生物性檢材的個人識別

生物性檢材的個人識別第一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第十三章生物性檢材的個人識別編者張霽（四川大學）第二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第一節(jié)概述第三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日什么是個人識別？如何進行個人識別？什么是遺傳分型？什么是遺傳標記？如何進行DNA分型？如何解釋DNA證據(jù)？個人識別的意義？第四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個人識別分析生物性檢材以揭示個體身份的鑒定工作

現(xiàn)場遺留物兇器各種生物檢材嫌疑人/受害者遺傳分型

結果分析、比對遺傳分型第五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日什么是遺傳分型?

所謂分型，是指通過一定的技術手段確定個體特定遺傳標記的表型或基因型。第六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日法醫(yī)遺傳標記分類血型，,廣義，血液的遺傳差異血型，狹義，血液細胞由遺傳決定的抗原差異紅細胞型（ABO）白細胞型（HLA）血小板型血液蛋白質遺傳多態(tài)性酶型紅細胞酶型（PGM1）血清酶型血清型同種異型（Gm）血清蛋白電泳多態(tài)性（GC）DNA遺傳標記DNA長度多態(tài)性(STR)DNA序列多態(tài)性(mtDNA)第七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日DNA分型DNA遺傳標記有足夠的多態(tài)性，理論上可以通過DNA分型，而不必通過測定全基因組序列來進行個人識別DNA分型能從任何含有細胞的體液或組織中得到相同的結果能夠對陳舊斑痕極微量的檢材分型分析結果能構成計算機數(shù)據(jù)庫快速分型的能力，可以盡快排除無辜的犯罪嫌疑人，使鑒定工作不至于延誤案件調查。第八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日生物性檢材的特點環(huán)境、保存條件所產(chǎn)生的影響和某些不確定性！第九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日分析生物性檢材的策略觀察形態(tài)學特征進行化學、免疫學、生物化學與分子生物學實驗檢測由簡單到復雜，逐步排除，逐步縮小范圍的實驗分析策略減少不確定性，實現(xiàn)個人識別。第十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材的發(fā)現(xiàn)、采集、包裝和送檢要點提示：提取物證檢材的基本原則如何保存液體或濕潤的生物檢材為什么檢材不能用福爾馬林固定塑料袋裝生物檢材有何不妥物證檢材提取、包裝、送檢主要注意事項第十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材的發(fā)現(xiàn)、采集、包裝和送檢

—檢材的發(fā)現(xiàn)

散在分布;對不明顯的生物性檢材，需要針對生物性檢材各自不同的特點和理化性質，利用不同的理化手段，努力去尋找發(fā)現(xiàn)。例如：血痕：魯米諾噴霧—熒光精斑：紫外線照射—銀白帶暗紫暈熒光第十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材的發(fā)現(xiàn)、采集、包裝和送檢

—檢材的收集確保證據(jù)鏈的有效性：

翻動現(xiàn)場物件或提取生物性檢材前，先拍照、繪圖、測量和記錄其原始狀態(tài)，切勿破壞原有生物性檢材或添加無關痕跡或物品。提取生物性檢材的方法根據(jù)物品種類而異。

可參照《中華人民共和國公共安全行業(yè)標準——法醫(yī)學物證檢材的提取、保存與送檢》GA/T169—1997。第十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材的發(fā)現(xiàn)、采集、包裝和送檢

—檢材的包裝和送檢盡快送檢；不能用福爾馬林固定；福爾馬林會導致DNA降解、DNA分子與其它生物分子之間的交聯(lián)，影響DNA分析。低溫保存或晾干保存；紙袋包裝。第十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日生物性檢材的檢驗程序和要求為確保證據(jù)鏈的有效性及合法性，從檢材受理到最終的檢驗報告，都需要嚴格遵循法醫(yī)生物性檢材檢驗的一般程序進行。第十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第二節(jié)

血痕檢驗第十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日要點提示：血痕檢驗的目的血痕檢驗的一般程序血痕預實驗的目的、方法和意義血痕確證實驗的目的、方法和意義種屬鑒定的方法和原理血痕的個人識別第十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕檢驗的目的送檢檢材是否是血；是人血還是動物血；測定遺傳標記進行個人識別；其它檢驗，如出血量、出血時間、及出血部位推斷等。第十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕檢驗的一般程序肉眼檢查；預試驗；確證試驗；種屬鑒定；遺傳標記測定及性別鑒定；出血部位、出血量、血痕陳舊度等推斷。第十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的肉眼檢查血痕的數(shù)量、分布、位置、大小、形狀、范圍、色澤、它們的相互關系以及它們與現(xiàn)場其它物品的相互關系。作用：案件性質分析；現(xiàn)場重建等第二十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的預實驗目的：從大量的可疑血痕中篩除不是血痕的檢材?；驹恚貉t蛋白正鐵血紅素過氧化氫新生態(tài)氧聯(lián)苯胺等有色反應第二十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日預實驗的意義具有過氧化物酶活性的物質廣泛存在，如膿液、鼻涕、排泄物、植物汁等。預實驗陽性提示可能是血痕；靈敏度高。預實驗陰性可以排除是血痕。第二十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕預實驗-聯(lián)苯胺試驗血痕過氧化氫新生態(tài)氧聯(lián)苯胺無色聯(lián)苯胺藍藍色第二十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的確證實驗目的：證明檢材是血痕。原理：血紅蛋白或其衍生物檢測。血紅蛋白正鐵血紅素變性珠蛋白血紅素含氮化合物（如吡啶）NaOH血色原結晶高山氏試劑: 10%NaOH 3ml 30%葡萄糖 10ml

吡啶 3ml第二十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的種屬鑒定目的：確定血痕是否是人血。意義：動物血中含有與人血遺傳標記相似的物質，如A及B樣抗原。存在誤將動物血判為人血而測定遺傳標記。原理：種屬特異性生物分子檢測。種屬特異性蛋白抗體——人血紅蛋白抗體，人血清蛋白抗體；種屬特異性核酸——Alu序列。方法：免疫學、生物化學及分子生物學方法。第二十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日種屬鑒定—免疫學方法抗人血紅蛋白血清抗人血清蛋白血清環(huán)狀沉淀反應：可溶性抗原與相應抗體相遇且比例合適時，形成抗原抗體復合物，在抗原與抗血清的界面出現(xiàn)可見的白色沉淀環(huán)。酶聯(lián)免疫吸附試驗：辣根過氧化物酶標記抗人IgG單克隆抗體，抗原抗體反應后，通過酶促底物顯色。第二十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日種屬鑒定—分子生物學方法Alu序列人的Alu序列有別于其它哺乳動物人的Alu序列引物：

Alu9.1 5'-GGCACTTTGGGAGGCCAAGG Alu9.2 5'-TACAAGCTTGTGCCACCATGCCAAC第二十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日種屬鑒定—分子生物學方法PCR體系：50μl20ngDNA10×PCR緩沖液5μl0.2μmol/ml引物200μmol/LdNTP1.5mmol/LMgCl20.45%Triton-1001UTaq酶2%瓊脂糖電泳EB染色PCR產(chǎn)物130bpPCR循環(huán)參數(shù)：94℃變性5min94℃30s55℃30s 循環(huán)30次72℃1min72℃保溫10min。第二十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的個人識別基因表達產(chǎn)物水平的遺傳標記測定 紅細胞ABO血型 紅細胞酶型 血清型DNA多態(tài)性分析性別鑒定第二十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的ABO血型檢測特點：紅細胞膜上ABO血型抗原密度高，抗原性強，僅需少量檢材就能分型；ABO血型抗原決定簇為糖鏈，對環(huán)境中理化因數(shù)的影響有較強的抵抗力，即使陳舊血痕也能分型；ABO血型抗原也廣泛分布在人體各種組織器官中，為結果比對提供了廣泛的檢材來源。第三十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的ABO血型檢測

—吸收實驗原理：有A、B抗原時，能與相應的抗-A、抗-B抗體發(fā)生特異性的抗原抗體反應，使抗血清中的游離抗體減少或消失，不再與相應的指示紅細胞發(fā)生凝集反應或凝集反應強度明顯減弱。若血痕中無A、B抗原，則不能抑制抗血清中的相應抗體，抗體與指示紅細胞的凝集反應強度不改變。第三十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日吸收實驗結果判讀抗血清稀釋倍數(shù) 抗-A+A紅細胞抗-B+B紅細胞抗-H+O紅細胞檢材與對照248163264248163264248163264血型判定未吸收的抗血清+++++-+++++-++++--效價明確已知A血痕已知B血痕------+++++-+++++-------+-----+-----對照正確

檢材1無血部位有血部位+++++-+++++-+++++-+++++-++++--------O型

檢材2無血部位有血部位+++++-------+++++-+++++-++++--+-----A型

檢材3無血部位有血部位+++++-+++++-+++++-------++++--+-----B型

檢材4無血部位有血部位+++++-------+++++-------++++--+-----AB型

第三十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的DNA多態(tài)性分析DNA提?。篊helex-100法等PCR-STR檢測第三十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日血痕的性別鑒定X、Y染色質鑒別性激素檢測H－Y抗原檢測DNA性別鑒定—人類牙釉質基因（Amelogenin）： Amel-X（Xp22） Amel-Y（Y11p22.2）

人類Amel-X與Amel-Y的內含子長度不同。針對Amel-X或Amel-Y堿基缺失部位設計引物，可以用PCR擴增X、Y特異性片段。第三十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日人類牙釉質基因PCR擴增目標PCR引物PCR產(chǎn)物大?。╞p）X、Y染色體同源的Amelogenin基因第一內含子,該區(qū)X染色體有6bp缺失5'-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG-3'5'-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3'X=106Y=112問題：用PCR僅僅分析Y或X一種染色體作血痕性別鑒定是危險的。因為缺乏內對照，擴增失敗時可能會誤將男性判為女性，或誤將女性判為男性。如：男性不育者常見Y-染色體微缺失，導致Amel-Y片段丟失。男性：Amel-X、Amel-Y女性：Amel-XAmel-X/Y引物第三十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第三節(jié)

精液斑檢驗第三十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日要點提示：精液斑檢驗的意義及程序精液斑預試驗確證試驗的原理、方法和意義DNA多態(tài)性檢測的價值、條件與結果評價第三十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精液斑檢驗要解決的問題可疑斑痕是否為精斑： 預實驗、確證實驗是人精斑還是動物精斑： 種屬試驗是何人的精斑 個人識別第三十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑檢驗的一般過程肉眼檢查預實驗確證實驗種屬鑒定個人識別確定精斑部位：紫外燈下呈銀白色熒光提示斑痕可能是精斑：酸性磷酸酶---磷酸苯二鈉試驗確證精斑：精子檢出；p30人精斑？p30第三十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑檢驗的肉眼檢查深色布類上的濃厚精斑，呈灰白色漿糊狀斑跡，較稀薄的精斑則不易察見；淺色布類上的精斑多呈黃白色地圖狀，邊緣色深。放大鏡檢查，可在布纖維表面或中間見黃白色小鱗片。載體上精斑手觸有硬感，新鮮精斑有特殊臭味。第四十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日紫外線下發(fā)銀白色熒光（黃素），邊緣呈紫藍色；紫外線檢查為非特異性檢查手段！第四十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑預實驗陽性結果提示可能是精斑，不能確證精斑！酸性磷酸酶檢出—磷酸苯二鈉試驗磷酸苯二鈉酸性磷酸酶萘酚安替比林鐵氰化鉀紅色醌類化合物第四十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑確證實驗精子檢出：復染法—酸性品紅亞甲蘭染色頭部呈紅色，尾部呈蘭色免疫學試驗:p30檢出—前列腺特異性抗原具有高度的種屬特異性和器官特異性；保存時間長第四十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑的個人識別—ABO血型檢測中和試驗：精斑中的水溶性A、B、H物質與相應的抗體結合，使抗體與指示紅細胞的凝集反應能力降低或完全消失。反應系統(tǒng)中加指示紅細胞后，若紅細胞不凝為中和試驗陽性反應，證明精斑中含有與抗體相對應的抗原；紅細胞凝集為陰性反應，證明精斑中不含與抗體相對應的抗原。第四十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑指示精斑浸出液稀釋倍數(shù)編號抗血清紅細胞2481632641282565121024判型1>HO----+2+2+2+2+2+A分泌型

>AA--------2+2+

>BB2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+

2>HO----+2+2+2+2+2+B分泌型

>AA2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+

>BB--------2+2+

3>HO----+2+2+2+2+2+AB分泌型

>AA--------2+2+

>BB--------2+2+

4>HO------+2+2+2+O分泌型

>AA2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+

>BB2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+

抗血清的效價一定要標化（2或4為好）；精斑檢材與無精斑檢材的抑制凝集相差3級以上，證明精斑中含有相應的血型抗原第四十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日精斑的DNA檢測精子細胞核是富含二硫基的交聯(lián)蛋白組成的網(wǎng)狀結構，能抵抗各種類型的去污劑作用，對外源性蛋白酶水解也有相當強的抵抗作用，必須在DTT等試劑的作用下，使二硫基斷裂，將-S-S-還原成-SH，核蛋白才能被SDS、蛋白酶K分解，釋放出DNA。第四十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第四節(jié)

其他生物性斑跡分析第四十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材文獻唾液（含有核細胞）Sweetetal.(1997)尿液Beneckeetal.(1996)排泄物Hopwoodetal.(1996)指甲屑Wiegandetal.(1993)煙蒂Hochmeisteretal.(1991)郵票Hopkinsetal.(1994)信封封口WordandGregory(1997)頭皮屑HerberandHerold(1998)指印vanOorschotandJones(1997)細胞成分——DNA分析第四十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日混合斑分析Y-STR基因座在混合斑中精液成分的個人識別中的應用優(yōu)勢：只有男性成分可以被擴增和檢測！第四十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第五節(jié)

毛發(fā)檢驗第五十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)檢驗要解決的問題有：毛發(fā)還是纖維？人毛？動物毛？來自人體何部位？自然脫落？暴力拔脫？推斷致傷物？毛發(fā)的個人識別第五十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)的結構毛發(fā)是皮膚的一種特殊的附屬器，是皮膚毛囊細胞產(chǎn)生的一種富有彈性角質體。毛尖——是毛干的游離末端，毛干向毛尖逐漸變細而尖毛干——是裸露于皮膚外部的部分，由角化上皮細胞（無細胞核）組成，中心向外可以分為：毛小皮：人——毛小皮花紋通常為細小波浪狀；毛皮質：人——皮質發(fā)達；毛髓質：人——髓質不發(fā)達、而且髓質不連續(xù)。毛根——是埋在皮膚內的部分（含有核細胞）毛球：毛根起始端膨大和球狀的部分；毛囊：包裹毛根的一管狀結構，內層為上皮根鞘、外層為纖維組織鞘；毛乳頭：毛球和毛囊末端膨大，底面內凹，含毛細血管和神經(jīng)的結締組織。第五十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)與其他纖維的鑒別毛發(fā)的主要成分為角蛋白中的硬角蛋白，理化性質穩(wěn)定。毛發(fā)的角蛋白中含有3％-5％的硫，燃燒時發(fā)出特殊的臭味。肉眼觀察毛發(fā)與纖維易于區(qū)別。有困難時可用顯微鏡檢查，只有毛發(fā)才有毛小皮、皮質、髓質三層特有的結構。第五十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)與其他纖維的鑒別捻搓試驗燃燒試驗植物粘膠：連續(xù)燃燒，有燒焦氣，灰少而飛揚；毛發(fā)：難于燃燒，有特殊的焦氣，灰球不飛揚；合成纖維：遇火收縮；礦物纖維：不被燃燒。第五十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日人毛與動物毛的鑒別毛的結構人毛獸毛毛小皮鱗片小，薄紋理呈波浪狀，毛小皮游離緣呈細鋸齒狀鱗片大而厚，紋理粗大，毛小皮游離緣呈粗鋸齒狀皮質寬，占毛干直徑2/3左右，色素顆粒多分布在皮質邊緣，較均勻窄，占毛干直徑1/2—1/3，色素顆粒多，大小不一，分布不均勻髓質窄，不連續(xù)（個別部位的毛發(fā)可出現(xiàn)不連續(xù)狀）占毛干直徑1/4—1/5寬，連續(xù)，多數(shù)獸類有特殊的花紋，占毛干直徑1/3以上外表顏色一般為一個顏色常見一根毛發(fā)上有幾種顏色第五十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日人毛部位的確定可以根據(jù)毛發(fā)的長短、粗細、色澤、形狀、卷縮方向、末端特征、橫斷面的形狀、髓質的位置以及表面附著物等特點，鑒別不同部位人毛發(fā)。第五十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)的脫落和損傷自然脫落：毛球呈棒狀，下方閉鎖，無毛囊附著，5～10%的亞硝基鐵氰化鈉溶液染色無顏色反應暴力拔脫：毛球濕潤，毛根常附有毛囊的殘片，下端開放或呈溝狀彎曲，染色成紅色第五十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)的鈍器傷：鈍器打擊時，毛發(fā)的損傷程度與致傷工具的質量作用力的大小和毛發(fā)依附物體的性質有關。鈍器作用部位變寬扁平，皮質纖維分裂，部分斷裂或完全斷裂。毛發(fā)的銳器傷：銳器所致的毛發(fā)損傷，斷面的形態(tài)特征與銳器刀口的鋒利程度有關。鋒利銳器所致毛發(fā)斷面平滑整齊，毛干不碎裂，皮質纖維不分裂。第五十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日毛發(fā)的個人識別形態(tài)學觀察微量元素含量毛發(fā)的ABO血型測定毛發(fā)的DNA分析帶毛囊的毛發(fā)—STR毛干的mtDNA分析第五十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日mtDNA分析WhatismtDNAtypingmeettheneedsofforensicidentificationwithmtDNAtypingtakecautiontomtDNAtyping第六十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日?每個細胞中線粒體基因組有多個拷貝?母系遺傳mtDNA遺傳標記第六十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日線粒體DNA的結構第六十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日核DNA（nuclearDNA）線粒體DNA(mtDNA)基因組大小3.2×109bp16569bp細胞內拷貝數(shù)2（父母各提供一個等位基因）﹥1000細胞內DNA百分比99.75%0.25%結構線性；包裹在染色體內環(huán)狀遺傳來源父親和母親母親染色體配對雙倍型單倍型生殖重組是否復制修復是否特異性個體特異性（同卵雙胞胎除外）沒有個體特異性（同一母系親屬相同）突變率低至少是核DNA的5倍～10倍參考序列2001年人類基因組計劃發(fā)表1981年Anderson等發(fā)表第六十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日參考序列1981年在英國劍橋FrederickSanger實驗室首次對人類mtDNA序列進行了全序列測定。這個最初測定的序列作為比對的參考序列，通常被稱為Anderson序列或劍橋參考序列。1999年，Andrewsetal對劍橋參考序列所用的胎盤樣本進行了重新測序。更正了最初公布序列中的11個堿基。第六十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日劍橋參考序列和修正劍橋序列參考序列比較堿基位置線粒體基因組區(qū)域原始劍橋參考序列修正劍橋參考序列備注3106～310716SrRNACCC錯誤3423ND1GT錯誤4985ND2GA錯誤9559COⅢGC錯誤11335ND4TC錯誤13702ND5GC錯誤14199ND6GT錯誤14272ND6GC錯誤14365ND6GC錯誤14368ND6GC錯誤14766CytbTC錯誤（插入Hela序列）第六十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日正確的序列在nt3106～nt3107只有一個C，整個線粒體基因組是16568bp而不是最初報道的16569bp。為了保持歷史數(shù)據(jù)，在nt3107由一個缺失來占據(jù)一個位置。法醫(yī)學中最常應用的兩個高變區(qū)的序列沒有差異，它涵蓋了nt16024～nt16365和nt73～nt340第六十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日參考序列Andersonetal,1981.Anderson序列（GenBank：M63933）也稱為劍橋參考序列（CRS）。過去依據(jù)與劍橋參考序列L鏈比較的差異報告結果Andrewsetal,1999.修正的劍橋參考序列（rCRS）作為序列比對時的參照標準為16568bp,而不是傳統(tǒng)所接受的16569bpIngmanetal,2000.NCBI人類基因組庫用線粒體基因組參考序列（RefSeqmtGenome），GenBank中為16571bp第六十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日?每個細胞中線粒體基因組有多個拷貝?母系遺傳?單倍型傳遞mtDNA遺傳標記的特點第六十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日

mtDNA母系遺傳模式第六十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日mtDNA分型的法醫(yī)學意義在檢測個體間的差異上，線粒體DNA不如其他方法有用。但mtDNA對陳舊骨、牙、嚴重腐敗或焚燒的殘骸以及單根毛干的檢測成功率比核DNA高。與核DNA相比，每個細胞中含有多個mtDNA拷貝。mtDNA的大拷貝數(shù)提高了從微量或嚴重降解的檢材中得到足量DNA的成功率。在僅能得到毛發(fā)、骨、牙等組織的案件中，能提取得到的DNA量極少，這種情況下從mtDNA中得到分型結果的可能性遠遠高于核DNA遺傳標記。除非發(fā)生突變，同一母系中的個體具有相同的mtDNA序列。通常mtDNA在很多代當中的傳遞都是穩(wěn)定的，通過mtDNA檢測可以估計幾代人間的親緣關系。第七十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日法醫(yī)mtDNA分型個體間mtDNA差異最大的區(qū)域在D環(huán)區(qū)，包括高變區(qū)I（HVI，342bp）和高變區(qū)II（HVII,268bp）。無血緣關系個體中mtDNA的HVI和HVII區(qū)域變化率大約在1-3%，即每100個堿基就有1-3個不同，所檢測的610個堿基有7-14個堿基不同。第七十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日mtDNA頻率估計

在包含N個mtDNA分型的數(shù)據(jù)庫內，觀察到一定次數(shù)（X）的某一mtDNA分型，其頻率（p）用以下公式計算：

p=X/N如果在數(shù)據(jù)庫內未觀察到分型，可信區(qū)間的上限為：1-α1/Nα代表可信系數(shù)（0.05，95％的可信區(qū)間），N代表數(shù)據(jù)庫內的個體數(shù)例如,在1148個非裔美洲人分型中，mtDNA型16129A、263G、309d、315.1C觀察到兩次，調查mtDNA群體數(shù)據(jù)庫時在686個西班牙人分型中未觀察到，計算各個樣本群體稀有分型如下：非裔美洲人群：p=2/1148+1.96[(2/1148)(1-(2/1148))/1148]1/2

=0.0017+0.002=0.004=0.4%西班牙人群：1-（0.05）1/686=1-0.9956=0.0044=0.44%第七十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日檢材狀況不好(數(shù)量與質量)與測序技術潛在的誤差,使被測樣本單個堿基的不同不能作為法醫(yī)學區(qū)分個體的依據(jù)。線粒體DNA遺傳標記呈單倍型遺傳，整個線粒體基因組相當于一個遺傳標記。在法醫(yī)學實踐中，其個人識別能力有限。takecautiontomtDNAtyping第七十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第六節(jié)

骨骼檢驗第七十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日骨骼檢查要解決以下問題：是否骨骼？人骨還是動物骨？一人骨或是多人骨？人骨的個人識別，包括根據(jù)骨骼特征推斷死者的性別、年齡、身高，面貌復原與顱像重合及遺傳標記分析；死后經(jīng)過時間的推測及損傷的鑒定。第七十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日骨的確定肉眼檢查：根據(jù)骨骼的解剖學與組織學結構特點及骨骼成分的測定進行判斷。顯微鏡檢查： 骨片鏡檢，觀察有無骨小管、骨板、哈佛氏管等骨組織學特征。焚燒試驗： 表面失去光澤，重量減輕，質地變松脆。第七十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日骨骼的種屬鑒定區(qū)別點人骨動物骨哈佛氏管形態(tài)規(guī)則，橫斷面呈圓形或橢圓形直徑大，平均比動物骨大2-3倍數(shù)量少，180倍鏡下平均每視野可見7—8個型態(tài)不規(guī)則，多呈長圓形或條形直徑小數(shù)量多，180倍鏡下平均每視野可見10個以上骨板層排列同心圓骨板排列整齊同心圓骨板排列不整齊，有的缺少環(huán)形骨板骨單位界線骨單位之間界線清楚骨單位之間界線不清楚第七十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日一人骨或多人骨的鑒別主要根據(jù)骨骼的解剖學結構、定位、數(shù)目、排列及各骨的連接吻合情況和有無重復骨等進行鑒定。DNA分析第七十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日骨的個人識別形態(tài)觀察測量方法圖像分析方法分子生物學方法第七十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日人骨的性別鑒定項目男性女性一般性狀狹小而高，骨質較重寬大而矮，骨質較輕骨盆壁肥厚粗糙，側壁內傾而深纖薄光滑，側壁平直而淺入口縱徑大于橫徑，葉心型或楔型橫徑大于縱徑，呈圓型或橢圓型出口狹小寬大盆腔狹小而深，上口大，下口小，呈漏斗狀短而寬，呈圓桶型骶骨狹而長，呈等腰三角形，彎曲度大，岬明顯突出短而寬，呈等邊三角形，彎曲度小，岬略突出坐骨大切跡窄而深淺而寬坐骨結節(jié)不外翻外翻耳狀面大而直，涉及3個骶椎小而傾斜，涉及2-2.5個骶椎；分娩后其前下方可見分娩溝髖臼大，朝向外小，朝向前外恥骨聯(lián)合面高；上下枝結合部呈三角形；恥骨角小，70o-75o低；結合部呈方形；恥骨角大，90o-110o，分娩后聯(lián)合面背側可見分娩瘢痕閉孔大，卵圓形，內角約110o小，三角形，內角約70o髂翼位置垂直水平骨盆的性別差異第八十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日項目男性女性一般性狀粗糙，肌線明顯，大而重較光滑，肌線不明顯，小而輕薄顱骨的厚度較厚較薄顱腔較大，容積約1450ml較小，容積約1300ml側面觀前額及頂部呈弧線狀前額垂直，頂部平坦額結節(jié)不明顯明顯上眉間窩有無眉間發(fā)育明顯，突出于鼻根之上不明顯，較平直眉弓明顯突起，表面多有小孔不明顯，表面幾無小孔眼眶類方型，眶上緣較鈍類圓形，眶上緣較銳鼻根點凹陷較深較淺梨狀孔窄高寬低項線粗大不明顯枕外隆凸粗大較小乳突大，后緣長，圍徑大較小，后緣短，圍徑小枕骨大孔大小枕骨髁大小下頜體較高，平均高度為29．1m較低，平均高為26．3m下頜枝較寬，最大寬度為42．4mm較窄，最大寬度為39．1mm下頜骨角外翻，較小，平均小于120°外翻不明顯，較大，平均大于120°下頜骨頰區(qū)方圓或鈍圓，結節(jié)強壯粗糙圓形或銳圓，結節(jié)中等，平滑顱骨的性別差異第八十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日人骨的年齡測定骨骼骨化中心出現(xiàn)（出生后）骨骺愈合時間骨骼骨化中心出現(xiàn)（出生后）骨骺愈合時間腕骨頭狀骨2-3月

肩胛骨喙突1歲18-24歲鉤骨2-4月

肩峰突端11-18歲18-24歲三角骨2-4歲

關節(jié)盂、下角、脊柱緣11-18歲

月骨3-5歲

舟骨5-7歲

鎖骨胸骨端18-20歲20-25歲大多角骨5-7歲

小多角骨5-7歲

跟骨結節(jié)6-12歲16-18歲掌骨1-3歲14-16歲第1、2、3楔骨9-11月

指骨1-3歲14-16歲足舟骨9-11月

尺骨鷹嘴9-11歲15-17歲脛骨上端出生-2月17-20歲小頭6-8歲16-18歲下端4-6歲16-18歲橈骨小頭5-7歲15-17歲腓骨上端3-5歲17-20歲下端7-9月16-18歲下端10月-2歲16-18歲肱骨頭出生-3月15-17歲髕骨3-5歲

大結節(jié)7-9月15-17歲

小結節(jié)2-4歲15-17歲股骨頭3-5月17-19歲小頭3-5月16-18歲大轉子3-5歲17-19歲內上髁6-8歲16-18歲小轉子9-11歲17-19歲外上髁11-13歲16-18歲下端出生-5月17-20歲滑車9-11歲16-18歲髖骨12-19歲20-25歲四肢骨骨化中心出現(xiàn)及骨骺愈合的時間第八十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日年齡(歲)聯(lián)合面頂部結節(jié)后緣前緣周緣17-19前后凸，嵴溝明顯，高3mm40％極明顯，高lOmm18歲開始部分出現(xiàn)并外翻

20-22凸?jié)u消，嵴溝明顯，高2mm46.5％可見，高7mm繼續(xù)擴大，仍外翻

23-26嵴溝仍明顯，高1.5mm仍可見大部形成開始部分形成逐漸形成

27-30嵴溝仍可見，嵴峰較平50％仍可見，高5mm基本形成，邊緣較銳大部形成(60％)尚未形成31-35嵴溝基本消失，成為平面21.8％僅見殘痕，高3mm全部形成，大部增寬全部形成已形成36-40中央開始凹陷，表面粗糙結節(jié)殘痕消失開始向后擴散70.6％隆起開始出現(xiàn)隆起41-49中央明顯凹陷,表面粗糙

繼續(xù)向后擴散46歲起全部隆起增寬，明顯隆起50-59表面開始變光滑，出現(xiàn)小孔

明顯向后擴散,邊緣鈍全部出現(xiàn)隆起隆起極顯著邊緣鈍60以上表面光滑，小孔形成小凹

邊緣較銳

邊緣較銳恥骨聯(lián)合面的年齡特征第八十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日從骨骼推算身高將每塊骨骼按解剖學位置排列后，測得全身骨骼的高度，再加上5cm軟組織厚度，即為死者的身高。骨骼不完整時須通過回歸方程推算。第八十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日以左側肢體部分長骨推算中國漢族男性(21-30歲)身高的回歸方程式如下。身高：2.30X股骨最大長+64.38±3.48(cm)身高：2.22X脛骨最大長+85.34±3.87(cm)身高：2.54X腓骨最大長+76.15±3.81(cm)身高：2.66X肱骨最大長+82.64±4.13(cm)身高：2.86X尺骨最大長+92.82±4.47(cm)身高：3.49X橈骨最大長+82.71±4.14(cm)第八十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日圖像分析方法面貌復原面貌雕塑法顱骨側面描記法顏面影像復原形態(tài)圖法顱像重合第八十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日分子生物學方法X-Y染色體同源特異片段鑒定性別；PCR-STR；mtDNA識別個體。第八十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日骨骼樣本的DNA分析過程埋葬地表面清潔抑制物的移除線粒體DNA分析STR分析挖掘軟組織處理人類學分析制樣骨骼樣本的表面污染的處理骨骼實驗室的準備骨骼的研磨、粉末化處理DNA提取提取后的DNA純化PCR后的純化PCRDNA定量SNP分析結果的評價新一代測序技術的應用RTG3D第八十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日死后經(jīng)過時間的推測及損傷的鑒定完全骨化后，由骨骼推測死后經(jīng)過時間比較困難。主要依據(jù)昆蟲的侵襲情況、尸體的崩解情況、骨質無機鹽含量來推斷。骨骼損傷的形狀可長期保存，對于鑒定有重大意義。如顱骨鉆孔術后缺損有助于個人識別；根據(jù)骨骼損傷確定損傷性質，有助于推斷致傷物，判明死因。第八十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第七節(jié)

牙齒鑒定第九十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日牙齒檢查要解決以下問題：是否人牙齒？推斷年齡；牙齒的個體生活特征；個人識別。第九十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日年齡推斷根據(jù)牙齒的萌出順序推斷年齡乳牙上頜下頜中切牙6-95-8側切牙6.5-106-9尖牙16-2014-18第一磨牙12-1810-14第二磨牙20-3018-24人類乳牙萌出時間（月）第九十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日恒牙上頜男女下頜男女中切牙6-86-96-55-8側切牙7-107-106-85-9尖牙10-139-129-128-11第一雙尖牙9-129-129-129-12第二雙尖牙10-139-1210-139-13第一磨牙6-75-76-75-7第二磨牙11-1411-1411-1310-13人類恒牙萌出時間（歲）第九十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日根據(jù)牙齒的磨耗程度推斷年齡磨耗度東北地區(qū)M1M2華南地區(qū)M1華北地區(qū)M1M2Ⅰo17.39-21.9419.76-26.5816.022-2322-24Ⅱo22.21-25.2328.49-30.2524.526-2929-31Ⅲo30.85-32.6133.78-38.4035.228-3636-40Ⅳo37.32-44.7239.95-53.9544.239-4344-48Ⅴo43.55-59.5959.5958.948-5755-65Ⅵo60.5-70.7--第一、二磨牙(M1、M2)的磨耗度與年齡的關系第九十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個體生活特征牙齒可反映的個體生活特征有:叼煙斗、長期嗑瓜子或咬硬物的人，其切牙切端常有相應的磨耗；長期吸咽、飲茶的人，牙齒表面有煙垢或茶垢；吹玻璃的工人及木工的牙齒常有職業(yè)的印記；氟牙說明曾在高氟區(qū)長期居住過；檳榔齒以亞熱帶地區(qū)的婦女為多見；四環(huán)素牙常反映兒童時期曾經(jīng)長期服用四環(huán)素類藥物。第九十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個人識別牙科學資料分析方法 牙科學的詳細病歷是十分重要的個人識別資料。分子生物學方法 牙髓細胞第九十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第八節(jié)

其他組織檢驗第九十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日軟組織

腐敗程度決定了軟組織DNA分析的成敗石蠟包埋組織

甲醛固定的時間決定了DNA分析的成敗第九十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第九節(jié)

個人識別結果評估第九十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日攻擊DNA證據(jù)的幾個方面一般問題：實驗室無質量控制技術人員的培訓不足不能提供充分的材料第一百頁，共一百三十頁，2022年，8月28日證據(jù)鏈問題記錄不全樣品保存、轉運不當提交偽證更改證據(jù)第一百零一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日技術問題實驗室未按要求操作處理不當造成證據(jù)的污染混合樣品的分析抑制檢驗的因素譜帶“漂移”方法未經(jīng)有效性驗證第一百零二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日統(tǒng)計問題群體研究不足數(shù)據(jù)庫使用不當不符合平衡規(guī)律位點間連鎖第一百零三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日遺傳標記

檢材處理策略

實驗結果解釋第一百零四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日基本策略通過遺傳標記分析為案件偵查提供線索,為審判提供科學證據(jù)。如強奸案，若從被害人陰道拭子中取得的精斑與嫌疑人的不同，這就為排除該嫌疑人提供了證據(jù)；如謀殺案，若測出嫌疑兇器上的血痕與被害人血液具有相同的遺傳標記，則在某種程度上支持嫌疑兇器是作案工具的論點。第一百零五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個人識別原理1現(xiàn)場檢材

個人識別

不同排除嫌疑人嫌疑人樣本遺傳標記分型相同不能排除嫌疑人實驗技能第一百零六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個人識別原理2現(xiàn)場檢材

個人識別估計嫌疑人

相同

是現(xiàn)場檢材嫌疑人樣本遺傳標記分型供體的可能性

統(tǒng)計理論第一百零七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日法醫(yī)遺傳標記涉及的統(tǒng)計學分析概率基礎定義，范圍，算法乘法定律：多個事件同時發(fā)生P(A)=P(A1)P(A2)加法定律：多個事件發(fā)生一個P(A)=P(A1)+P(A2)第一百零八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日遺傳標記個人識別系統(tǒng)效能個案能力第一百零九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日遺傳標記個人識別的系統(tǒng)效能系統(tǒng)效能用個人識別能力(discriminationpower,DP)定量評價。個人識別能力指從群體中隨機抽取兩名個體，其遺傳標記表型不相同的概率。個人識別能力DP=1-ΣPi2第一百一十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日個人識別的計算個人識別能力DP=1-ΣPi2以ABO型為例，A、B、O、AB表型頻率分別為：P1:0.2642,P2:0.3353,P3:0.290，P4:0.110則：DP=1-ΣPi2

=1-[0.26422+0.33532+0.29052+0.11002]=0.713第一百一十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日STR遺傳標記TH01的個人識別能力計算數(shù)據(jù)表型表型數(shù)表型頻率(Pi)Pi26-620.0170．0002896-790.0740．0054766-810.0080．0000646-9150.1240．0153766-1030.0250．0006257-770.0580．0033647-820.0170．0002897-9320.2640．0696967-9.330.0250．0006257-1020.0170．0002898-970.0580．0033648-1020.0170．0002899-9260.2150．0462259-9.340.0330．0010899-1050.0410．0016819.3-1010.0080．000064合計1211.000．148805第一百一十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日TH01的個人識別能力DP=1-Q=1-ΣPi2

=1-0.148805=0.851195≈0.8512意味著在成都漢族群體中隨機抽取兩個無關個體樣本，兩者TH01分型結果不相同的概率為0.8512,純粹由于機會導致兩者TH01分型結果一致的概率為0.1488。第一百一十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日累積個人識別能力TDP=1-Q1xQ2xQ3x…Qk=1-∏Qj第一百一十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日遺傳標記數(shù)目越多，鑒別能力愈強。系統(tǒng)效能愈高基因座個人識別能力累積個人識別能力TPOX0.7890.789D3S13580.8560.9696FGA0.9520.99854D5S8180.9120.999872CSF1PO0.8580.9999818D7S8200.9170.99999849D8S11790.9500.999999924TH010.8330.999999987VWA0.9240.999999999D13S3170.931>0.999999999D16S5390.921>0.999999999D18S510.958>0.999999999D21S110.931>0.999999999第一百一十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日實質是比較現(xiàn)場收集到的法醫(yī)物證檢材與嫌疑人樣本，判斷是否來自同一個體。若檢材與樣本DNA圖譜相同，稱兩份檢材的DNA圖譜匹配。兩份檢材DNA圖譜匹配有兩種可能的原因：兩份檢材來自同一個體；兩份檢材不是來自同一個體。理論上來自群體中的一名隨機個體，僅僅因為DNA圖譜碰巧與檢材的DNA圖譜相同而出現(xiàn)了匹配。遺傳標記對個案的鑒定能力第一百一十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日隨機匹配概率在法醫(yī)物證學范疇內,隨機匹配概率方法指的是在假設條件(H0)

下，獲得證據(jù)DNA圖譜的概率。這是一種條件概率。這個假設簡單說就是假定DNA圖譜來自群體中一名與嫌疑人沒有關系的隨機個體。用豎線分開條件與事件，豎線右邊為條件，左邊為事件，隨機匹配概率可寫成Pr(E|H0)。第一百一十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日隨機匹配概率對于僅由一名個體留下的斑痕，如血痕，隨機匹配概率數(shù)值上等于人群中這種DNA圖譜的頻率。Pr(E|H0)=1XP(X)式中P(X)為人群中這種DNA圖譜的頻率，以頻率估計概率，即為發(fā)現(xiàn)這種DNA圖譜的理論概率。第一百一十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日正確的理解隨機匹配概率非常重要不是指嫌疑犯以外的人有罪的概率不是指其他人在犯罪現(xiàn)場留下相關證據(jù)的概率不是指被告無罪的概率不是指現(xiàn)實社會中能找到和已知基因型完全匹配的概率隨機匹配概率是對一個特定的DNA圖譜可能出現(xiàn)在人群中的估計概率。隨機匹配概率也可以理解為從一個人群中隨機抽取一個樣本,會出現(xiàn)特定DNA圖譜的理論概率。

隨機匹配概率第一百一十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日隨機匹配概率改變隨機匹配概率的敘述方法和意思通常意義下是檢舉人的謬誤或顛倒條件概率的謬誤,如把Pr(E|H0)理解為Pr(H0|E)。典型謬誤：所指定的DNA圖譜只有0.0001的概率來自除嫌疑人外的其他人典型謬誤：只有0.0001的概率被告是無罪的。正確的陳述：由無關個體組成的群體中隨機抽到所觀察DNA圖譜的可能性預期為0.0001。第一百二十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日隨機匹配概率應用

Pm=1XP(X)遺傳標記

ABOMNVWA表型組合AM15-18表型頻率0.2640.4760.021Pm=1XP(X