社區(qū)醫(yī)院檢驗專業(yè)技能培訓

2、化學學說：G+菌含有大量核糖核酸鎂鹽，與進入細胞漿內(nèi)的結(jié)晶紫和碘牢固結(jié)合成大分子復(fù)合物，不易被95％乙醇脫色，而G-菌含此種物質(zhì)少，故易被乙醇脫色。第一頁，共93頁。3、細胞壁結(jié)構(gòu)學說：G+菌細胞壁結(jié)構(gòu)較致密，肽聚糖層厚且具有三維空間結(jié)構(gòu)，脂類含量低，乙醇不易透入，而且95％乙醇可使細胞壁脫水，細胞壁間隙縮小，通透性降低，阻礙結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物滲出，而G-菌的細胞壁較疏松，肽聚糖層薄且無三維空間結(jié)構(gòu)，含脂質(zhì)量高，第二頁，共93頁。易被乙醇溶解，致使細胞壁通透性增高，細胞內(nèi)的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物被溶出而脫色。目前認為細胞壁與化學組成上的差異是染色反應(yīng)不同的主要原因。第三頁，共93頁。(二)試劑：

l、結(jié)晶紫溶液

2、革蘭碘液

3、95％乙醇

4、稀釋石炭酸復(fù)紅第四頁，共93頁。(三)操作步驟：

細菌標本涂片固定后，先用結(jié)晶紫(或龍膽紫)初染lmin；小水流沖洗后加碘液媒染1min；小水流沖洗后用95％乙醇脫色1min；小水流沖洗后稀釋復(fù)紅復(fù)染30sec，小水流沖洗后使涂片自然干燥，鏡檢。第五頁，共93頁。(四)結(jié)果判定：

1、革蘭陽性細菌：不被乙醇脫色仍保留紫色為革蘭陽性菌(G+菌)，如葡萄球菌、鏈球菌等。

2、革蘭陰性細菌：若被乙醇脫色后再被復(fù)染成紅色者，為革蘭陰性菌(G-菌)，如大腸埃希菌、傷寒沙門菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。第六頁，共93頁。(五)革蘭染色的重要實際意義：1、鑒別細菌：可將所有細菌分為革蘭陽性菌和革蘭陰性菌兩大類，有助于進一步鑒別。

2、選擇藥物的參考，臨床上可根據(jù)病原菌的革蘭染色性，考慮選擇有效的藥物進行治療。第七頁，共93頁。3、與致病性有關(guān)：許多革蘭陽性菌能產(chǎn)生外毒素，而革蘭陰性菌則大多能產(chǎn)生內(nèi)毒素，兩者致病作用不同。

第八頁，共93頁。細菌的接種方法

(一)器材：

l、接種針和接種環(huán):它們由鎳鉻合金或白金絲制成。接種環(huán)的直徑約2--4mm，一個合格的接種環(huán)是正圓形，連接端沒有空隙；接種針長50—80mm。兩者上端連接有一絕緣柄的金屬棒，全長為145mm。第九頁，共93頁。2、固體培養(yǎng)基

3、酒精燈

第十頁，共93頁。

(二)接種方法：

主要應(yīng)用平板劃線法。另外還有瓊脂斜面接種法、穿刺接種法、液體培養(yǎng)基接種法、傾注平板接種法和涂布接種法。平板劃線法分為分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法。

第十一頁，共93頁。(三)平板劃線法操作步驟：

1、接種環(huán)在火焰上滅菌。

2、用滅菌后的接種環(huán)取標本。

3、在固體培養(yǎng)基上劃線接種。

(四)判斷接種效果：要求接種后平板上劃線軌跡連續(xù)、平滑，平行的劃線之間不可重合，平板經(jīng)孵育培養(yǎng)后，應(yīng)沿劃線出現(xiàn)單個菌落。第十二頁，共93頁。室內(nèi)質(zhì)控操作步驟

(一)前期準備工作

室內(nèi)質(zhì)控分為最佳條件下的變異(OCV)和常規(guī)條件下的變異(RCV)兩種情況，前者反映實驗室最佳狀況下的質(zhì)控情況，而后者反映實驗室日常情況下的質(zhì)控情況。第十三頁，共93頁。l、最佳條件下的變異(OCV)

OCV表示本室在當前條件下該項目檢測所能達到的最好精密度水平，是本室工作水平的一個基礎(chǔ)指標。OCV測定采用與常規(guī)工作相同的檢測方法、試劑和儀器，但應(yīng)保證測定是在本室所能達到的最理想、最穩(wěn)定的情況下進行。第十四頁，共93頁。比如所用儀器等應(yīng)新近經(jīng)過校準，試劑新鮮配制，由操作熟練、富有經(jīng)驗的人員進行。在測定全過程中應(yīng)盡量控制溫度、光照、反應(yīng)時間等一切可能影響測定結(jié)果的因素。第十五頁，共93頁。選擇瓶間差小、穩(wěn)定性良好的質(zhì)控品，每天做4、5批測定，每批一瓶質(zhì)控品，在4、5天內(nèi)即可得到至少20份數(shù)據(jù)，分別計算其、S、CV值，此CV值即為OCV。所測得的OCV綜合表達了批間和日間精密度。第十六頁，共93頁。2、常規(guī)條件下的變異(RCV)RCV表示本室在當前條件下常規(guī)工作中該項目檢測的精密度水平。RCV的測定方法與對應(yīng)的OCV測定方法相似。不同點僅在于測定RCV時應(yīng)使用與常規(guī)工作完全相同的條件，而不要有任何特殊對待。第十七頁，共93頁。即應(yīng)當把質(zhì)控品完全當成病人標本，每天由該項目常規(guī)檢測的操作者將它隨病人標本同批檢測，以便真實反映常規(guī)檢測的精密度。在常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制工作中，每更換一次質(zhì)控品的批號，第十八頁，共93頁。均應(yīng)對新批號的質(zhì)控品進行RCV測定。RCV是常規(guī)條件下的變異，是日間精密度的表達指標。因此，測定時質(zhì)控品必須保證使用和標本相同的處理條件，而且每天要重新啟用一瓶，并只測一次。第十九頁，共93頁。20個數(shù)據(jù)要來自20天測定。一天內(nèi)測多個數(shù)據(jù)，甚至一批內(nèi)測多個數(shù)據(jù)，或每天將一瓶質(zhì)控品分成若干份，測定后求均值作為當天的數(shù)據(jù)等做法均是錯誤的。這樣得出的RCV往往比真實情況要小一些。RCV的計算方法與OCV完全相同。第二十頁，共93頁。3、室內(nèi)質(zhì)量控制工作的進行

完成了OCV和RCV的測定和計算后，根據(jù)計算出的靶值和允許誤差范圍等數(shù)據(jù)繪制質(zhì)控圖，然后正式開始常規(guī)工作中的室內(nèi)質(zhì)量控制，每天隨常規(guī)標本對該批質(zhì)控品進行測定，并將結(jié)果畫在基于RCV測定得到的質(zhì)控圖上。第二十一頁，共93頁。特別要注意的是，根據(jù)RCV繪制的質(zhì)控圖對于同一批號質(zhì)控品是不變的，它與每個月常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制工作中所得到的數(shù)值無關(guān)。第二十二頁，共93頁。(二)室內(nèi)質(zhì)控的實際操作

設(shè)定質(zhì)控圖的中心線(均值)

(1)暫定中心線(均值)的確定

在開始室內(nèi)質(zhì)控時，首先要建立質(zhì)控圖的中心線(均值)。均值必須在實驗室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測定方法進行確定。第二十三頁，共93頁。定值質(zhì)控品只能作為確定中心線的參考，不能用質(zhì)控品上標明的量作為均值。為了確定中心線，新批號的質(zhì)控品應(yīng)與當前使用的質(zhì)控品一起進行測定。根據(jù)20或更多批獲得的質(zhì)控測定結(jié)果，對數(shù)據(jù)進行離群值檢驗(剔除超過3s外的數(shù)據(jù))，計算平均值，作為暫定中心線(均值)。第二十四頁，共93頁。此暫定中心線作為下一個月室內(nèi)質(zhì)控圖的中心線(均值)進行室內(nèi)質(zhì)控；一個月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個質(zhì)控測定結(jié)果匯集在一起，計算累積平均值(第一個月)，以此累積的平均數(shù)作為下一個月質(zhì)控圖的中心線(均值)。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)3—5個月。第二十五頁，共93頁。(2)常規(guī)中心線(均值)建立

以最初20個數(shù)據(jù)和3--5個月在控數(shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)計算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品在有效期內(nèi)的常規(guī)中心線(均值)，并以此作為今后室內(nèi)質(zhì)控的中心線(平均值)。第二十六頁，共93頁。對個別在有效期內(nèi)濃度水平不斷變化的項目，則需不斷調(diào)整中心線(均值)。

第二十七頁，共93頁。(二)設(shè)定控制限

對新批號質(zhì)控品應(yīng)確定控制限，控制限通常以標準差倍數(shù)表示。

1、穩(wěn)定性較長的質(zhì)控品

(1)暫定標準差的設(shè)定操作過程與設(shè)定中心線(均值)過程基本相同，只是計算公式不同。第二十八頁，共93頁。(2)常規(guī)標準差的設(shè)定(同上)

以前的標準差是幾個月數(shù)據(jù)的簡單平均或者是累積的標準差。標準差等于平均數(shù)乘以變異系數(shù)。第二十九頁，共93頁。2、控制限的確定

通常以標準差的倍數(shù)表示控制限。在日常測定中，連續(xù)測定同一批號的質(zhì)控血清20天以上或一個月，求出均值和標準差，再確定質(zhì)控上限(UCL)和質(zhì)控下限(LCL)。第三十頁，共93頁。(三)室內(nèi)質(zhì)控的具體操作程序

以均值-標準差(X-SD)質(zhì)控圖為例：

1、目的：監(jiān)測分析的精密度。

2、方法：每天將質(zhì)控品隨病人標本在相同的條件下(環(huán)境、儀器、試劑和操作者)進行測定，并將測定結(jié)果描繪在事先做好的質(zhì)控圖上。第三十一頁，共93頁。三分類血細胞分析儀(COULTERSTKS血細胞分析儀)(一)工作原理

運用電阻抗原理測量細胞大小和對細胞進行計數(shù)，用比色法來測定血紅蛋白，通過VCS技術(shù)對白細胞系統(tǒng)進行分類計數(shù)。第三十二頁，共93頁。(二)操作方法

分兩種模式：手工操作模式和自動進樣模式。

1、手工操作模式：檢查各種試劑存量→啟電源→STARTUP沖洗儀器→檢查儀器空白背景是否正常*→儀器準備就緒→用質(zhì)控品操作檢查各參數(shù)是否在控**→輸入樣本條型碼號→將樣本插入吸樣針內(nèi)→第三十三頁，共93頁。按START→分析開始，結(jié)束→準備就緒→分析后檢查試劑→按SHUTDOWN運行關(guān)機程序→關(guān)閉電源。第三十四頁，共93頁。2、自動進樣模式：檢查各種試劑存量→開啟電源→按STARTUP沖洗儀器→檢查儀器空白背景是否正常*→儀器準備就緒→用質(zhì)控品操作檢查各參數(shù)是否在控**→設(shè)置樣本號和條形碼號→將樣本放入試管架內(nèi)→第三十五頁，共93頁。將試管架放入進樣池中→按START→分析開始，結(jié)束→準備就緒→分析后檢查試劑→按SHUTDOWN運行關(guān)機程序→關(guān)閉電源。第三十六頁，共93頁。說明：

*一般要求WBC≤0．2*109／L，RBC：<005*1012／L，Hb<01．Og/L，PLT<10*109／L，未達要求清洗后重測。

**按照均值+SD法進行評價。第三十七頁，共93頁。(三)保養(yǎng)與維護

l、每日保養(yǎng)

(1)開機后檢查儀器電壓是否正常。

(2)儀器溫度要保持在20攝氏度以上；中午休息前做DRAINF12，讓殘留在小孔后少量廢血排除，然后做PRIMEAPERTURE，重新沖洗管道即可，一般中午可不關(guān)機。第三十八頁，共93頁。(3)關(guān)機時必須先關(guān)SHUTDOWN，然后再關(guān)機。

(4)及時清洗吸樣針及廢液槽積血。

(5)及時清潔儀器表面灰塵。

第三十九頁，共93頁。2、每月保養(yǎng)。

(1)清洗分血片

(2)清洗計數(shù)孔

①準備飽和NaClO溶液，l：1稀釋。

②在主機鍵盤上按DRAIN，然后拿注射器吸入NaClO溶液，分別注入紅／白計數(shù)池各10ml，浸泡5-10分鐘后，按F12，DRAIN，按APERTUREPRIME,然后做一個血樣，再按STARTUP。第四十頁，共93頁。(3)清洗過濾網(wǎng)

(4)清洗管道

第四十一頁，共93頁。3、每季度保養(yǎng)

(1)打開分析儀前面的門檢查儀器內(nèi)管路和閥門周圍是否有鹽類結(jié)晶殘跡。

(2)用蒸餾水清洗去掉鹽類結(jié)晶然后仔細擦干，如有必要清洗系統(tǒng)的兩個樣杯。第四十二頁，共93頁。4、年度保養(yǎng)

年度維修保養(yǎng)只能由COULTER當?shù)氐腃OULTER代理商指定的維修工程師來進行,年度保養(yǎng)包括：

(1)檢查HgB光電比色計燈的狀況并清洗比色通道。

(2)檢查真空壓力。

第四十三頁，共93頁。(3)檢查起點和重點液面的準確性。

(4)檢查閥門的狀況。

(5)檢查管路系統(tǒng)的狀況。

(6)清洗儀器內(nèi)部積塵。

(7)檢查所有電子部分。

(8)檢查或更換一些關(guān)鍵部分管道。

(9)更換液體過濾器。第四十四頁，共93頁。(10)更換儀器稀釋部分的接頭。

(11)檢查清洗稀釋部分的旋轉(zhuǎn)閥

(12)更換進樣器的針頭。

第四十五頁，共93頁。(四)室內(nèi)質(zhì)控

1、質(zhì)控物選擇

由各儀器公司提供，與儀器配套的全血質(zhì)控品。

2、質(zhì)控方法

按照常規(guī)質(zhì)控方法進行或啟用儀器內(nèi)部的X—B質(zhì)控流程。第四十六頁，共93頁。尿分析儀操作程序

(一)尿干化學試帶結(jié)構(gòu)和檢測原理

試紙條采用了多層膜的結(jié)構(gòu)，第一層尼龍膜起保護作用，防止大分子物質(zhì)對反應(yīng)的污染；第二層絨制層可破壞維生素C等干擾物質(zhì)；第三層是固有試劑的吸水層(即反應(yīng)層)，可使尿液均勻地浸入，第四十七頁，共93頁。與固定在本層物質(zhì)上的化學物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，并能抑制尿液流到相鄰反應(yīng)區(qū)；最后一層選取尿液不浸潤的塑料片作為支持物。第四十八頁，共93頁。(二)尿分析儀工作原理

儀器由機械系統(tǒng)、光學系統(tǒng)和電路系統(tǒng)三部分組成。機械部分主要功能是將待測的試紙條傳送到位，再將檢測后的試紙條排進廢物盒。光學系統(tǒng)通常包括光源、單色處理和光電轉(zhuǎn)換三部分。第四十九頁，共93頁。光線照射到反應(yīng)區(qū)的表面產(chǎn)生反射光，反射光的強度與各個項目的反應(yīng)顏色成正比。不同強度的反射光再經(jīng)光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為電信號進行處理。然后電路系統(tǒng)將轉(zhuǎn)換后的電信號放大，經(jīng)模/數(shù)轉(zhuǎn)換后送到CPU處理，計算第五十頁，共93頁。出最終檢測結(jié)果，然后將結(jié)果輸出到屏幕顯示并送打印機打印出報告。其中CPU不僅負責檢測數(shù)據(jù)的處理，還控制整個儀器機械，光學系統(tǒng)的運作，并通過軟件實現(xiàn)多功能操作。第五十一頁，共93頁。反射率計算公式:

R(%)=(Tm*Cs/Ts*Cm)*100%第五十二頁，共93頁。Tm：

試劑塊對測定波長的反射強度

Ts：

試劑塊對參考波長的反射強度

Cm：

標準塊對測定波長的反射強度

Cs：

標準塊對參考波長的反射強度第五十三頁，共93頁。尿液分析儀測試原理的本質(zhì)是光的吸收和反射。試劑塊顏色的深淺對光的吸收、反射不一樣。顏色越深，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率越小;反之，顏色越淺，吸收光量值越小，反射光量值越大，第五十四頁，共93頁。反射率也就越大。換句話說，特定試劑塊顏色的深淺與尿液樣本中特定的化學成分濃度成正比。第五十五頁，共93頁。(三)操作程序

1、打開電源開機進入測試界面。2、將室內(nèi)質(zhì)控品均勻滴在測試條上，放在儀器標本架上，進行檢測，符合要求(不超過±2+的范圍)，可開始病人標本的檢測：否則尋找原因。3、將尿液均勻滴加在測試條上，并沾去多余尿液。第五十六頁，共93頁。4、將測試條放入儀器，儀器自動測試并打印報告。

5、如白細胞、紅細胞、亞硝酸鹽及蛋白陽性四項檢查中有任何一項呈陽性結(jié)果，則需鏡檢。

6、將儀器結(jié)果及鏡檢結(jié)果報告一起發(fā)送。

7、關(guān)機。第五十七頁，共93頁。(四)室內(nèi)質(zhì)控

1、質(zhì)控物的選擇

多數(shù)采用人工尿液加入標準物作為質(zhì)控物。實踐證明：對于尿糖、尿蛋白、血紅蛋白和白細胞基本能滿足要求；但對于尿膽紅質(zhì)、尿膽原就不甚滿意。配制后不能久放等原因，所以有的學者采用濃縮尿質(zhì)控物，能得到較好效果。第五十八頁，共93頁。2、質(zhì)控步驟

首先應(yīng)將質(zhì)控物放入室溫，使其溫度與室溫一致，否則會因溫度影響使部分結(jié)果偏低。每次必須使用“正?！焙汀爱惓！眱煞N濃度的質(zhì)控物進行試驗：一天內(nèi)最好使用同一份質(zhì)控標本。第五十九頁，共93頁。3、結(jié)果分析

如果質(zhì)控物的“正?！苯Y(jié)果變成“異常”結(jié)果或“異?！苯Y(jié)果變成“正?！苯Y(jié)果，均為失控?；蛘哔|(zhì)控物某一模塊的測定結(jié)果超過靶值正負1和等級，即±2以上(含±2)也為失控。第六十頁，共93頁。生化分析儀操作程序

(一)以日立7960為例

1、開電源開機儀器進入開機程序(儀器自檢、清洗探針等)。

2、進入主界面。

3、根據(jù)需要查看試劑量，運行加試劑程序加入測試試劑，加入后再次查看新試劑量。第六十一頁，共93頁。4、新批號試劑需要定標，進入定標程序，選擇項目、定標液測試位置進行定標。

5、每日質(zhì)控，根據(jù)測試項目選擇質(zhì)控，可選高、中低值，進入質(zhì)控操作程序，選擇項目、質(zhì)控品測試位置開始測試，第六十二頁，共93頁。測試后查看結(jié)果，是否在控制范圍內(nèi)(一般為標準值±2SD)，如不在控，需要分析失控原因重新測定，達到標準方可測定病人標本。

6、病人樣本檢測：將離心后的病人標本放入測試架，進入測第六十三頁，共93頁。試界面，輸入標本編號、標本位置、測試項目，按測試鍵開始測試，同時在中文電腦中輸入病人信息(編號、姓名、年齡、性別、科室等)，注意儀器與中文電腦的病人編號及信息相對應(yīng)。

第六十四頁，共93頁。7、審核結(jié)果:對結(jié)果進行審核分析，如發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果需要重復(fù)測定，并標明結(jié)果為重復(fù)測定結(jié)果，審核無誤后發(fā)送化驗單

8、測試結(jié)束后取出試劑，清洗儀器，進入關(guān)機程序關(guān)機，程序結(jié)束后關(guān)閉電源。第六十五頁，共93頁。(二)以日立7170生化分析儀為例：

1、特別注意在開機自檢時、在定標、測定時，請不要進行以下操作：(1)打開或關(guān)閉標本盤2的蓋：(2)添加1D1或2D1：(3)添加或移動試劑盤Rl或R2中的試劑。第六十六頁，共93頁。2、開機及儀器狀態(tài)的確認

(1)光度計的檢查(每天一次)，選主菜單MAINT／UTILITY

(2)選Maintenance，選PhotometerCheck，選Select。

(3)選Start打印出檢查結(jié)果。

(4)檢查打印結(jié)果：與上次相比不應(yīng)有較大的增加。第六十七頁，共93頁。3、準備試劑

(1)選REAGENT查看各試劑是否足夠;

(2)添加了試劑后，選Level(讓儀器測試試劑剩余量)。

(3)打開儀器左前門：添加清洗反應(yīng)杯用的清洗劑(1NNaOH)。第六十八頁，共93頁。4、檢查校準品和質(zhì)控樣品是否足夠。

5、一般樣品輸入及確認

(1)逐個樣品輸入：選

WORKPLACE．選NormalTs。

1)在Sample#輸入標本順序號(1-10000)，規(guī)定周一：從1001開始，周二：從2001開始，……體檢標本：9001開始。第六十九頁，共93頁。2)輸入標本盤號：數(shù)字1—9任選。

3)輸入標本的位置號：數(shù)字l-

100。

4)輸入項目。

5)然后Enter鍵

6)重復(fù)(5)一(6)進行下一標本項目的輸入。第七十頁，共93頁。(2)批量輸入：第一個標本按上述(1)一(4)輸入選RepeatTS在LastSample#輸入要重復(fù)項目的最后樣品號，按Enter鍵。

(3)輸入樣品的修改或確認：在Sample#輸入標本順序號，(顯示已輸入樣品的項目)確認或修改后，按Enter或Next顯示下一個樣品。第七十一頁，共93頁。6、標本的放置：1-100放一般樣品；E101-E110放急測樣品；可用7170的樣品杯；或上層至少有5mm不含纖維蛋白的血清和標本高度不低于5mm的試管：也可用RA的樣品杯，但要小心放置，不能放到底。第七十二頁，共93頁。7、校正、質(zhì)控及分析樣品

(1)選主菜單的START，在StartSample#打入開始測定的樣本號(1—10000)。

(2)如果要先進行校正：在CalibrationStartup處選Yes(要先設(shè)定項目等)。(3)如果要先對個別項目進行重新校正：在cafibrationReCalib處選Yes(要先設(shè)定項目等)。第七十三頁，共93頁。(4)如果要先測質(zhì)控標本：在ControlStartup處選Yes。

(5)如果要對超過設(shè)定范圍的項目進行自動稀釋重測：在Rerun(Normal)處選Auto，(接著可選實時或批量重測)，然后按右下角的Start。第七十四頁，共93頁。8、在測定過程中需要停止：

(1)按s．stop則停止加樣，等待已加樣的樣品檢測結(jié)果。

(2)按stop則停止所有操作，已加樣的標本檢測無效。

第七十五頁，共93頁。9、在操作中進行急診樣品的測定

(1)在樣品盤1的急查樣品位置(。E101-E110)上放急查的樣品。

(2)選WORKPLACE，選StatTS，在Position處輸入放置樣品的位置號(101—110)。

(3)選項目鍵(輸入急測項目)，然后按Enter鍵。急測樣品會自動優(yōu)先測定并打印。第七十六頁，共93頁。10、測定結(jié)果的確認

用于審核測定結(jié)果及反應(yīng)過程(反應(yīng)曲線)，整批傳送測定結(jié)果。

測定結(jié)果的審核。

(1)選WORKPLACE，選DataReview。

(2)左邊為樣品編號及其它信息，右邊為該樣品的測定結(jié)果。第七十七頁，共93頁。(3)可以選ReactionMonitor(反應(yīng)曲線)，加以確認。

11、關(guān)機及保養(yǎng)

完成所有檢測，解決操作中出現(xiàn)的問題，添加好必要的試劑，進行每日的保養(yǎng)，關(guān)閉電源。第七十八頁，共93頁。酶聯(lián)免疫技術(shù)操作

(一)儀器、

1、吸頭和微量移液器

2、洗板機

3、37℃孵育箱

4、酶標儀第七十九頁，共93頁。(二)常規(guī)操作步驟：

1、操作步驟：

(1)標本編號、離心，1500r／min，15min。

(2)取出試劑盒，包括陰性和陽性對照品，檢查試劑盒有無破損，是否在使用有效期內(nèi)。第八十頁，共93頁。(3)在室溫環(huán)境里平衡溫度30min。

(4)打開試劑盒，取出酶標板，按照說明書規(guī)定的步驟進行操作。(5)根據(jù)操作要求將待測血清原液或用稀釋液做適當稀釋(一般1：10到1：100)，每孔加100l血清，依次加樣。第八十一頁，共93頁。(6)將96孔板用蓋蓋好，放進37℃恒溫箱，1h。

(7)取出酶標板放進自動洗板機，進行洗滌。或者手工洗滌。

(8)每孔加入最適濃度的HRO標記抗體100l。

(9)將96孔板用蓋蓋好，放進37℃恒溫箱，1h。第八十二頁，共93頁。(10)取出酶標板放進自動洗扳機，進行洗滌?；蛘呤止は礈?。(11)每孔加入底物溶液100l。(12)將96孔板用蓋蓋好，放進37℃恒溫箱，15-30min。

(13)取出酶標板每孔加入2mol／LH2SO450l終止反應(yīng)。第八十三頁，共93頁。(14)用底物溶液(空白對照)校正酶標儀零點。

(15)于492nm處測各孔的光密度(吸光度OD值)。

(16)每批試驗均應(yīng)設(shè)陽性和陰性對照孔。第八十四頁，共93頁。2、結(jié)果判斷：目前無統(tǒng)一方法，常用的有：

(1)以P／N比值≥2．1，即以

待