微生物的實驗室培養(yǎng)最新

關于微生物的實驗室培養(yǎng)最新第1頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：衣原體、支原體、細菌、放線菌、藍藻個體微小、結構簡單酵母菌、霉菌、食用菌(蘑菇，靈芝）真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：微生物基礎知識第2頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四自養(yǎng)型微生物：光能自養(yǎng)：光合細菌、藍藻、顯微藻類化能自養(yǎng)：硝化細菌、鐵細菌、硫細菌異養(yǎng)型微生物：絕大多數微生物第3頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四細菌的形態(tài)球菌弧菌桿菌螺旋菌第4頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四（一）培養(yǎng)基1.概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。3.培養(yǎng)基的類型和用途2.培養(yǎng)基的成分：

一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣等的要求。第5頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業(yè)生產培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第6頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：(是否運動)

固體培養(yǎng)基：菌落第7頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四菌落⑴.定義：

單個或者少數細菌(或其他微生物）在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據。第8頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四幾種菌落及其形態(tài)第9頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四幾種菌落及其形態(tài)第10頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

（二）微生物需要的營養(yǎng)物質

1、碳源

2、氮源

3、無機鹽

4、水

.......生長因子、維生素

第11頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質和一些代謝產物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源注：自養(yǎng)微生物的碳源為無機碳源異養(yǎng)微生物的碳源為有機碳源第12頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質。主要用于合成蛋白質、核酸及含N的代謝產物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：注：固氮菌的氮源為無機氮源

第13頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源的是（）A．糖類B．含碳有機物C．石油D．含碳無機物D2.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是（）A．碳源B．氮源C．無機鹽D．生長因子

A第14頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四【典例解析】例:關于微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。D第15頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

3.通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在碳源為纖維素的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素，可以抑制細菌和放線菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出（）①大腸桿菌②霉菌③放線菌④纖維素分解菌A.④②

B.①②

C.①③

D.③④

解析：選A。本題考查了微生物分離知識。纖維素分解菌可以利用纖維素，大部分微生物卻不能；培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌，但霉菌能夠生長。第16頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

4、某細菌的培養(yǎng)基的組成成分是葡萄糖、尿素、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和蒸餾水等，其中凝固劑是

,碳源是

，氮源是

。已知只有能夠合成脲酶的細菌才能在該培養(yǎng)基上生長，該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。從同化作用類型來看，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的細菌屬于(

)

同化作用：自養(yǎng)型/異養(yǎng)型異化作用：需氧型/厭氧型/兼性厭氧型瓊脂葡萄糖尿素選擇異養(yǎng)型微生物第17頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四思考?1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵？2.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。（三）無菌技術防止外來雜菌的入侵第18頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四3.消毒和滅菌有何不同？芽孢：某些特殊種群的細菌休眠體，對熱、堿、

酸、高滲以及輻射均有強耐受性。第19頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒:照射30min。⑴.消毒的方法：4.常用的消毒與滅菌的方法第20頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四針對物體表面和空氣中的微生物，所用器械是紫外燈。照射30min，可先噴灑石炭酸或煤酚皂溶液加強消毒效果。紫外線消毒第21頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第22頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第23頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四②干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌第24頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四本實驗采用酒精對實驗者雙手消毒，紫外線對操作環(huán)境照射消毒，對培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，對玻璃器皿進行干熱滅菌和接種環(huán)灼燒滅菌等。小結第25頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四體積小，結構簡單，易培養(yǎng)，生活周期短。二.實驗操作以培養(yǎng)大腸桿菌為例:制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：通過培養(yǎng)基的配制說明大腸桿菌（厭氧）的新陳代謝類型是：異養(yǎng)厭氧型第26頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第一步：制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化：牛肉膏（連同稱量紙）蛋白胨和氯化鈉瓊脂補加蒸餾水至100ml4.滅菌：培養(yǎng)基分裝（分裝前調PH≈7.6中性或微堿性）后高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿干熱滅菌。5.倒平板：50℃、酒精燈火焰附近拔滅口開皿、倒培養(yǎng)基、關皿冷卻后倒置

加熱攪拌加熱攪拌溶解防止糊底溶化第27頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

例題：關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中，錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，進行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5min～10min后，將平板倒過來放置

解析：選A。本題考查了牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過程。其順序為：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，故A項錯誤。第28頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四方法一：平板劃線法方法二：稀釋涂布平板法核心目的：防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度。第二步：純化大腸桿菌接種第29頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

定義：接種環(huán)、連續(xù)劃線、稀釋分散、菌落步驟:1.接種環(huán)灼燒滅菌2.冷卻接種環(huán)，開棉塞3.試管口滅菌（滅口）4.沾取菌液5.滅口，塞棉塞6.劃線接種7.接種環(huán)滅菌，連續(xù)劃線五個區(qū)域8.倒置培養(yǎng)一、平板劃線的操作方法第30頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第31頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四定義：梯度稀釋、涂布、菌落方法二：稀釋涂布平板法步驟:1.稀釋操作：1)試管滅菌編號2)移液管、稀釋菌液3)重復操作，完成5支試管的稀釋2.涂布平板：1)涂布器酒精消毒2)取菌液3)燃盡酒精4)涂布分散菌液第32頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。第33頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四倒平板操作第34頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？第35頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第36頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第37頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第38頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第39頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四答：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？2.稀釋涂布平板的操作方法第40頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第三步：微生物的恒溫培養(yǎng)接種培養(yǎng)基未接種培養(yǎng)基恒溫箱37℃培養(yǎng)12h和24h作用：對照實驗

若無菌落生長，說明培養(yǎng)基制備成功。否則培養(yǎng)基有雜菌污染，需重新制備。第41頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四第四步：菌種的保存固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產生變異⑵.長期保存：－20℃甘油瓶在冷凍箱中保藏⑴.臨時保藏：第42頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四三.結果分析與評價第43頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四本課題知識小結:第44頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

例2.下面對滅菌的理解不正確的是(

)

A.防止雜菌污染

B.消滅雜菌

C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌

D.滅菌必須在接種前B第45頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四

例1某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數。請回答與此實驗相關的問題。（1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了

和

。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是

和

。（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，應該采用的方法是

。（3）為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，應將接種了湖水樣品的平板置于

中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設定氮源碳源無機鹽水高壓蒸汽滅菌恒溫箱第46頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四在37℃。要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種

作為對照進行實驗。（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有

種細菌。一般說來，菌落總數越多，湖水遭受細菌污染的程度越

。（5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐

細菌，這種培養(yǎng)基被稱為

。無菌水多高選擇培養(yǎng)基鹽第47頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是A將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵第48頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習1.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是A將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵第49頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習2.下列操作與無菌技術無關的是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成第50頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習2.下列操作與無菌技術無關的是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成第51頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習3.外科手術器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標準A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第52頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習3.外科手術器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標準A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第53頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習4.某學校打算開辟一塊食用菌栽培基地,以豐富學生的勞動技術課內容,首先對食用菌實驗室進行清掃和消毒處理,準備食用菌栽培所需的各種原料和用具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題:第54頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。第55頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂第56頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨第57頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏第58頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習①對買回來的菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏凝固劑第59頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.第60頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例第61頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌第62頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂第63頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內壓力____________，將試管取出。第64頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋第65頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa第66頁，共75頁，2023年，2月20日，星期四練習③將配制好的培養(yǎng)基轉移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完畢拔