染色體核型分析

染色體標(biāo)本制備及核型分析染色體核型分析質(zhì)量保障部Faye當(dāng)前1頁，總共36頁。一、名詞解釋二、染色體標(biāo)本制備三、染色體核型分析實(shí)驗(yàn)耗材前期處理實(shí)驗(yàn)步驟玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)、合格指標(biāo)染色體核型排列核型檢測的可重復(fù)性當(dāng)前2頁，總共36頁。一、名詞解釋核型分裂相一個(gè)體細(xì)胞中的全部染色體，按其大小、形態(tài)特征順序排列所構(gòu)成的圖像。小鼠：♂40，XY、♀40，XX人類：♂46，XY

、♀

46，XX細(xì)胞分裂過程中每個(gè)時(shí)期的細(xì)胞形態(tài)特征，包括細(xì)胞的總體形狀和遺傳物質(zhì)的變化。當(dāng)前3頁，總共36頁。一、名詞解釋數(shù)量變異（性染色體丟失/增加、近端著絲粒染色體三體）（中期）分裂相

核型結(jié)構(gòu)變異（缺失、重復(fù)、倒位、易位）當(dāng)前4頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)耗材儀器設(shè)備：超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、離心機(jī)、光學(xué)顯微鏡、刻度離心管、乳頭吸管、棕色試劑瓶、載玻片、吹風(fēng)機(jī)、玻片架、染色缸主要試劑：秋水仙素、低滲液、卡諾氏固定液、吉姆薩染液、胰酶、1NHCl、1NNaOH、MEF培養(yǎng)基、PBS當(dāng)前5頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備前期處理

樣品要求：對數(shù)期生長，狀態(tài)良好，緊密度高，折光性好，細(xì)胞量≥T25/60mm平皿差速貼壁法去除MEF（KSR培養(yǎng)體系除外）終止培養(yǎng)前1~2小時(shí)，加入秋水仙素（100ug/ml），最終濃度為0.1~0.2ug/ml。作用：破壞紡錘體防護(hù)：有劇毒、無揮發(fā)性因素：時(shí)間、濃度當(dāng)前6頁，總共36頁。當(dāng)前7頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備固定細(xì)胞收獲制片預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟當(dāng)前8頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理消化并收集細(xì)胞至離心管，吹打成單細(xì)胞懸液，250g，5min離心，棄上清實(shí)驗(yàn)步驟當(dāng)前9頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理加入37℃預(yù)熱的低滲液（0.075mol/L）5ml，吹打至均勻，37℃水浴15-20min。實(shí)驗(yàn)步驟當(dāng)前10頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理加入37℃預(yù)熱的低滲液（0.075mol/L）5ml，吹打至均勻，37℃水浴15-20min。實(shí)驗(yàn)步驟配制：0.075mol/LKCl溶液作用：低滲作用因素：時(shí)間、溫度、濃度當(dāng)前11頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟離心棄上清，將細(xì)胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地重懸細(xì)胞。沿管壁緩慢加入固定液0.5-1.0mL，邊滴加邊震蕩均勻，靜置5min后離心棄上清。當(dāng)前12頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟離心棄上清，將細(xì)胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地重懸細(xì)胞。沿管壁緩慢加入固定液0.5-1.0mL，邊滴加邊震蕩均勻，靜置5min后離心棄上清。配制：甲醇：冰乙酸=3：1，現(xiàn)用現(xiàn)配。作用：固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性防護(hù)：甲醇→毒性，冰乙酸→刺激性和腐蝕性當(dāng)前13頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟（1）加入3ml固定液，靜置30min，離心棄上清；（2）再次加入3ml固定液，吹打均勻并靜置30min當(dāng)前14頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟離心棄上清液，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量情況，加入1~2mL固定液，吹打細(xì)胞制成懸液，懸液呈微白色時(shí)為最佳。當(dāng)前15頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)內(nèi)容用滴管吸取細(xì)胞懸液，高空滴在冰凍玻片上，立即在酒精燈的火焰下過火幾次，置80℃烤箱中烤片2h。當(dāng)前16頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟用滴管吸取細(xì)胞懸液，高空滴在冰凍玻片上，立即在酒精燈的火焰下過火幾次，置80℃烤箱中烤片2h。要求：潔凈、冰凍處理：逐片清洗（洗潔精→超聲波→自來水→純水），95%乙醇浸泡24h，純水逐片刷洗，放置于裝有純水的器皿中，4℃保存。當(dāng)前17頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟預(yù)熱胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水沖洗染液，用吹風(fēng)機(jī)吹干。當(dāng)前18頁，總共36頁。二、染色體標(biāo)本制備細(xì)胞收獲制片固定預(yù)固定低滲處理實(shí)驗(yàn)步驟預(yù)熱胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水沖洗染液，用吹風(fēng)機(jī)吹干。要求：0.25%，pH6.8～7.2作用：去除染色體上的蛋白質(zhì)，便于染色。配制：Giemsa原液：磷酸緩沖液（pH7.4）=1：9，現(xiàn)用現(xiàn)配。當(dāng)前19頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)玻片顏色藍(lán)紫色玫紅色著色淺√解決方案配制新的染液；適當(dāng)提高胰酶消化玻片的時(shí)間。當(dāng)前20頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)細(xì)胞密度過密適中過稀√解決方案制備玻片時(shí)，對每一個(gè)樣品都先進(jìn)行試片，并在鏡下觀察細(xì)胞密度，從而調(diào)整懸液密度。當(dāng)前21頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)分裂相密度足夠稀少√解決方案適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例；制備較多的玻片當(dāng)前22頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)分裂相形態(tài)-緊密度過密適中過散解決方案過密：適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例；過散：適當(dāng)降低固定液中冰醋酸比例?！坍?dāng)前23頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)分裂相形態(tài)過密適中過散解決方案過密：適當(dāng)提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度；過散：適當(dāng)降低固定液中冰醋酸比例，減小滴片高度?！坍?dāng)前24頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)分裂相形態(tài)解決方案盡量將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液；滴片時(shí)勿重復(fù)滴加同一區(qū)域。重疊當(dāng)前25頁，總共36頁。三、染色體核型分析玻片標(biāo)本質(zhì)量評價(jià)染色體形態(tài)適中短小過長扭曲交聯(lián)消化過度√當(dāng)前26頁，總共36頁。三、染色體核型分析計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)合格指標(biāo)分裂相需完整獨(dú)立，染色體不過于松散，周圍無其他距離很近的分裂相。染色體形態(tài)適中，不過度短小或纖長，染色體彼此間無交聯(lián)纏繞或者交聯(lián)的染色體能明確的區(qū)分。染色體G顯帶普遍較清晰，質(zhì)檢人員能夠精確的判斷核型位置。計(jì)數(shù)30個(gè)分裂相，正常比例≥50%→數(shù)量是否異常暫不涉及核型排列→結(jié)構(gòu)是否異常當(dāng)前27頁，總共36頁。三、染色體核型分析染色體核型排列當(dāng)前28頁，總共36頁。三、染色體核型分析染色體核型排列當(dāng)前29頁，總共36頁。三、染色體核型分析染色體核型排列當(dāng)前30頁，總共36頁。三、染色體核型分析