【課件】重組DNA技術(shù)的基本工具課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

基因工程

按照人們的愿望,通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)。操作環(huán)境：原理：操作對(duì)象：操作水平：結(jié)果：意義：體外環(huán)境基因重組基因分子水平賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品定向改造生物性狀；克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙基因工程誕生的理論基礎(chǔ)拼接的基礎(chǔ)：表達(dá)的基礎(chǔ)：1.DNA的基本組成單位相同（四種脫氧核苷酸）2.都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則3.DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)1.基因是控制生物性狀的結(jié)構(gòu)與功能單位2.遺傳信息的傳遞都遵循中心法則3.生物界幾乎共用一套遺傳密碼回顧舊知1.基因是什么？2.基因的功能是什么？基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段基因通過(guò)控制蛋白質(zhì)的合成，直接或間接控制生物的性狀DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄（RNA聚合酶）翻譯DNA：①組成元素:CHONP②DNA中文全稱:脫氧核糖核酸③基本單位:脫氧核糖核苷酸=磷酸

+

脫氧核糖

+

含氮堿基脫氧核糖含氮堿基磷酸1′4′3′2′5′ATGC脫氧核苷酸(4種)胞嘧啶脫氧核苷酸腺嘌呤脫氧核苷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸

胸腺嘧啶脫氧核苷酸脫氧核苷酸如何鏈接成脫氧核苷酸鏈的呢？脫氧核糖A磷酸脫氧核糖G磷酸脫氧核糖T磷酸T磷酸脫氧核糖C磷酸脫氧核糖A磷酸脫氧核糖氫鍵磷酸二酯鍵雙螺旋結(jié)構(gòu)5’3’3’5’DNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：②

和

交替連接，排列在外側(cè)，構(gòu)成

；

排列在內(nèi)側(cè)。③兩條鏈上的堿基通過(guò)

連接成堿基對(duì)，且遵循

。①DNA是由兩條單鏈組成的，這兩條鏈按

方式盤旋成雙螺旋結(jié)構(gòu)。反向平行脫氧核糖磷酸堿基基本骨架氫鍵堿基互補(bǔ)配對(duì)原則

DNA聚合酶：解旋酶：磷酸二酯鍵氫鍵……ATGCCGTGGAATTCC…………TACGGCACCTTAAGG……①②①磷酸二酯鍵②氫鍵重組DNA技術(shù)的基本工具第1節(jié)1.準(zhǔn)確切割DNA分子的“分子手術(shù)刀”2.將DNA片段再連接起來(lái)的“分子縫合針”3.將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的“分子運(yùn)輸車”1.“分子手術(shù)刀”—限制性內(nèi)切核酸酶1.來(lái)源：主要來(lái)自原核生物2.種類：數(shù)千種（限制酶不是一種酶，而是一類酶）3.特點(diǎn)：具有專一性①能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列②使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開【無(wú)法識(shí)別切割RNA】【即一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子】4.作用部位：特定切點(diǎn)上的磷酸二酯鍵限制酶存在于原核生物中的作用是什么？主要起到切割外源DNA使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的幾種常見的限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)：特點(diǎn)：①大多數(shù)限制酶的識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸組成，少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成。②呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列。拓展：限制酶的名字的由來(lái)P72EcoRⅠ種加詞頭兩個(gè)字母菌株型號(hào)數(shù)字表示分離出來(lái)的第幾種限制酶屬名首字母EcoRⅠ：大腸桿菌（Escherichia

coli）R型菌株中分離出的第一個(gè)限制酶；SmaⅠ：粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia

marcescens）中分離出的第一個(gè)限制酶。11

黏性末端

黏性末端只能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開。被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。EcoRI限制酶的切割：平末端平末端SmaI限制酶的作用：只能識(shí)別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。（1）該DNA片段上EcoRI的識(shí)別序列在哪兒？（2）請(qǐng)用剪刀模擬EcoRI的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)將目的基因“切割”下來(lái)。探究?活動(dòng)一、用剪刀模擬EcoRI剪切目的基因(Bt基因)操作5’...G3’...CTTAAAATTC...3’G...5’黏性末端黏性末端目的基因黏性末端黏性末端(3)要想獲得某個(gè)特定性狀的目的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性(平)末端？要切2個(gè)切口，產(chǎn)生4個(gè)黏性(平)末端。思考與討論1.請(qǐng)結(jié)合限制酶的作用特點(diǎn)，回答以下問(wèn)題：(1)限制酶能切開RNA分子的磷酸二酯鍵嗎？不能(2)請(qǐng)結(jié)合右圖，推斷限制酶切割一次可斷開幾個(gè)磷酸二酯鍵？產(chǎn)生多少游離的磷酸基團(tuán)？產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？消耗幾分子水？消耗2分子水。斷開2個(gè)磷酸二酯鍵；產(chǎn)生2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)；產(chǎn)生2個(gè)黏性末端；2.請(qǐng)寫出下列限制酶切割形成的黏性末端，并思考同種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否一定不同？同種限制酶產(chǎn)生的黏性末端相同，不同的限制酶可能會(huì)形成相同的黏性末端3.請(qǐng)判斷：以下黏性末端是由

種限制酶作用產(chǎn)生的。三4.為什么限制酶不切割細(xì)菌本身的DNA分子？含某種限制酶的細(xì)菌的DNA分子不具備這種限制酶的識(shí)別序列，或者甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到了限制酶所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。2.“分子縫合針”—DNA連接酶1.作用：將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵

2.種類：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來(lái)源大腸桿菌T4噬菌體相同點(diǎn)恢復(fù)磷酸二酯鍵不同點(diǎn)只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)1802兩DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能拼起來(lái)可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的兩條單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA！DNA連接酶的縫合作用1902“分子縫合針”----DNA連接酶（1）E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶連接粘性末端2002“分子縫合針”----DNA連接酶（2）T4DNA連接酶連接平末端，效率低3.DNA連接酶和DNA聚合酶是一回事嗎？相同點(diǎn)：都是催化磷酸二酯鍵形成的酶。不同點(diǎn)：DNA聚合酶連接的是游離的脫氧核苷酸，需要模板；DNA連接酶連接的是DNA片段。名稱作用部位作用結(jié)果限制酶

DNA連接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶解旋酶磷酸二酯鍵堿基對(duì)之間的氫鍵將DNA切成兩個(gè)片段磷酸二酯鍵將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子磷酸二酯鍵將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈3.“分子運(yùn)輸車”—基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體1.作用：將外源基因送入受體細(xì)胞,

在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制.

2.種類：質(zhì)粒、噬菌體

動(dòng)物病毒

植物病毒將外源基因?qū)氪竽c桿菌等受體細(xì)胞

將外源基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞

將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞

3.質(zhì)粒：質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。4.運(yùn)載體需具備的條件：②能進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制①有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA片段（基因）插入其中③有特殊的標(biāo)記基因，比如：四環(huán)素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因，便于重組DNA分子的篩選④對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害、易分離真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)人工改造的。5.思考：將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用同樣的限制酶切割，在DNA連接酶的作用下，由兩個(gè)DNA片段連結(jié)成的產(chǎn)物有幾種？目的基因限制酶DNA連接酶載體①對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害；②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；③有特殊的標(biāo)記基因；④能自我復(fù)制或能整合到宿主DNA上。質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒基因工程的基本工具作為載體的條件種類：磷酸二酯鍵來(lái)源：主要來(lái)源于原核生物特點(diǎn)：作用部位：具有專一性結(jié)果：形成黏性末端或平末端連接部位：磷酸二酯鍵種類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶作用：把兩條雙鏈DNA片段拼接起來(lái)

課堂小結(jié)4.DNA的粗提取與鑒定1.原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精初步分離DNA和蛋白質(zhì)DNA能溶于物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液溶解DNA在一定溫度下（沸水?。?，DNA被二苯胺試劑染成藍(lán)色鑒定DNA2.選材：DNA含量相對(duì)較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。（注意：不能選擇哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA。）視頻演示：DNA的粗提取與鑒定28稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。在漏斗中墊上紗布過(guò)濾研磨液，4℃冰箱中靜置后取

；或?qū)⒀心ヒ旱谷胨芰想x心管中離心，取

。在上清液中加入體積相等的、

溶液,靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的

就是粗提取的DNA。2.去除雜質(zhì)—3.DNA的析出—1.破碎細(xì)胞——洋蔥研磨液上清液上清液預(yù)冷的酒精白色絲狀物用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物；或?qū)⑷芤旱谷胨芰想x心管中離心，取沉淀物晾干。析出DNA3.方法步驟：29將絲狀物或沉淀物溶于

溶液中，加入

試劑，混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min4.DNA的鑒定—二苯胺2mol/L的NaCl空白對(duì)照組：

在等體積的NaCl溶液中加入二苯胺試劑，將試管置于同等沸水浴中加熱5min。思考：如何評(píng)價(jià)結(jié)果？——看提取物顏色——看與二苯胺反應(yīng)顏色的深淺DNA純度

DNA的量(1)通過(guò)基因工程產(chǎn)生的變異是不定向的(

)(2)限制性內(nèi)切核酸酶均能特異性地識(shí)別6個(gè)核苷酸序列(

)(3)DNA連接酶能將兩堿基通過(guò)氫鍵連接起來(lái)(

)(4)限制酶和解旋酶的作用部位相同(

)判斷正誤××××(5)作為載體的質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因(

)(6)質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA分子，是基因工程常用的載體(

)(7)載體(如質(zhì)粒)和細(xì)胞膜中的載體蛋白的成分相同(

)(8)作為載體，必須要有標(biāo)記基因(

)×√×√1.(2022·天津耀華中學(xué)高二期中)以下是幾種不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列敘述正確的是()典題應(yīng)用A.以上DNA片段是由4種限制酶切割后產(chǎn)生的B.②片段是在識(shí)別序列為

的限制酶作用下形成的C.①和④兩個(gè)片段在DNA聚合酶的作用下可形成重組DNA分子D.限制酶和DNA連接酶作用的部位都是磷酸二酯鍵D2.DNA連接酶是重組DNA技術(shù)中常用的一種工具酶。下列相關(guān)敘述正確的是()A.能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氫鍵B.能將單個(gè)脫氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵C.能連接用同種限制酶切開的兩條DNA片段，重新形成磷酸二酯鍵D.DNA連接酶只能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端C3.下列關(guān)于基因運(yùn)輸工具——載體，必須具備的條件之一及理由均正確的是()A.能夠復(fù)制，以便目的基因插入其中B.具有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，便于目的基因的表達(dá)C.具有某些標(biāo)記基因，便于重組DNA的篩選D.對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，便于重組DNA的篩選典題應(yīng)用C4.某細(xì)菌質(zhì)粒上有標(biāo)記基因如圖所示，通過(guò)標(biāo)記基因可以推知外源基因(目的基因)是否轉(zhuǎn)入成功。外源基因插入的位置不同，細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況也不同，如圖所示是外源基因插入位置(插入點(diǎn)有a、b、c)示意圖，請(qǐng)根據(jù)表中提供的細(xì)菌生長(zhǎng)情況，推測(cè)①②③三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)，正確的一組是()插入點(diǎn)細(xì)菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況①能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)②能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)③不能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)A.①是c；②是b；③是aB.①是a和b；②是a；③是bC.①是a和b；②是b；③是aD.①是c；②是a；③是bA5.科學(xué)家們經(jīng)過(guò)多年的努力，創(chuàng)立了一種新興生物技術(shù)——基因工程。實(shí)施該工程的最終目的是()A.定向提取生物體的DNA分子B.定向地對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”C.在生物體外對(duì)DNA分子進(jìn)行改造D.定向地改造生物的遺傳性狀D6.科學(xué)家把兔子血紅蛋白基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞中，在大腸桿菌細(xì)胞中合成了兔子的血紅蛋白。下列關(guān)于這一先進(jìn)技術(shù)的理論依據(jù)不正確的是()A.所有生物共用一套遺傳密碼B.基因能控制蛋白質(zhì)的合成C.兔子血紅蛋白基因與大腸桿菌的DNA都是由四種脫氧核苷酸構(gòu)成，都

遵循相同的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則D.兔子與大腸桿菌有共同的原始祖先D7.據(jù)圖所示，有關(guān)工具酶功能的敘述不正確的是()A.限制性內(nèi)切核酸酶可以切斷a處B.DNA聚合酶可以連接a處C.解旋酶可以使b處解開D.DNA連接酶可以連接c處D8.限制酶和DNA連接酶是基因工程的工具酶，以下說(shuō)法正確的是()A.DNA連接酶能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯鍵B.限制酶只能切割雙鏈DNA片段，不能切割煙草花葉病毒的核酸C.E.coliDNA連接酶既能連接黏性末端，也能連接平末端D.限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái)，所以也能剪切自身的DNAB9.限制酶是一種核酸切割酶，可辨識(shí)并切割DNA分子上特定的脫氧核苷酸序列。如圖所示為四種限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的識(shí)別序列，箭頭表示每一種限制酶的特定切割位點(diǎn)，切割出來(lái)的DNA片段末端可以互補(bǔ)黏合的是

(限制酶)，其正確的末端互補(bǔ)序列應(yīng)該為()A.BamHⅠ和EcoRⅠ；末端互補(bǔ)序列為

—AATT—B.BamHⅠ和HindⅢ；末端互補(bǔ)序列為

—GATC—C.EcoRⅠ和HindⅢ；末端互補(bǔ)序列為—AATT—D.BamHⅠ和BglⅡ；末端互補(bǔ)序列為—GATC—D10.(2022·天津靜海高二階段練習(xí))有關(guān)下圖所示的黏性末端的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是()A.甲、乙、丙黏性末端分別是由不同的限制酶切割產(chǎn)生的B.甲、乙具有相同的黏性末端，可形成重組DNA分子，但甲與丙的黏性

末端不互補(bǔ)C.DNA連接酶的作用位點(diǎn)是a處D.切割產(chǎn)生甲的限制酶識(shí)別的核苷酸序列是“CAATTG”D11.質(zhì)粒是基因工程中最常用的外源基因運(yùn)載工具。下列有關(guān)敘述正確的是()A.質(zhì)粒只分布于原核細(xì)胞中B.在所有的質(zhì)粒上總能找到一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)C.攜帶外源基因的重組質(zhì)粒只有整合到宿主細(xì)胞的DNA上才會(huì)隨后者的

復(fù)制而復(fù)制D.質(zhì)粒上的抗性基因常作為標(biāo)記基因供重組DNA分子的篩選D12.(2022·重慶市第一中學(xué)期末)下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是()A.細(xì)菌質(zhì)粒和真核細(xì)胞DNA的基本組成單位不同B.細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過(guò)程一定是在受體細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行的C.質(zhì)粒是存在于所有細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所D.質(zhì)粒是細(xì)胞質(zhì)中能夠自我復(fù)制的環(huán)狀DNA分子D13.(2022·云南曲靖高二期中)如表列舉了幾種限制酶的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)(箭頭表示相關(guān)酶的切割位點(diǎn))。如圖是酶切后產(chǎn)生的幾種末端。下列說(shuō)法正確的是()A.BamHⅠ切割的是氫鍵，AluⅠ切割的是磷酸二酯鍵B.Sau3AⅠ和BamHⅠ切割的序列產(chǎn)生的片段能夠相連，連接后的片段還能被

Sau3AⅠ切割C.DNA連接酶能連接②⑤，不能連接②④D.E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶都能連接①③，且連接效率低B14.(2022·安徽蕪湖高二期中)某線性DNA分子含有5000個(gè)堿基對(duì)(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是()a酶切割產(chǎn)物(bp)b酶再次切割產(chǎn)物(bp)2100；1400；1000；5001900；200；800；600；1000；500A.a酶與b酶切斷的化學(xué)鍵相同B.a酶與b酶切出的黏性末端能相互連接C.a酶與b酶切割該DNA分子位點(diǎn)分別有3個(gè)和5個(gè)D.限制酶將一個(gè)DNA分子片段切成兩個(gè)片段需消耗兩個(gè)水分子C15.(2022·甘肅金昌高二期中)下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述，正確的是()A.用限制酶酶切獲得一個(gè)外源基因時(shí)得到兩個(gè)切口，有4個(gè)磷酸二酯鍵

被斷開B.限制酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越小C.—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端可用

DNA連接酶連接D.只有用相同的限制酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組

質(zhì)粒A16.(2022·河南洛陽(yáng)高二期中)已知限制性內(nèi)切核酸酶XmaⅠ和SmaⅠ的識(shí)別序列分別為C↓CCGGG和CCC↓GGG。下列有關(guān)這兩種限制酶及應(yīng)用的敘述，不正確的是()A.這兩種限制酶作用的底物都是雙鏈DNA，切開磷酸二酯鍵B.這兩種限制酶切割后形成的末端不同C.SmaⅠ切割DNA后形成的末端可用E.coliDNA連接酶連接D.使用這兩種酶時(shí)需注意控制反應(yīng)溫度、時(shí)間等C17.(2022·吉林長(zhǎng)春高二質(zhì)檢)下圖所示的酶M和酶N是兩種限制酶，圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其他堿基的種類未作注明。下列敘述中不正確的是()A.多個(gè)片段乙與丁混合在一起，可用DNA連接酶拼接得到環(huán)狀DNAB.多個(gè)片段乙與丁混合，只由兩個(gè)DNA片段連接成的環(huán)狀DNA分子共有4種C.一種限制酶只能識(shí)別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核糖核苷酸序列D.若酶M特異性剪切的DNA片段是

，則酶N特異性剪切的DNA

片段是

B18.根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：(1)限制酶切割DNA分子后產(chǎn)生的DNA片段，其末端類型通常有___________和

。(2)質(zhì)粒載體用限制酶X(識(shí)別的序列由6個(gè)核苷酸組成)切割后產(chǎn)生的片段如下：該酶識(shí)別的序列為

，切割的部位是

。