化妝品微生物指標檢驗

化妝品微生物指標檢驗第1頁/共32頁化妝品因含有水分，油脂，蛋白質(zhì)，多元醇等，為微生物的生長創(chuàng)造了良好的條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。為了抑制微生物的繁殖和消費者使用過程中的產(chǎn)品污染，往往在化妝品中加入防腐劑，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應用又可抑制微生物的生長。第2頁/共32頁化妝品衛(wèi)生標準第3頁/共32頁微生物檢驗方法GB/T7918.1-1987化妝品微生物標準檢驗方法總則菌落總數(shù)（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）

GB/T7918.2-1987化妝品微生物標準檢驗方法細菌總數(shù)測定

糞大腸菌群：GB/T7918.3-1987化妝品微生物標準檢驗方法糞大腸菌群銅綠假單胞菌（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）

GB/T7918.4-1987化妝品微生物標準檢驗方法綠膿桿菌金黃色葡萄球菌GB/T7918.5-1987化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）第4頁/共32頁總則微生物檢驗的基本要求微生物檢驗樣品的采集、保存及制備適用范圍第5頁/共32頁總則1、具有代表性

隨機抽取相應數(shù)量的包裝單位。應從批的整體中各部位抽取，如從四角+中間；分上、中、下層；或上、中上、中、中下、下層；梅花點式等。所有接觸樣品的工具、容器都必須保持清潔。

樣品的采集第6頁/共32頁2、抽/采樣數(shù)量按照抽樣批及抽樣方案JJF1070－2005定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則第7頁/共32頁3、檢驗量

檢驗時，應分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10mL。包裝量小于20g的樣品，采樣量可適當增加樣品包裝數(shù)量。

第8頁/共32頁樣品的制備液體樣品膏、霜、乳劑半固體狀樣品固體樣品樣品的制備注意事項無菌容器、材料及操作樣品的均一性第9頁/共32頁樣品的檢驗及保管

及時檢驗樣品應放在室溫陰涼干燥處樣品先進行微生物檢驗，再做其他指標須防止微生物的再污染和擴散如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應保存一個月第10頁/共32頁菌落總數(shù)檢驗菌落總數(shù)（Aerobicbacterialcount）是指化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)。測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛(wèi)生學總評價的綜合依據(jù)。第11頁/共32頁數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細菌的培養(yǎng)檢查結果、觀察與計數(shù)供試液的制備書寫檢驗記錄單第12頁/共32頁化妝品中防腐劑抑制細菌的生長.含卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進行中和。對尼泊金類、苯甲酸類、六氯酚類等有效，但對卡松類的防腐劑的中和效果有限。第13頁/共32頁卡松的中和劑半胱氨酸,可較好的中和卡松的抑菌效果。因此,檢測時不同的防腐劑加入不同的中和劑第14頁/共32頁為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。第15頁/共32頁在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時不易洗脫下來,因此,需要驗證檢測方法的有效性。第16頁/共32頁糞大腸菌群糞大腸菌群（Fecalcoliforms）系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24h～48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌直接來自糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。第17頁/共32頁產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結果判斷44±0.5℃24~28h分離培養(yǎng)蛋白胨水培養(yǎng)最終結果判斷44±0.5℃24±2h靛基質(zhì)特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖MEMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖第18頁/共32頁銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。第19頁/共32頁最終結果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗綠膿菌素試驗生化試驗硝酸鹽還原試驗

42℃生長試驗明膠液化試驗★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素第20頁/共32頁十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗粉紅/紫紅色第21頁/共32頁綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗N2明膠液化試驗明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化第22頁/共32頁金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。第23頁/共32頁革蘭染色、鏡檢→生化試驗:血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗最終結果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養(yǎng)基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落★金黃色葡萄球菌檢查流程圖第24頁/共32頁BairdParker’s平板灰/黑色甘露醇發(fā)酵試驗血漿凝固酶試驗血漿凝塊液態(tài)血漿第25頁/共32頁霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌數(shù)測定（Determinationofmoldsandyeastcount）是指化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。第26頁/共32頁檢驗結果正確的保證設備方面：恒溫培養(yǎng)設備高壓滅菌器超凈工作臺均質(zhì)器天平顯微鏡第27頁/共32頁材料要求：無菌容器及溶液；材料充足；

培養(yǎng)基的制備與質(zhì)量控制；第28頁/共32頁人員操作方面：無菌操作