食品中微生物的快速檢驗

食品中微生物的快速檢驗摘要隨著食品工業(yè)的發(fā)展，食品安全越來越受到人們的關(guān)注，其中微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的問題。因此，食品微生物的檢測顯得尤為重要。本文就有關(guān)于食品微生物的快速檢測作一簡單的介紹。關(guān)鍵詞食品微生物檢測快速食品微生物的常規(guī)檢測方法，大多數(shù)是以培養(yǎng)活的細胞生長為手段來達到監(jiān)測的目的。這些方法往往需要在實驗室的無菌條件下進行，選擇特定的培養(yǎng)基培養(yǎng)，將細菌培養(yǎng)成肉眼可見的菌落才可確認，并且需要一定的培養(yǎng)時間（少則2-3天，多則數(shù)周），既費時費力又麻煩。而現(xiàn)行有效的一些快速檢測方法應用起來快速、簡便、準確，不僅可以大大縮短檢測時間，提高檢出率，并可用于微生物計數(shù)、早期診斷。鑒定等方面。這些快速方法通過綜合引用微生物學、化學、生物化學、生物物理學、免疫學以及血清學試驗技術(shù)對微生物進行分離、檢測、鑒定和計數(shù)，與傳統(tǒng)方法比較，更快、更方便、更靈敏。?1?細菌總數(shù)的快速測定技術(shù)1.1..紙片快速測定法紙片快速測定法是運用在一層雙膜系統(tǒng)內(nèi)含有適合細菌生長的培養(yǎng)基和冷水可溶的膠體物質(zhì)，以每系統(tǒng)1mL的加樣量將樣品（稀釋或未經(jīng)稀釋的樣品）直接加到基礎(chǔ)膜中間，蓋上含有凝膠劑和TTC的覆蓋膜，培養(yǎng)后細菌在雙層膜之間生長并顯色即可直接計數(shù)。1.2.ATP生物發(fā)光法ATP即三磷酸腺苷，普遍存在于包括微生物在內(nèi)的一切活細胞內(nèi)，當熒光素酶系統(tǒng)和ATP接觸時就會發(fā)光。螢火蟲熒光素酶是一種高效生物催化劑，當有鎂離子存在時，它能以熒光素、ATP和氧氣為底物，催化D-熒光素氧化脫羧，將化學能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽?，最大發(fā)生波長為562nm,但酶結(jié)構(gòu)不同則發(fā)射光略有不同。光強度與食品中微生物的ATP含量成正比。細菌ATP含量因不同種、生長條件、菌齡、抑制劑或有害化學物質(zhì)存在有很大的變化。如果樣品中污染了微生物，用ATP提取試劑與樣品混合，使細胞壁和細胞膜開孔，提取出ATP，然后再與熒光素和熒光素酶生物發(fā)光試劑作用，用熒光儀進行測定，再通過配套的軟件，可將發(fā)光量換算成微生物數(shù)。1.3.阻抗法電阻抗法是20世紀70年代初期法陣起來的的一項新生物學技術(shù)，是用電阻抗作為媒介，監(jiān)測微生物代謝活性為基礎(chǔ)的一種快速方法。已經(jīng)開始應用于食品微生物的檢驗。電阻抗之交流電路中導電物質(zhì)對電流所起的阻礙和抵抗作用。其原理是細菌在培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖的過程中，將會使培養(yǎng)基中的大分子電惰性物質(zhì)如碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質(zhì)，如乳酸鹽、醋酸鹽等，這些離子態(tài)物質(zhì)能增加培養(yǎng)基的導電性，使培養(yǎng)基的阻抗發(fā)生變化，通過檢測培養(yǎng)基的電阻抗變化情況，判定細菌在培養(yǎng)基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應的細菌。操作時將接種了的培養(yǎng)基置于一個裝有不銹鋼點擊的容器內(nèi)測定微生物生長而產(chǎn)生的阻抗（及其組分）改變。該法目前已經(jīng)用于細菌總數(shù)、霉菌、酵母菌、大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等的檢測。旋轉(zhuǎn)平板法把液態(tài)樣品螺旋式并不斷稀釋地接種到一個旋轉(zhuǎn)的平皿中。這一系統(tǒng)在美國已被廣泛采用。旋轉(zhuǎn)平板法是根據(jù)檢樣懸液被螺旋平板注入器連續(xù)不斷地注入到螺旋著的瓊脂平板的表面，在平板表面形成阿基米德螺旋形軌跡。當用于分液的空心針從平板中心移向邊緣時，菌液體積減少，注入的體積和瓊脂半徑間存在著指數(shù)關(guān)系。培養(yǎng)時菌落沿注液線生長。用一計數(shù)的方格來校準與瓊脂表面不同區(qū)域有關(guān)的樣品量，計數(shù)每個區(qū)域的已知菌落數(shù)，再計算細菌濃度⑷。這種方法可廣泛用于細菌、酵母、霉菌及乳類樣品中。樣品倒入平板后菌落數(shù)可以用激光菌落計數(shù)器來計數(shù)，即將光檢測儀放置在儀器的底部，激光儀從上面自動掃描平板，當激光束通過菌落時，可以降低光的強度，從而檢測出菌落的存在。這樣菌落數(shù)可以通過電子計數(shù)，從而不是傳統(tǒng)的視覺計數(shù)。電子計數(shù)快而準確，與傳統(tǒng)計數(shù)法得到的結(jié)果相近。疏水性柵格濾膜法（HGMF）或等格法用疏水性柵格濾膜（HGMF）過濾樣品液，先經(jīng)5微米網(wǎng)眼的初濾膜過濾除去食品顆粒（每個樣品個需要一套），再通過孔徑為0.45微米的濾膜。然后將濾膜置于相應的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，最后計數(shù)菌落總數(shù)。疏水性的柵格作為柵欄以防止菌落的擴散，保證了所有的菌落都是正方形的，便于人工或機械計數(shù)。這種方法既可以用于菌落總數(shù)的測定，也可用于大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的計數(shù)，還可以用于霉菌和酵母菌計數(shù)。只要選擇不同的培養(yǎng)基。此外還可以根據(jù)菌落在培養(yǎng)基上產(chǎn)生的不同顏色來分類計數(shù)。直接外熒光濾過技術(shù)（DEFT）直接外熒光濾過技術(shù)是測定乳、肉、禽、魚、水果、蔬菜、啤酒等食品及水中微生物的一種快速方法。它主要是是利用紫外光顯微鏡來進行。首先用一種特殊濾膜過濾樣品，經(jīng)吖啶橙染色后，用紫外光顯微鏡觀察，活細胞呈橙色熒光，死細胞呈綠色熒光。同時，我們也可用直接外熒光濾過技術(shù)與平板計數(shù)法聯(lián)合使用來檢測輻照食品，平板計數(shù)法的結(jié)果提供了產(chǎn)品輻照后存活的微生物量，直接外熒光濾過技術(shù)計數(shù)顯示了樣品中包括未存活細胞在內(nèi)的微生物總數(shù)。通過比較輻照前后直接外熒光濾過技術(shù)計數(shù)和平板計數(shù)的差異，可判別食品是否經(jīng)過輻照處理?！凹从媚z”系統(tǒng)（SimPlate）“即用膠”系統(tǒng)檢驗食品中細菌總數(shù)是運用一種專用培養(yǎng)基。這種專用培養(yǎng)基內(nèi)含有與多種細菌酶所對應的底物，檢樣中含有細菌時，只要具有一種酶的活性即能與底物作用生成4-甲基傘形酮，培養(yǎng)一定時間后，在波長365nm的紫外光下發(fā)出藍色熒光⑷。把1ml樣品傾入一盛有無菌液體培養(yǎng)基的試管中，混勻后再將混合物倒入一個裝有膠質(zhì)的特殊培養(yǎng)皿中。混合物與膠質(zhì)接觸后便形成與瓊脂相似的復合物，經(jīng)培養(yǎng)后可根據(jù)顏色指示或在紫外光下產(chǎn)生熒光計數(shù)菌數(shù)。與等格法相類似的，根據(jù)選擇不同的培養(yǎng)基，可用于大腸桿菌、霉菌和酵母菌以及彎曲桿菌的計數(shù)。2?小結(jié)隨著分子生物學與其他學科的發(fā)展，微生物檢驗技術(shù)也在不斷地更新和提高，逐步像分子學水平邁進。并