疫苗制造課件

細菌性滅活疫苗制造細菌性活疫苗制造病毒性動物組織疫苗制造

病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造疫苗制造

細菌性滅活疫苗制造

接種培養(yǎng)基濃縮佐劑菌種種子液菌液

菌苗原液滅活菌液配苗、乳化分裝檢驗

凍干接種培養(yǎng)基

保護劑弱毒菌種種子液菌液菌苗原液配苗檢驗活疫苗

細菌性活疫苗制造

佐劑種毒健康動物感染動物毒液保護劑分裝凍干活疫苗滅活病毒液乳化分裝滅活苗病毒性動物組織疫苗制造

注意事項:

動物選擇種毒常用的接種途徑觀察與收獲制苗腦內(nèi)注射靜脈注射肌肉注射皮下注射腹腔注射離心佐劑種毒雞胚收獲尿囊液濃縮病毒配苗分裝檢驗病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造

適應于雞胚的種毒包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。多為凍干毒。凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標準后方可作為生產(chǎn)疫苗的毒種,包括無菌檢測、毒價和其他項目的檢定等。種毒與毒種繼代

受精卵必須來自SPF雞群,從受精卵入孵開始至培育全過程都應保持無菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動。

5～8日齡胚適用于卵黃囊接種：9－11日齡胚用于尿囊腔接種；10～12日齡胚適于羊膜腔接種；11～13日齡胚用于絨毛尿囊膜接種。（SPF：無特定病原菌）雞胚選擇

尿囊腔：流感病毒卵黃囊接種：乙型腦膜炎病毒絨毛尿囊膜：皰疹病毒。羊膜腔接種：流行性感冒病毒、流行性腮腺炎病毒雞胚培養(yǎng)法【目的】了解用雞胚分離、培養(yǎng)病毒的基本方法。【原理】雞胚培養(yǎng)法是常用的病毒培養(yǎng)法之一，操作簡便，來源容易，本身帶病毒的情況也極為少見，一般選用白色殼薄的受精卵，主要用4種途徑接種不同部位，即絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔及卵黃囊等。多數(shù)病毒都可以在雞胚的不同部位增殖?！静牧稀?、雞受精卵、蛋架、檢卵燈、磨蛋機、透明膠紙。2、滅菌的手術刀、鑷子、剪刀、平皿、1m1注射器及6號針頭、12號針頭。3、乙型腦炎病毒液、單純皰疹病毒懸液、流感病毒稀釋液

病毒接種途徑1、尿囊腔接種法：（1）取10—11天齡雞胚，在檢卵燈下畫出氣室界限，于胚胎附近大血管處作好標記；消毒后，用滅菌刀尖打一小孔；用滅菌注射器吸取流感病毒懸液0.2m1，刺入0.5cm后，進行注射；以透明膠紙封閉注射孔，蠟筆做好標記。（2）置35℃孵箱中孵育，每日進行檢視雞胚的死活。如果雞胚在接種后24h內(nèi)死亡者，為非特異性死亡，棄之。（3）孵育3天后取出，放入4℃冰箱過夜。（4）次日取出雞胚，消毒氣室部分卵殼，用無菌剪刀去卵殼，用小鑷子撕去卵膜。以無菌毛細吸管吸取尿囊液放于無菌試管中。2、卵黃囊接種法（1）取6～8天雞胚，檢卵燈下畫出胎位和氣室，垂直放于蛋架上，氣室端向上。碘酒消毒氣室中央，刀尖錐一小孔。（2）以1ml注射器及12號針頭吸取乙型腦炎病毒液0.5ml，自小孔穿入垂直接種于卵黃囊內(nèi)，深度為3cm左右，注入標本0.2ml～0.5m1，退出注射器。膠紙封口，37℃孵育。每天檢卵并翻動2次。（3）取孵育24h以上瀕死的雞胚，于氣室端開口，用鑷子提起卵黃蒂，擠去卵黃液，用無菌生理鹽水洗去卵黃囊上的卵黃液后將卵黃囊置于無菌平皿內(nèi)，低溫保存?zhèn)溆谩?、絨毛尿囊膜接種法

（1）取12天齡雞胚，檢卵燈下標記胎位，于附近無大血管處碘酒消毒。用小鋸片在其雞胚旁無大血管處的卵殼上鋸一四方形（勿傷殼膜），同時于氣室用刀尖錐一小孔。（2）打開四邊形之卵殼，勿傷及卵殼膜，滴加滅菌生理鹽水一滴于殼膜上。用橡皮乳頭從氣室小孔吸氣，可見鹽水被吸下，絨毛膜下沉，形成人工氣室。（3）用注射器吸取0.2ml～0.5ml單純皰疹病毒液滴于絨毛尿囊膜上，膠紙封口。37℃孵育4～5天后收獲。（4）收獲：剪開氣室，如接種效果成功，絨毛尿囊膜上可見明顯疹斑。用無菌剪刀剪下此膜，置于無菌平皿內(nèi)低溫保存，備用。4、羊膜腔接種法（1）取12天雞胚，經(jīng)照視后劃出氣室，并標明胚胎位置。（2）在氣室端開方形天窗，緊捏無菌鑷子，選無大血管處，快速穿刺絨毛尿囊膜，鑷子頭進入尿囊后，再夾起羊膜，輕輕將其自絨毛尿囊膜破裂處拉出，以1ml注射器穿破羊膜，注入病毒液0.1ml～0.2ml。（3）用鑷子將羊膜輕輕送回原位，用玻璃膠紙封閉氣室端天窗，置孵箱37℃孵育。（4）培養(yǎng)3～5天后，即可收獲，經(jīng)消毒人工氣室，剪去殼膜及絨毛尿囊膜，吸棄尿囊液，夾起羊膜，用細頭毛細吸管穿入羊膜吸取羊水于小瓶中冷藏。

雞胚接種途徑主要有尿囊腔接種、羊膜腔接種、卵黃囊接種和絨毛尿囊膜接種4種。雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時間、溫度、濕度，以及收獲的標準與內(nèi)容物依不同的病毒和不同疫苗而異。接毒與收獲經(jīng)無菌檢驗合格后即可進行配苗。濕苗：

通常于雞胚液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素500～1000ul，放置0～10℃冷暗處處理后分裝。凍干苗：

按比例加入保護劑，充分混合后過濾，在濾液內(nèi)按每毫升加入青、