骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)當(dāng)前1頁，總共21頁。微核試驗(yàn)是用于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒物的快速檢測(cè)方法。微核(Micronucleus,MCN)是指細(xì)胞中主核之外的顆粒，染色與細(xì)胞核一致，相當(dāng)于細(xì)胞直徑的1/20-1/5，呈圓形或杏仁狀。是細(xì)胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細(xì)胞有絲分裂時(shí)滯留在細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)前2頁，總共21頁。機(jī)理：1有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn)的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中2斷片或無著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中結(jié)論：

微核試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)化學(xué)或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變這兩種遺傳學(xué)終點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)前3頁，總共21頁。無核細(xì)胞紅細(xì)胞有核細(xì)胞中微核難與正常核分葉及核突出物區(qū)別微核實(shí)驗(yàn)當(dāng)前4頁，總共21頁。紅細(xì)胞的分化成熟過程當(dāng)前5頁，總共21頁。當(dāng)前6頁，總共21頁。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的形成當(dāng)前7頁，總共21頁。8環(huán)磷酰胺（CTX）最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。在體外無抗腫瘤活性，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰胺氮芥對(duì)腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細(xì)胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時(shí)給予可致畸胎。用藥后24-30小時(shí)，骨髓中微核形成達(dá)峰。當(dāng)前8頁，總共21頁。9結(jié)果示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中一個(gè)微核示小鼠骨髓正常嗜多染紅細(xì)胞當(dāng)前9頁，總共21頁。10示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中兩個(gè)微核當(dāng)前10頁，總共21頁。11示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中多個(gè)微核當(dāng)前11頁，總共21頁。Giemsa染色PCE胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染色呈灰藍(lán)色；MCN多數(shù)為圓形，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色NCE的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。NCEPCE&MCN當(dāng)前12頁，總共21頁。實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠没熕帲ōh(huán)磷酰胺）制備突變模型觀察小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微核當(dāng)前13頁，總共21頁。【Animal】小鼠是微核試驗(yàn)的常規(guī)動(dòng)物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠?！綬eagents】小牛血清Giemsa染液環(huán)磷酰胺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑當(dāng)前14頁，總共21頁。實(shí)驗(yàn)分組和染毒方法環(huán)磷酰胺40mg/kg

模型組等體積溶劑對(duì)照組染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受試物間隔24h，第二次給藥后6h取材當(dāng)前15頁，總共21頁。處死：小鼠頸椎脫臼處死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1滴推片：30度角；晾干：一定要干；固定：甲醇固定10min,需要晾干；染色：Gimesa染液染色（10~15min）沖洗：蒸餾水沖洗，晾干閱片:

觀察微核。

染毒后操作步驟當(dāng)前16頁，總共21頁。推片方法當(dāng)前17頁，總共21頁。觀察與計(jì)數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域油鏡下觀察計(jì)數(shù)多染紅細(xì)胞（PCE）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個(gè)、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色。計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE中含微核的PCE數(shù)，并且計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞中PCE與NCE的比值。微核率（‰）=含微核PCE細(xì)胞數(shù)PCE細(xì)胞總數(shù)×1000實(shí)驗(yàn)方法和步驟當(dāng)前18頁，總共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別動(dòng)物數(shù)受檢PCE總數(shù)含微核PCE數(shù)微核率陰性對(duì)照組模型組當(dāng)前19頁，總共21頁。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)本試驗(yàn)中只計(jì)數(shù)PCE中微核，微核率以千分率表示.PCE/NCE為評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性的指標(biāo)：正常PCE/NCE比值約為l(正常范圍為0.6～1.2)；如PCE/NCE＜0.1，則表示P