種子生活力測(cè)定的原理

第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法一、種子生活力的概念和測(cè)定意義二、種子生活力四唑染色測(cè)定三、種子生活力的其他測(cè)定方法3/13/20231精品課件1、種子生活力（seedviability）的概念

種子生活力是指種子發(fā)芽的潛在能力和種胚所具有的生命力。通常是指一批種子中具有生命力的種子數(shù)占種子總數(shù)的百分率。

一、種子生活力的概念和測(cè)定意義第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法能發(fā)芽的種子暫時(shí)不能發(fā)芽而具有生命力的休眠種子3/13/20232精品課件2、測(cè)定種子生活力的意義（1）休眠的種子必須進(jìn)行生活力測(cè)定（2）快速預(yù)測(cè)種子發(fā)芽能力第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法3/13/20233精品課件二、種子生活力四唑染色測(cè)定（TTCtestorTZtest）

1、發(fā)展簡(jiǎn)史第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法1942年由德國(guó)H.Lakon發(fā)明1950年ISTA成立四唑測(cè)定技術(shù)委員會(huì)1953年ISTA世界大會(huì)第一次將四唑測(cè)定列入國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程《四唑測(cè)定手冊(cè)》（HandbookonTetrazoliumTest），Moore，1984年，650多個(gè)屬和種1995年我國(guó)將四唑測(cè)定列入農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程3/13/20234精品課件

無(wú)色的的三苯基四氮唑被種子吸收后，在胚部活細(xì)胞中脫氫酶的作用下，還原成為紅色的、穩(wěn)定、不擴(kuò)散的三苯基甲，這樣，就可根據(jù)染色的部位和深淺來(lái)區(qū)分種子紅色的有生活力部分和無(wú)色的死亡部分。2、原理第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法3/13/20235精品課件3、特點(diǎn)原理可靠結(jié)果準(zhǔn)確(與標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽率誤差一般不超過3-5%)不受休眠限制簡(jiǎn)便快速6-24hVitascope20-30min成本低廉第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法3/13/20236精品課件測(cè)定休眠種子的發(fā)芽潛力測(cè)定收獲后馬上要播種的種子的發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽緩慢的種子的發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽末期未發(fā)芽種子的生活力測(cè)定種子收獲或加工期間損傷種子的生活力解決發(fā)芽期間遇到的問題查明種子貯藏期間劣變衰老程度時(shí)間緊迫，調(diào)種時(shí)快速測(cè)定種子生活力第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法4、適應(yīng)范圍3/13/20237精品課件5、所需試劑第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑

（2,3,5-TriphenylTetrazoliumChlorideorBromide）簡(jiǎn)稱：四唑或紅四唑縮寫：TTC，TTB，TZ

△理化性質(zhì)白色或淡黃色的粉劑，熔點(diǎn)243℃；當(dāng)溫度達(dá)到245℃時(shí)就會(huì)分解，易溶于水，具有微毒；遇到直射光線時(shí)會(huì)被還原成粉紅色，所以該試劑需用棕色瓶裝盛，并用黑紙外面包裝。已配好的四唑溶液應(yīng)裝入棕色玻璃瓶里，存放在暗處。在進(jìn)行種子染色時(shí)，也許將其放在暗處和弱光處進(jìn)行。3/13/20238精品課件5、所需試劑第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法△測(cè)定方法建議使用0.1%～1.0%四唑鹽的水溶液切開的種子用0.1%～0.5%濃度的四唑溶液；整個(gè)胚、整粒種子或斜切、橫切或穿刺的種子需用1.0%濃度的四唑溶液；種子染色時(shí)間與四唑溶液濃度有關(guān)。濃度增加，染色反應(yīng)所需時(shí)間也隨之縮短，從染色效果看，以較低濃度為宜；測(cè)定時(shí)，要求四唑溶液的ph值在6～7范圍之內(nèi)。3/13/20239精品課件5、所需試劑第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法△配制方法稱取1g四唑粉劑溶解于100ml磷酸緩沖溶液中，即配成1.0%四唑溶液；稱取0.1g四唑粉劑溶解于100ml磷酸緩沖溶液中，即配成0.1%四唑溶液；可用NaOH或NaHCO3溶液調(diào)節(jié)ph值。3/13/202310精品課件5、所需試劑第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法磷酸緩沖液ISTATZ手冊(cè)法

AOSA規(guī)程法母液Ⅰ：稱取9.078g磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶解于1000ml蒸餾水中；母液Ⅱ：稱取9.472g磷酸氫二鈉（Na2HPO4）或11.876gNa2HPO4·2H2O溶解于1000ml蒸餾水；然后取2份母液Ⅰ和3份母液Ⅱ混合即成。

在1000ml蒸餾水中加入5.45gNaH2PO4和3.79gNa2HPO4，充分溶解即成。3/13/202311精品課件5、所需試劑第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法乳酸苯酚透明液用于小粒豆類種子或牧草種子,染色后種皮、稃殼或胚乳變?yōu)橥该?。過氧化氫溶液用于某些牧草種子（黑麥草）的預(yù)濕浸種，加快酶的活化和吸脹。殺菌劑和抗生素

延緩衰弱種子的劣變進(jìn)程。膠液硬化劑有些種子浸種后，種皮表面出現(xiàn)膠液而變得非常光滑，難以拿牢進(jìn)行樣品準(zhǔn)備。3/13/202312精品課件6、測(cè)定程序第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法（1）預(yù)處理

預(yù)措：是指在種子預(yù)濕前除去種子外部的附屬物和在種子非要害部位弄破種皮。預(yù)濕:

為加快種子充分吸濕，軟化種皮，便于樣品準(zhǔn)備，以提高染色的均勻度，通常種子在染色前要進(jìn)行預(yù)濕。3/13/202313精品課件6、測(cè)定程序第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法預(yù)濕（1）預(yù)處理水浸快速預(yù)濕：適合于水稻、大豆和花生等作物種子紙床緩慢預(yù)濕：適合于蔥、玉米和小麥等作物種子◎紙床預(yù)濕(小粒豆類種子)

◎紙卷預(yù)濕(大豆、菜豆、豌豆）H2O2溶液浸種：（為了加快種子吸脹和促進(jìn)酶的活化以及縮短預(yù)濕時(shí)間）0.3%,20～30℃,1h農(nóng)作物種子四唑染色技術(shù)規(guī)定3/13/202314精品課件不需預(yù)濕和附加準(zhǔn)備：如苜蓿種子采用緩慢預(yù)濕后不需樣品準(zhǔn)備：如大豆種子等穿刺或切開胚乳：小粒牧草等種子沿胚縱切：水稻、玉米、和麥類等近胚縱切：松柏和傘形科等植物種子上半?？v切：萵苣和其他菊科等植物種子第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法（2）染色前的樣品準(zhǔn)備目的：使四唑溶液快速和充分滲入種子全部活組織，加快染色反應(yīng)，采用適當(dāng)方法使胚的主要構(gòu)造和活的營(yíng)養(yǎng)組織暴露出來(lái)。3/13/202315精品課件g)切去種子基端：茜草科等植物種子h)斜切種子：菊科、十字花科和薔薇科等橫切胚乳：黑麥草、羊茅等植物種子剝?nèi)シN皮：矮牽牛、茶籽和棉花等植物種子剝開胚乳取出胚：杜仲等林木種子橫切胚軸和盾片：大麥和小麥等從果實(shí)內(nèi)取出胚：桃等橫切種子兩端：山茱萸和胡頹子等平切果種皮和胚乳，露出胚的構(gòu)造：洋蔥和菠菜等植物種子第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法（2）染色前的樣品準(zhǔn)備3/13/202316精品課件第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法1.禾谷類:通過胚和約在胚乳四分之三個(gè)縱切2.燕麥屬:靠近胚部橫切3.牧草:通過胚乳末端部分橫切和縱切4.牧草:種子刺穿胚乳5.萵苣屬:通過子葉末端一半縱切6.第5種方式進(jìn)行縱切時(shí)的解剖刀部位7.傘形科:沿胚的旁邊縱切8.針葉樹:種子沿胚旁邊縱切9.兩端橫切,打開胚腔,并切去小部分胚乳.3/13/202317精品課件（3）染色溫度和時(shí)間第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法將準(zhǔn)備好的種子樣品放入染色盤中，加入適宜濃度的四唑溶液完全淹沒種子，移置于一定溫度的黑暗控溫設(shè)備內(nèi)或弱光下進(jìn)行染色反應(yīng)。所用染色時(shí)間因四唑溶液濃度、溫度、種子種類、樣品準(zhǔn)備方法等因素的不同而異。在20～45℃

范圍內(nèi)，溫度每增加

5℃，其染色時(shí)間可減少一半。達(dá)到規(guī)定時(shí)間或染色已很明顯時(shí)，倒去四唑溶液，用清水沖洗。已達(dá)到規(guī)定時(shí)間，樣品的染色仍不夠充分，可適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間，以便證實(shí)是由于四唑溶液滲入緩慢引起，還是由于種子本身的缺陷所引起的。農(nóng)作物種子四唑染色技術(shù)規(guī)定3/13/202318精品課件（4）鑒定前處理第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法直接觀察，不需處理輕壓出胚，觀察鑒定扯開營(yíng)養(yǎng)組織，暴露出胚切去一層營(yíng)養(yǎng)組織，暴露出胚和活的營(yíng)養(yǎng)組織沿胚中軸縱切沿種子中線縱切剝?nèi)グ胪该鞯姆N皮或種子組織剝?nèi)シN皮和殘余營(yíng)養(yǎng)組織切去切面碎片或掰開子葉乳酸苯酚透明液的應(yīng)用(便于小粒種子觀察)3/13/202319精品課件①目標(biāo)：第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法（5）觀察鑒定計(jì)算種子生活力百分率按染色程度和組織特性，判斷種子活力強(qiáng)弱，并分級(jí)查明種子劣變和生活力喪失的原因3/13/202320精品課件裸眼或在解剖鏡下逐個(gè)鑒定，分清健壯組織，衰弱活組織，衰弱死組織和死亡組織并綜合判斷種子活力第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法②鑒定：（5）觀察鑒定3/13/202321精品課件

凡是胚的主要構(gòu)造及有關(guān)活營(yíng)養(yǎng)組織染成有光澤的鮮紅色，且組織狀態(tài)正常的，為有活力種子凡是胚的主要構(gòu)造局部不染色或染色成異常的顏色和光澤，并且活營(yíng)養(yǎng)組織不染成部分已超過二分之一，或超過允許范圍且組織軟化的，為不正常種子凡完全不染色或染色成無(wú)光澤的淡紅色或灰白色，且組織已腐化、蟲蛀、損傷、腐爛的，為死種子。各種植物的種子活力判別標(biāo)準(zhǔn)參照種子檢驗(yàn)規(guī)程。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法一般的鑒定原則：3/13/202322精品課件水稻：凡是胚的主要構(gòu)造染成正常鮮紅色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的種子為有生活力種子。大豆：凡是整個(gè)種子染成明亮紅色，或僅胚根尖端1/3不染色，或子葉表面有小范圍壞死，或子葉頂端1/3不染色，為有生活力種子。第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法3/13/202323精品課件（6）計(jì)算和結(jié)果表示第六章種子生活力測(cè)定的原理和方法計(jì)算各重復(fù)有生活力種子百分率，重復(fù)間誤