組織胺和肝素。血液中的單核細胞穿出血管壁進入組織，變成巨噬細胞，可對抗組織內(nèi)的致病物，各種細菌和病毒。淋巴細胞有免疫功能，對異己構(gòu)型的物質(zhì)具有殺滅和消退作用。各種白細胞必需經(jīng)過染色，才易于區(qū)分其類別。常用者為瑞氏〔Wright’s〕染色法和姬姆薩(Giemsa)染色法。[試驗對象] 魚〔淡水魚和海水魚均可。[試劑與器材] 試劑：染色液的配制：1、姬姆薩〔Giemsa〕染液的配制Giemsa粉劑0.8；甘油〔醫(yī)用50m；甲醇50m。將Giemsa37～408～12h，過濾，裝入棕色內(nèi)，密封保存?zhèn)溆?。稀釋液臨用時取Giemsa5ml，加磷酸鹽緩沖液〔pH6.4～6.8〕50ml，即為Giemsa稀釋液。pH6.4~6.8磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀〔無水〕0.3g，磷酸氫二鈉〔無水〕0.2g，加少量蒸餾水溶解，調(diào)整pH6.4~6.81000ml。2、瑞氏〔Wright′s〕染液的配制〔1〕0.1g60ml。(2)配制步驟：①將瑞氏染料粉放人乳缽內(nèi)，加少量甲醇研磨。②將已溶解的染料倒入干凈的玻璃瓶內(nèi)，剩下未溶解的染料再參加少量甲醇進展研磨，如此反復操作，直至全部染料溶解為止。③裝入玻璃瓶內(nèi)密封，在室溫下保存一周即可使用。④穎配制的染料偏堿性，放置后呈酸性，染液儲存時間越久，染色愈好。器材：顯微鏡，香柏油，載玻片，蓋玻片，玻片水平支架，采血針或注射器，計數(shù)器，小滴管，蠟筆，消毒棉球，瑞氏染液，pH6.4~6.8磷酸鹽緩沖液，姬姆薩染液，蒸餾水。[試驗步驟]1、血涂片的制作：取一滴血〔采血方法見試驗49，滴于干凈無油脂的玻片一端。左當與血滴接觸后，血即均勻附在二玻片之間。此后以二玻片約呈30—45度的角度平穩(wěn)地向前推至玻片另一端〔圖1-5-。推時角度要全都，用力應均勻，即推出均勻的血膜〔血膜不行過厚、過薄。將制好的血涂片晾干，不行加熱。2、血涂片的染色步驟：用蠟筆在血膜兩端各劃一道線，以免染料外溢，置涂片于水平的支架上。用小滴管將瑞氏染液滴于涂片上，并蓋滿劃出的涂片局部固定約半分鐘。用小滴管再加1.5倍緩沖液或姬姆薩〔Glemsa〕染液，輕輕搖動，并輕吹液體使5—10分鐘。用蒸餾水沖洗〔如自來水的pH7.2左右時亦可代用。沖洗血膜時應將玻璃片持平，沖洗后斜置血涂片于空氣中枯燥?；蛳扔脼V紙吸取水分快速枯燥，即可鏡檢。3、白細胞分類計數(shù)：先用低倍鏡檢查涂片及染色是否均勻。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均勻處〔一般在體尾交界處，在油鏡下由此處開頭按其形態(tài)特征進展分類計數(shù)，計數(shù)100個白細胞，記錄各種白細胞所占的百分數(shù)。例如：嗜中性白細胞分數(shù)〔%〕=計數(shù)嗜中性白細胞個數(shù)/計數(shù)總白細胞個數(shù)×100%。1-5-4血涂片制備示意圖鮮紅至桔紅色；嗜堿性粒細胞顆粒呈深藍紫色；淋巴細胞核呈深藍紫色，胞質(zhì)呈天藍色；單核細胞核呈淺紫色，胞質(zhì)呈灰藍色。[方法評估]顯微鏡法白細胞分類是經(jīng)典、傳統(tǒng)的血細胞分類法，目前還無任何儀器可以完全取代。胞分類主要是從細胞的體積大小、細胞核形、細胞化學染色等方面進展檢測，檢測速度快，確認病理轉(zhuǎn)變還必需以顯微鏡檢查為準。[應用意義]在不同的生理狀態(tài)下，不同種類白細胞數(shù)目波動較大。如運動、嚴寒、消化期、生殖期等，此外，在機體失血、劇痛、急性炎癥、慢性炎癥等病理狀態(tài)下，白細胞也增多。例如，急性感染、急性中毒、嚴峻組織損傷、惡性腫瘤等中性粒細胞增多；某些病毒、細菌感染、某些慢性感染時，淋巴細胞數(shù)量增多。[留意事項]1、所用玻片必需干凈，無油污。2、如染色太淺，可依據(jù)原來步驟重染；染色太深或有沉淀物則可用甲醇脫色后重染。3、如白細胞核為天藍色則染色時間過短。如紅細胞呈紫紅色，表示染色時間過長。4、染色時切勿使染液枯槁，否則發(fā)生不易去掉的沉淀。5、沖洗時不行先傾倒染色，應先輕輕搖動玻片，緩慢加水使沉渣泛起，然后再用水沖洗。6、水沖洗時間不宜過長，否則會脫色。[思考題]1、試述瑞氏〔Wright’s〕染色法區(qū)分各種白細胞的依據(jù)？2、怎樣才能制備一個形態(tài)清楚的血涂片？3、試驗所得結(jié)果與正常值相比照，有何變異？為什么？試驗三 溫度對魚類呼吸代謝的影響試驗工程學時：4** 試驗要求：■必修□選修一、試驗目的及要求：被測動物的代謝率〔或代謝強度。把握影響魚類呼吸代謝的主要影響因素。二、試驗根本原理：耗氧率常常被直接用來表示機體的代謝強度率也是間接測定能量代謝的重要指標之一。溫度和pH是影響耗氧率的重要因素。本實驗通過測定溫度和pH對魚類耗氧量的影響，從而可以了解溫度和pH對魚體代謝活動式，二是流水式。本試驗承受的是靜水密閉測定法。三、主要儀器設備及試驗耗材：試劑：1、硫酸錳：稱取52gMnSO·5H

O〔37gMnSO·H

90毫升蒸餾水溶解，然后稀釋4 2 4 2100ml。靜置數(shù)日，取清液使用。2、堿性碘化鉀：50gNaOH(70KOH)15g固體KI5035ml純水中。然100ml3、濃H2SO41.84的試劑。4、HCl〔1：1〕5、0.05NNa2S2O3：稱取2.5gNa2S2O3·5H2O,500ml，參加NaOH0.2g使溶液呈堿性，減慢Na2S2O3分解，貯存于棕色瓶中，濃度要標定。6、0.51g300ml燒杯中，用少量純水調(diào)成懸濁液。沖入剛煮沸200ml純水，并再煮沸即可。材料：鯽、羅非魚或其它水生動物。器材：水產(chǎn)動物呼吸試驗裝置；酸式滴定管；恒溫水浴鍋；采樣瓶〔或磨口〕30ml假設干；三角錐瓶100ml假設干；微量滴定管；乳膠管；滴定架；蝴蝶夾；羅紋水止；移液管；吸耳球等。四、試驗內(nèi)容或步驟：1、試驗設置不同的試驗溫度，如金魚〔鯽魚，可設置102℃和3℃三個試驗溫度。高于室溫則需要加熱，并使水溫保持相對穩(wěn)定。2、試驗設置不同的pH，然后測定不同pH3〔見圖1或2裝時，首先將呼吸室布滿水，放入試驗動物〔試驗動物放入前需稱量，使測試動物穩(wěn)定半小時方可開頭試驗。4、測定試驗開頭時水中溶解氧〔初溶氧，及試驗完畢時水中溶解氧〔末溶氧。5、溶氧測定方法：用30ml細口瓶〔具塞磨口瓶〕作為水樣瓶，用虹吸法取樣一滿瓶水樣后，馬上加硫酸錳3滴，堿性碘化鉀3滴，蓋上瓶蓋〔瓶中不行有氣泡，上下?lián)u動約1分鐘。靜置，待沉淀下降到中部后，加濃硫酸5滴，蓋上蓋再搖勻。取酸化后水樣15ml于錐0.050N0.55～6滴，再連續(xù)滴定到藍色剛剛消逝。記錄滴定消耗體積V〔毫升。圖圖1靜水密閉法裝置2流水密閉法裝置6、耗氧率計算：NV溶解氧〔mg/l〕=V樣

×1000(初溶氧－末溶氧)耗氧率〔Og/kg/h〕=2

〔動物體重×試驗時間〕

×呼吸室體積五、思考題1、承受靜水式和流水式方法進展耗氧率測定各有何優(yōu)缺點？2、為何用靜水式測定耗氧率要在一晝夜實行3-4個時間段測定，并取其平均值，為什么？3、溫度和pH影響魚類呼吸代謝？試驗四 亞硝酸鹽對魚類血紅蛋白的影響試驗工程學時：3** 試驗要求：■必修□選修附件一 魚類血紅蛋白含量的測定〔必修〕方法一、酸化血紅蛋白稀釋測定法〔改進沙利氏法〕[目的與原理]把握測定魚類血紅蛋白含量的原理和方法這就可以與標準色相比，從而測出其含量。通常以每100ml血液中含血紅蛋白克數(shù)來表示，7-8g。[試驗對象]鯉、鯽或草魚。試驗設置四個組，即空白比照組和三個低中高濃度的亞硝酸鹽試驗組。[試劑與器材]75球，0.1mol/L鹽酸，蒸餾水，滴管，紗布，抗凝劑〔1%肝素鈉溶液或10%草酸鉀溶液。[試驗步驟]1吸血管為一厚壁毛細玻璃管，其上有10μl、20μl的刻度，尾端連有橡皮頭，供吸血用。比色計的兩側(cè)，裝有標準濃度的高鐵血紅蛋白溶液，也有用比色玻璃柱〔或片〕來代替的。比色管可插在比色計中，與兩側(cè)的標準比色柱進展比色。比色管的兩側(cè)通常刻有兩行刻度。一行為血紅蛋白確實定值，以g計數(shù)〔100毫升血液中所含血紅蛋白的克數(shù)〕來表示，刻度范圍為2～22%〔即相當于正常平均值的百分數(shù)來表示，10%～160%。目前測定常用確定值來表示。2、用蒸餾水將比色管洗凈，吸血管則依次用蒸餾水，95%酒精和乙醚洗凈枯燥備用。3、用滴管加0.1mol/L4—6滴到刻度比色管內(nèi)，約加到管下端刻度“2”或“10%”處為止。4、采血：采血方法見前面的試驗，用吸血管吸血至20μl刻度〔要準確。用綿球認真將管尖端外面的血拭去。5、將吸血管中血液輕輕地滴到比色管中鹽酸底部，并用上層較清的鹽酸溶液反復清洗吸血管3次。使吸血管內(nèi)的血液完全洗凈。切勿帶入空氣，以至形成氣泡影響比色。吸血管15分鐘使管內(nèi)的鹽酸和血紅蛋白作用完全，形成棕色的高鐵血紅蛋白。6、把比色管插入標準比色架兩色柱中心的空格中，使無刻度的兩側(cè)面位于空格的前前方，便于透光和比色。7、用吸管將蒸餾水逐滴地參加比色管內(nèi)，每加一滴都應充分混勻并觀看比色管內(nèi)的顏〔讀數(shù)應以溶液凹面最低點相全都的刻度為佳。即為每100ml血液中所含血紅蛋白的克數(shù)〔用g/100ml表示。8、試驗完畢應將吸血管和比色管洗凈，放回盒內(nèi)。[方法評估]儀器的準確度有關(guān)。[應用意義]血紅蛋白含量與年齡、性別、性周期、養(yǎng)分狀況、活動狀況、季節(jié)變化等有關(guān)，養(yǎng)分不良或長期饑餓可引起血紅蛋白量顯著降低。[留意事項]1、用吸血管吸血過程應認真、認真，準確把握住吸入的血液量是初學者的一個難點，也是試驗結(jié)果準確與否的一個關(guān)鍵。2、血紅蛋白吸管很簡潔被損壞，應妥當疼惜。管內(nèi)有凝血塊時不行用金屬絲疏通，可45%→95%酒精→乙醚的挨次清洗，最終吹干吸管。310分鐘以上方可稀釋比色，否則血紅蛋白不能充分轉(zhuǎn)變成高鐵血紅蛋白。最好在30分鐘內(nèi)比色完畢。4、滴加蒸餾水時，宜少量屢次，逐滴參加后混勻比色，以免稀釋過度，得不到準確結(jié)果。5、比色應在自然光線下進展，避開在陰暗處或有色燈光下比色，并將比色管刻度轉(zhuǎn)向兩側(cè)，以免影響比色效果。試驗五設計性試驗水體污染對魚類血液和腦組織膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的影響試驗工程學時：8** 試驗要求：■必修□選修〔一〕試驗目的及要求：把握膽堿酯酶活力測定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測定魚類血液和腦組織中膽堿酯酶活力。對魚類的影響?！捕持饕獌x器設備分光光度計，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。附件 魚腦組織〔或血液〕膽堿酯酶活力的測定[目的與原理]把握膽堿酯酶活力測定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測定魚腦膽堿酯酶活力。成乙酰膽堿的膽堿乙?；负痛呋阴Ｄ憠A水解的膽堿酯酶。在肯定溫度、pH條件下，酶的反響速率與酶的量、反響速率，以及作用時間成近似的線性未經(jīng)膽堿酯酶水解的乙酰膽堿與羥氨作用生成乙酰羥氨，乙酰羥氨酸性條件下與三氯化鐵(FeCl)3試劑：1、磷酸鹽緩沖液〔pH7.2〕23.752克磷酸氫二鈉〔NaHPO·2HO〕1000ml。2 4 218.156g磷酸二氫鉀(KHPO2

)1000ml。4取〔1〕72ml和(2)28ml，混合即成。20.0905g0.001M〔pH4.5〕10ml，0.04mol貯備液，置冰箱內(nèi)保存〔2星期0.04M1份，加90.004mol使用液。31M13.9200ml300C時，應置于冰箱內(nèi)。4、14％NaOH 稱取14gNaOH，加蒸餾水溶解至100ml。5、1010g10N100ml。6、1010.0g，加0.83ml10ml蒸餾水，待全部100ml。7、0.001mol醋酸緩沖液〔pH4.5〕稱取醋酸鈉〔NaAC·3H2O〕13.6g，加蒸餾水溶解后再稀釋至100ml即成0.1mol0.58ml加水至100ml即配成0.1mol57ml、43ml100倍即成。820分鐘配制，將1mol14％NaOH液等體積混合即成。材料：魚腦組織〔或魚血液〕器材：分光光度計，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。[試驗步驟]1、取穎或﹣20℃冷凍魚，從魚頭反面剖骨，認真取出完整的魚腦，用濾紙輕輕吸去外表體液，剪碎、稱重，在冰浴下加1毫升磷酸緩沖液勻漿，再用磷酸緩沖液稀釋成每ml2mg腦組織液。2、按下表參加試劑試劑 試 管樣品管比照管空白管標準管1.01.0－1.0－－2.01.01.0樣品管比照管空白管標準管1.01.0－1.0－－2.01.01.0－－－3〔202530℃〕204.0ml。1ml魚腦組織液。4、加102.0ml，充分搖勻，然后每管再加102.0毫升，充分搖勻。5、各管試液用濾紙過濾，以除蛋白質(zhì)。62cm525nm0測量其余各管的光密度。7、計算4 2 〔比照管光密度－樣品管光密度〕4 2 腦膽堿酯酶活力＝ ×÷×標準管光密度=〔比照管光密度－樣品管光密度〕×6標準管光密度膽堿酯酶活力以每mgμgμg/mg/mi。[方法評估]活力受基質(zhì)濃度的影響，本法的消耗基質(zhì)，應過量參加30～70％，在此范圍外易產(chǎn)生誤差。此方法在國內(nèi)應用較普遍。[應用意義]時把握水體污染對魚類等水生動物的影響。[留意事項]1、測定膽堿酯酶活力時溫度、反響時間應嚴格掌握。2、由于魚腦膽堿酯酶的活力除受有機污染物影響外，水體中多種因素也對該酶有肯定影響，正常魚腦膽堿酯酶活力有30%的波動。因此測定時肯定要有足夠的樣品數(shù)量，以保證明驗結(jié)果的準確性。[思考題]1、試述膽堿酯酶的作用原理？2、取腦的酶組織液時為什么要用冰??？3、當水體受有機磷污染時，魚腦膽堿酯酶活力有何變化？為什么？試驗六 幾種激素對魚類血糖調(diào)整的分析試驗工程學時：5** 試驗要求：■必修□選修一、試驗目的及要求：把握鄰甲苯胺法測定血糖的原理和操作技術(shù)把握魚類血糖調(diào)整的生理機制。二、試驗根本原理：魚類的血糖受激素的調(diào)整而處于動態(tài)平衡之中。參與調(diào)整或影響血糖的激素很多，如胰島素、胰高血糖素、腎上腺素以及甲狀腺、垂體、腎上腺皮質(zhì)分泌的激素。測定血糖的方法很多，最準確的方法是葡萄糖氧化酶法。但是限于條件，本試驗承受鄰〔或藍綠色〕應如下：三、主要儀器設備及試驗耗材：試劑：1、鄰甲苯胺試劑：稱取硫脲〔A.R.〕2.5g，溶于冰醋酸〔A.R.〕750ml中。將此溶液轉(zhuǎn)1L150ml，2.4100ml,1L刻度，置棕色2個月。2、葡萄糖貯存標準液10mg/m：將少量無水葡萄糖A.R或C.P〕內(nèi)一夜。準確稱取此葡萄糖1.000g，以飽和苯甲酸溶液溶解并轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶內(nèi)，再100ml刻度。置冰箱中可長期保存。3、葡萄糖標準液1.5mg/m：在100ml容量瓶內(nèi)，參加葡萄糖貯存標準液15.0m100ml刻度，混和。4、0.1g/L0.01g100mL。5、胰島素：用魚用生理鹽水配制成2.10-mol/20IU/m。6、糖皮質(zhì)激