課題申書實驗設(shè)計示例

填報說申請書各項內(nèi)容應實事求條認真填寫達要明確嚴謹，字跡清晰易辨。外來語要同時用原文和中文表達。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，二、申請書統(tǒng)一采用A4紙型版面設(shè)計，無須打印。標書請在11月7日前發(fā)到：keyan 由學術(shù)部統(tǒng)一集中打印，過期三、封面右上角“順序號”由中山大學北校區(qū)學生會學術(shù)部填寫（詞應反映研究內(nèi)容，詞數(shù)量不多于三個，各詞之間以逗號分隔）二、立論依請請按以下提綱填寫1、研究意義（基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合科學發(fā)展趨勢，論述項目的科學意義應用基礎(chǔ)研究結(jié)合學科前沿、圍繞國民經(jīng)濟和社會發(fā)展中的重要科技問題，論述其應用前景）2、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀3、本項目的構(gòu)思或設(shè)計思路4、本項目的創(chuàng)新之處5、主要參考文獻及出處（格式： ——作者．題目．名．年份．卷(期)．頁碼／專著——作者．書名．者．年份）研究背景與意血吸蟲的確診需要從糞便中檢出蟲卵,但由于血吸蟲生活史的特點,在同一時間段內(nèi)所獲得的糞便中的蟲卵數(shù)不相同,或者沒有蟲卵,所以糞便檢測的隨機性很大,不能正確反映情況。尤其當度較低時,糞便檢測方法的敏感性較低,不適用于低度流行病區(qū)血吸蟲的檢測以及療效考核,而且,在成蟲未產(chǎn)卵以前,即處于潛伏 。目前,已有環(huán)卵沉淀試驗(COPT)、間接紅細胞凝集試驗(IHA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和循環(huán)抗原檢測等血吸蟲病免疫診斷方法。抗體檢測雖 快,可用于確定診斷和(或)療效考核,但由于血吸蟲成蟲外膜具有不斷更新的特點, 技術(shù)，即PCR方法檢測血吸蟲的 DNA進行擴增，并證明有較高的敏感性。不過目前利用PCR方法檢測可疑患者的方法具有侵入性，且當需要重復取樣 的縱向監(jiān)測的潛力。2009年JInfectDis Nwakanma等用PCR方法檢測來自 386例患者的唾液中 DNA數(shù)量，結(jié)果顯示唾液中PCR的測定結(jié)果與顯微鏡檢查法所測的數(shù)量具有顯著的相關(guān) DNA是如何釋放到唾液中的機制目前還不明確。由此我們得到啟示，通過PCR方法檢測 血吸蟲患者唾液中血吸蟲DNA片段，評價用PCR方法檢測血吸蟲患者唾液中血吸蟲DNA片段的可行性，為探索唾液檢測這一低侵入性的檢測方法提供新的思路和依據(jù)。國內(nèi)外研究現(xiàn) 設(shè)計特異性引物，采用PCR方法對 標本中的DNA進行擴增，結(jié)果表明聚合酶鏈式反應檢測 血吸蟲DNA有較高的敏感性， 性釘螺PCR方法，靶 是18S小亞基單位核糖體核酸 易感人群、控制血吸蟲病流行具有一定意義。Driscoll等 血吸蟲尾蚴的PCR方法選擇的靶 釋放劑）在反應管中直接提取尾蚴DNA，然后結(jié)合環(huán)介導等溫擴增技術(shù)（loop-mediatedisothermalamplification，簡稱LAMP技術(shù)）擴增尾蚴DNA，建立了檢測尾蚴的方法。此法具有快速、非靶序列的污染少及提取過程中無擴增靶序列的丟失，操作簡便，敏感性高（可檢測到1條尾蚴），可在1．5h內(nèi)完成，若再設(shè)計2條環(huán)引物，可再節(jié)約0．5h，但成本較高，在試劑 周立等運用實時熒光定量PCR檢測血吸蟲，根據(jù)血吸蟲18S（18SrRNA）基PCR增出1450bp列TA隆后轉(zhuǎn)入大腸DH5α為模板制作熒光定量PCRPCR法檢測血吸蟲DNA度約為6pg，已經(jīng)初步應用于血吸蟲病患者糞便標本檢測，準確性和特異性較好。本項目的構(gòu)思本項目通過從湖南血吸蟲疫區(qū)收集30份 血吸蟲患者唾液樣本，并在中山大學北校區(qū)在校大學生收集50份唾液樣本作為正常對照。提取唾液中的DNA，利用設(shè)計的引物進行PCR特異性擴增后在經(jīng)2%的瓊脂糖電泳檢測，紫外觀 本項目的創(chuàng)新之處目前血吸蟲的技術(shù)，即PCR蟲的片段，在血吸蟲的診斷中已經(jīng)得到了很大的發(fā)展，已經(jīng)成功從血吸蟲患者和實驗動物的肝組織、糞便、外周標本中的DNA但這些方法具有侵入性，且當需要重復取樣測定時該方法具有很差的順應性。2009年JInfectDisNwakanmaPCR門診患有疑似瘧疾的386液中DNA唾液PCR測定結(jié)果與顯微鏡檢查法所測的數(shù)量具有顯著的相關(guān)性，證明對于檢測瘧疾來說，唾液取樣是一種很有前途的低1 中 學 2005年10月第23卷第期2、，等。血吸蟲病免疫診斷方法的研究進展國際醫(yī)學 3、,。血吸蟲病的免疫診斷現(xiàn)狀與研究進展ThestatusquoandprogressofstudyontheimmunodiagnosisofSchistosomiasisjaponicum<<疾病控制>>19993024、牛血吸蟲病5種學診斷技術(shù)比較ComparisononfivekindsofserologicaldiagnoseassaysofSchistosomiasisjaponicuminfarmcattle<<湖南學報(自然科學版)>>200733第015 澄用ELISA法比 血吸蟲抗原特異性和敏感性湖南醫(yī)學1994。6、 ，等循環(huán)抗原 醫(yī)學大學學報7 88910 研究專項課題3年評估報告.中國血吸蟲病防11、吳忠道,等.血吸蟲病再研究I化療后人群再的流行病學特征.中國血吸蟲病防治12、RashikaER,etal.Immunizationofmicewithultraviolet-attenuatedcercariaeofmansonitransientlyreducesthefecundityofchallengeworms.InternationalJournalforParasitology,1997,27(5):581-586.1314166-、17;年第期 卷專我國血吸蟲病現(xiàn)狀及治療藥物《畜牧獸 》2007年01; 性疾病6(2):105-18 病200762519、NwakanmaDC;Gomez-EscobarN;WaltherMetal. tativeDetectionof smodiumfalciparumDNAinSaliva,Blood,andUrine.JInfectDis，2009，Jun199(11):1567-74三、研究方.研究目標、研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（一）本項目通過對疫區(qū)血吸蟲病患者的唾液樣本進行PCR特異性擴增后電泳檢測，觀察是否有特異性條帶產(chǎn)生并通過 檢測方法的陽性率，以及對照組假陽性率，并與其他檢測方法進行比較，評價唾液PCR法檢測血吸蟲DNA在血吸蟲 對患者的唾液樣品進行DNA條 （三）疫區(qū)患者唾液中DNA提 .擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實驗方案（包括流程圖）及可行性分析研究方學生中獲取30樣DNA除去蛋白質(zhì)：蛋白酶K氯仿提、分離蛋白質(zhì)；析出DNA：乙醇沉淀使DNA引物15′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物2:5′→3′TTCCTTATTTTCACAAGGTGA工程技 提PCR.試劑Taq、10×buffer、Mgcl2、dNTP、100bpDNAMarKer、蛋白酶K工程(大連)有限公.引物由 引物1:5′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物 PCR2%瓊脂糖凝膠電泳溴乙錠含量0.5μg/ml,電泳緩沖液為1×TBE100bpDNA樣品加樣量為10μl,加2μl電壓80V60min,電泳后凝膠置于紫外透射反射儀上觀察結(jié)果。 利用統(tǒng)計學方法計算出本檢測方法的陽性率，以及對照組假陽技術(shù)路線加入特異性引加入特異性引物進行PCR增可行