標準病理組織制片和染色技術

（優(yōu)選）標準病理組織制片和染色技術現(xiàn)在是1頁\一共有117頁\編輯于星期五

近年來病理技術不斷發(fā)展，如特殊染色、組織化學、免疫組織化學（免疫熒光組織化學、免疫酶組織化學）細胞培養(yǎng)、原位分子雜交、放射自顯影、原位PCR技術等在廣泛的應用和提高，大大促進了病理學科的發(fā)展，把病理學推進了一個新的領域，但這些新技術也都建立在病理組織制片或染色基礎上，所以要認識制片和染色技術的重要性，不但要學習新技術，更要掌握這一傳統(tǒng)的病理技術，共同推向病理學科的發(fā)展。

現(xiàn)在是2頁\一共有117頁\編輯于星期五

組織制片技術的應用，從1665年由Hook發(fā)現(xiàn)細胞開始已300多年歷史，最早應用冰凍切片隨后又發(fā)展了石蠟切片，后來又利用明膠、火棉膠、碳蠟（聚乙二醇）、塑料、包埋組織而制作切片。

現(xiàn)在是3頁\一共有117頁\編輯于星期五

從而觀察不同的組織、細胞的形態(tài)結(jié)構，以及細胞內(nèi)某些化學成份含量變化。

現(xiàn)在是4頁\一共有117頁\編輯于星期五各種組織制片成切片標本，須要經(jīng)過一個比較繁多的過程，現(xiàn)將制作切片的主要程序和制片的種類，介紹：現(xiàn)在是5頁\一共有117頁\編輯于星期五組織取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、粘片、烤片、脫蠟、各級酒精、水洗、常規(guī)染色、脫水、透明、樹膠封固。石蠟制片程序現(xiàn)在是6頁\一共有117頁\編輯于星期五冰凍制片程序組織取材、冰凍切片、干燥粘片、固定、染色、脫水、透明、樹膠封片?，F(xiàn)在是7頁\一共有117頁\編輯于星期五非切片（了解內(nèi)容）1

整體封藏法－低等動物自身薄片如：魚鱗片、蛙胚。2

涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹水等3、磨片法－主要用有鈣鹽堅硬材料，牙齒、介殼、堅骨－手工磨4分離法a、壓片法－動終板的制備b、撕碎法c壓碎法現(xiàn)在是8頁\一共有117頁\編輯于星期五二、取材（實驗病理、臨床病理、尸解診斷）現(xiàn)在是9頁\一共有117頁\編輯于星期五1、實驗病理取材動物的殺死：動物殺死方法很多，根據(jù)動物大小、種別、觀察目的而定。

現(xiàn)在是10頁\一共有117頁\編輯于星期五A：斷頭法：青蛙、小鼠等較小的動物B：空氣栓塞法：兔貓（20－40ml）狗100mlC：麻醉法：乙醚、氯仿、4%巴比妥作V注射1ml/1kg，20%氨基甲酸乙酯（尿烷）作腹腔注射5ml/1kgD：擊頭法：大鼠

現(xiàn)在是11頁\一共有117頁\編輯于星期五E：放血法：眼球放血（小鼠）股動脈放血，大動物：牛、豬原則：要盡避免使動物長時間陷入痛苦和瀕于死亡狀態(tài)，以免疫組織成份，結(jié)構發(fā)生變化，引起病理假象。

現(xiàn)在是12頁\一共有117頁\編輯于星期五(1)取材時所用的刀要銳利，動作仔細，不可來回切割，勿使組織受擠壓。

(2)注意組織，器官的切面：腎臟——縱切腦——（表面和腦溝成直角）垂直切肝脾——橫縱均可現(xiàn)在是13頁\一共有117頁\編輯于星期五

（3）保持組織清潔：血液，污物，粘液，食物用生理鹽水洗凈。（4）保持標本新鮮：動物死后立即固定。

(5)切取組織大?。?.5×0.5×0.2cm1×1×0.3cm1.5×1.5×0.5cm現(xiàn)在是14頁\一共有117頁\編輯于星期五2.臨床活檢取材：注意事項：（1）

申請單位姓名與標本一致，防止混亂差錯。（2）

檢查標本是否符合要求—干涸壞變，固定液多少。（3）

取材時描寫：大小，形態(tài)，色澤，硬度等。（4）

芝麻或針帽大小組織——染伊紅？：鏡紙包好（5）

常見腫瘤取材方法：略?，F(xiàn)在是15頁\一共有117頁\編輯于星期五3.尸體解剖組織（臟器）取材：略?，F(xiàn)在是16頁\一共有117頁\編輯于星期五三．固定（fixalion）固定：新鮮組織浸泡在適宜的化學試劑內(nèi)借助于化學試劑的作用，使組織或細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝聚，沉淀，成為溶性并保持組織細胞原有的形態(tài)結(jié)構：稱為固定。所使用的化學試劑配成的溶液，稱為固定液?，F(xiàn)在是17頁\一共有117頁\編輯于星期五1.固定的目的(1)迅速防止組織細胞死后自溶和腐敗（組織失氧→釋放溶酶體酶→溶解組織）(2)固定或沉淀細胞內(nèi)或組織液中蛋白，脂肪，糖原，無機鹽和色素，使其不被溶解和消失。(3)使組織硬化，有一定彈性→抵抗以后的脫水，透明，使組織發(fā)生扭曲，變形?，F(xiàn)在是18頁\一共有117頁\編輯于星期五(4)某些傳染性標本，能防止疫病的擴散。（如結(jié)核等）

(5)保存細胞內(nèi)固有的物質(zhì)：如包含體，線粒體，溶酶體等。

(6)可增強染色作用

(7)有利于各種細胞折光率。(8)固定后能產(chǎn)生良好的反差。現(xiàn)在是19頁\一共有117頁\編輯于星期五2、固定的注意事項：(1)必須及時固定：夏天4h冬天24h就自溶。(2)固定液的用量：標本體積10－15倍。(3)固定時間：根據(jù)組織不同的種類、性質(zhì)大小、固定液的種類而定。(4)固定用的容器要足夠大，一般標本缸，廣口瓶現(xiàn)在是20頁\一共有117頁\編輯于星期五4、固定液的分類、配制和特性（1）分類A：凝固性－酒類、丙酮、氯化汞等非凝固性－甲醛、戌二醛等B：醛類－甲醛、戌二醛氧化劑類－重鉻酸鉀、高猛酸鉀蛋白質(zhì)變性－酒精、苦味酸C：單純固定液-10%甲醛95%乙醇混合固定液-Boon’sConroy’s現(xiàn)在是21頁\一共有117頁\編輯于星期五(2)常用固定液的配制及性質(zhì)：A：10%甲醛-應用廣泛(注：36-40%作為活檢、尸解、一般形態(tài)學觀察常用)優(yōu)點：刺激性氣味、對組織滲透力強、固定均勻、能保存脂類（神經(jīng)、髓鞘、高爾基體、線粒體、糖類保存）價格便宜、配制簡單、使用方便。缺點：固定久產(chǎn)生色素圖附

現(xiàn)在是22頁\一共有117頁\編輯于星期五10%中性甲醛(ph7.3-7.6)濃甲醛100ml自來水900ml(組織化學、免疫組化、保存抗原)10%中性緩沖甲醛(ph7.0)濃甲醛100ml蒸餾水900mlNaH2po4H2o4gNa2Hpo46.5現(xiàn)在是23頁\一共有117頁\編輯于星期五B：酒精優(yōu)點：固定又脫水：保存糖原，尿酸鹽。（脫落細胞、培養(yǎng)細胞也常用）缺點：滲透力強-組織表層固縮現(xiàn)在是24頁\一共有117頁\編輯于星期五C：丙酮：用于酸的固定(磷酸酶、胰酶、氧化酸)收縮劇烈，揮發(fā)、易燃、與水、醇、氯仿、醚混合現(xiàn)在是25頁\一共有117頁\編輯于星期五混合固定液FAA：濃甲醛100ml95%酒精850ml冰醛醋58ml(收縮小、核染色質(zhì)固定好)Bouln`s液：苦味酸飽和液75ml濃甲醛75ml冰醋酸5ml(對組織收縮小，固定均勻、保存細微結(jié)構、軟化皮膚、肌健、結(jié)締組織較好)現(xiàn)在是26頁\一共有117頁\編輯于星期五3、固定的原理甲醛為例，甲醛與組織蛋白反應是多樣而復雜的。PCONH+HCH+P-CONHOP-CON---C----P--CONHH亞甲基橋肽鍵甲醛蛋白質(zhì)分子之進行交換，形成亞甲基橋，把蛋白質(zhì)分子串聯(lián)起來，使蛋白變性，破壞了蛋白質(zhì)的立體結(jié)構，達到固定目的?，F(xiàn)在是27頁\一共有117頁\編輯于星期五四、洗滌

組織在固定后，一定要把滲透到里面的固定液(沉淀物或結(jié)晶)洗去，然后再進行下一步程序，洗滌必須徹底，否則留在組織中的固定液有可能妨礙染色。

現(xiàn)在是28頁\一共有117頁\編輯于星期五洗滌的原則：1、固定液為乙醇或酒精混合液一般不要沖洗。2、固定液為水配制者，用水流水沖洗3、凡含有鉻酸、重鉻酸鉀的固定液-洗滌4、含有苦味酸用乙醇配制的固定液-洗滌現(xiàn)在是29頁\一共有117頁\編輯于星期五5、含有氯化汞固定液-沖洗-碘液去汞(zenker’s)-5%硫化硫酸鈉去碘6、洗滌時間大動物組織8h以上、小動物組織2-8h洗滌方法：流水沖洗

現(xiàn)在是30頁\一共有117頁\編輯于星期五五、脫水脫水就是利用某些化學試劑與水混合內(nèi)的水份徹底脫除。要求：1、脫水劑能與水任何比例混合2、脫水劑也能與透明劑混合3、脫水要徹底否則無法進行透明4、低濃度-高濃度循序進行(酒精是依次遞增、水是級差遞減)常用的各級酒精梯度，達到脫水目的【60%70%80%90%100%I100%Ⅱ】

現(xiàn)在是31頁\一共有117頁\編輯于星期五乙醇結(jié)構式CH3

·CH3·OH水的結(jié)構式H2O···H---O···H---O···H---O···H---O···H---HRHR乙醇的羥基（－OH）和水形成氫鍵，水分子與乙醇分子逐步締合在一起。乙醇與水相混容的原理：現(xiàn)在是32頁\一共有117頁\編輯于星期五常用的脫水劑1、

酒精：特點：能力強，使組織硬化，和二甲苯互溶。缺點：使組織收縮，變脆。2、

丙酮：比酒精脫水強，收縮厲害。臨床病理用于快速脫水3、

二氧陸環(huán)：有毒性，既脫水又透明使組織收縮小不硬化4、

正丁醇：有毒性，既脫水又透明皮膚、骨叔丁醇發(fā)松子醇5、

脫水時間：根據(jù)組織大小、類別、種屬、分別安排現(xiàn)在是33頁\一共有117頁\編輯于星期五六、透明(clearing)組織經(jīng)脫水后，不能直接浸入石蠟中，還要一個媒劑透明過程。透明劑既可與脫水劑相混合又能和石蠟相混合，起到橋梁作用，當組織中全部被透明劑點有時，光線可以透過呈現(xiàn)透明狀態(tài)-稱組織透明。

現(xiàn)在是34頁\一共有117頁\編輯于星期五常用的透明劑1、

二甲苯：易揮發(fā)、易燃、透明力強、收縮、變脆(能與無水乙醇相混合，又能與石蠟相混合，作兩組透明。)2、

氯仿：比二甲苯透明力強，不收縮、變脆。時間長24h，收縮小3、

苯：甲苯和二甲苯相同。易揮發(fā)、易燃、有毒性香柏油現(xiàn)在是35頁\一共有117頁\編輯于星期五苯甲酸甲酯-收縮小、時間12∽24h，常用為火棉膠切片俄甘油苯酚現(xiàn)在是36頁\一共有117頁\編輯于星期五透明時間：眼觀組織呈透明狀態(tài)小組織10min中組織20-40min大組織1-2h(如果組織不透明1、脫水未盡2、組織太厚3、時間不夠)現(xiàn)在是37頁\一共有117頁\編輯于星期五七、浸蠟（Infilftrition）

組織經(jīng)過媒劑的透明作用后，移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬稱為浸蠟。

現(xiàn)在是38頁\一共有117頁\編輯于星期五１、石蠟：切片蠟___軟蠟50℃以下，酶，保存抗原活性(純度高密度好)硬蠟50℃以上-62∽64℃工業(yè)石蠟___質(zhì)地較差，價格便宜純度低，熔點不準確2、根據(jù)組織的不同選用：60∽62℃-----皮膚、骨組織、硬纖維瘤58℃以下----作免疫組化酶

現(xiàn)在是39頁\一共有117頁\編輯于星期五3、恒溫箱溫度一般高于石蠟熔點4∽5℃4、浸蠟可分三級軟蠟54---56℃硬蠟58---60℃硬蠟60—62℃現(xiàn)在是40頁\一共有117頁\編輯于星期五5、脫水、透明、浸蠟時間表小動物組織（鼠）脫水、透明和浸蠟時間表程序項目時間分配75%乙醇時間長短均可85%乙醇2－5h95%乙醇2－5h95%乙醇2－5h無水乙醇20min無水乙醇30min無水乙醇30min二甲苯15min二甲苯30min二甲苯30min石蠟56－58℃30min石蠟56－58℃30min石蠟60－62℃1－2h現(xiàn)在是41頁\一共有117頁\編輯于星期五5、脫水、透明、浸蠟時間表外檢組織脫水、透明和浸蠟時間表程序項目時間分配85%乙醇時間長短均可95%乙醇1－2h95%乙醇1－2h95%乙醇1－2h無水乙醇1－2h無水乙醇1－2h無水乙醇1－2h二甲苯1h二甲苯1－2h二甲苯1－2h石蠟56－58℃1－2h石蠟56－58℃1－2h石蠟60－62℃2－4h現(xiàn)在是42頁\一共有117頁\編輯于星期五5、脫水、透明、浸蠟時間表尸體解剖組織脫水、透明和浸蠟時間表程序項目時間分配75%乙醇時間長短均可85%乙醇5－10h95%乙醇5－10h95%乙醇5－10h無水乙醇2－5h無水乙醇2－5h無水乙醇2－5h二甲苯30min左右二甲苯1－2h二甲苯1－2h石蠟56－58℃1－2h石蠟56－58℃1－2h石蠟60－62℃2－4h現(xiàn)在是43頁\一共有117頁\編輯于星期五5、脫水、透明、浸蠟時間表大動物組織脫水、透明和浸蠟時間表程序項目時間分配75%乙醇時間長短均可85%乙醇2－5h95%乙醇2－5h95%乙醇2－5h無水乙醇30min無水乙醇30min無水乙醇1－2h二甲苯30min二甲苯30min二甲苯1h左右石蠟56－58℃30min石蠟56－58℃1－2h石蠟60－62℃2－3h現(xiàn)在是44頁\一共有117頁\編輯于星期五八、包埋（Emledding）

組織經(jīng)過固定、脫水、透明、后再用石蠟鑄成蠟塊稱包埋。1.埋石蠟的要求：(1)盡可能和浸蠟熔點一致(2)南方：58∽62℃北方：52∽58℃2.方法：

現(xiàn)在是45頁\一共有117頁\編輯于星期五3.

(1)最大平面向下壓平(2)管狀束壁皮膚豎埋(3)包埋石蠟溫度高于石蠟熔點5∽7℃(4)石蠟凝固后打開蠟框修整蠟塊(5)貼好標簽現(xiàn)在是46頁\一共有117頁\編輯于星期五九、石蠟切片法

1.切片前的準備工作：(1)

切片機A：輪轉(zhuǎn)切片機B：平推式切片機(2)

刀片(刀)一次性刀片或切片刀(磨刀)(3)

清潔的載玻片(4)甘蛋白油、白膠、毛筆、鈣子

現(xiàn)在是47頁\一共有117頁\編輯于星期五2.切片制作過程(實習)注意事項：a)

切片厚度：5um(鏡下4∽6um)b)

刀片要鋒利否則會出現(xiàn)卷片、起皺、不連結(jié)、破碎不完整。c)

刀與組織的角度4∽6℃d)

各個部件，螺絲應旋緊否則震動切片厚薄不均。現(xiàn)在是48頁\一共有117頁\編輯于星期五一、染色的目的病理學的各種切片，都必須應用一種以上的染料通過不同的方法將切片的各種不同的組織結(jié)構給予顯示出來，以利于鏡下辨別其各種不同的形態(tài)，做出正確的診斷。十、染色現(xiàn)在是49頁\一共有117頁\編輯于星期五二、染色的作用

1、化學作用：染液中的陰陽離子與組織中的陰陽離子相互作用所完成的染色。染液中有酸性和堿性染料之分，酸性染料有染色作用的部分是陰離子，而堿性染料有染色作用的部分則是陽離子。組織的各種細胞中細胞核為酸性，它可與蘇木素液中的陽離子發(fā)生反應。細胞槳中的陽離子則與伊紅液中的陰離子發(fā)生反應，完成染色?，F(xiàn)在是50頁\一共有117頁\編輯于星期五2、物理作用：染料通過浸透，分散浸入到組織的間隙中，因受分子的引力作用，染液中的色素粒子被吸附而完成染色過程。3、染色方法應用于常規(guī)病理切片的染色方法稱為普通染色法或HE染色法，而用特別的染色法則稱為特殊染色法。現(xiàn)在是51頁\一共有117頁\編輯于星期五1、二甲苯

5~10min

2、二甲苯

5~10min

3、無水酒精

30se~1min

4、無水酒精

30se~1min

5、95%酒精

30se~1min

6、95%酒精

30se~1min

7、90%酒精

30se~1min

8、80%酒精

30se~1min

9、Harris蘇木素

10se~15min

10、自來水洗

30sec~1min

11、1%鹽酸酒精

30sec

12、流水沖洗10~15min或溫水洗

5~10min

13、1%伊紅染色

2~5min

14、80%乙醇洗去多余的染色

1min

15、90%酒精

30~1min

16、95%酒精

30~1min

17、95%酒精

30~1min

18、100%酒精

30~1min

19、100%酒精

30~1min

20、石碳酸二甲苯

1min

21、二甲苯

1min

22、二甲苯

1min

23、二甲苯

1min

24、中性樹膠封固

HE染色法程序現(xiàn)在是52頁\一共有117頁\編輯于星期五結(jié)果：細胞核：藍色，軟骨基質(zhì)鈣鹽等深藍色；細胞漿深淺不同的粉紅色，嗜酸性顆粒鮮紅色；膠原纖維呈粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，紅血球為桔紅色，蛋白基質(zhì)為粉紅色。現(xiàn)在是53頁\一共有117頁\編輯于星期五染色時的注意事項（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。（2）切片脫蠟一定要徹底，不然會導致染色深淺不一。（3）切片染蘇木素前可令其無水化，這樣可延長蘇木素的壽命。因為每次染色前，切片水洗，然后進入染液雖然每次帶入的水分很少，但隨著次數(shù)的增加，所帶入的水分足可以稀釋染液影響染色的質(zhì)量。現(xiàn)在是54頁\一共有117頁\編輯于星期五（4）切片在蘇木素的染色時間應充分寧過勿不足。對于初學者來說更應過染，否則分化會過度導致染色過淺。（5）切片分化時，要根椐不同的組織來確定分化時間，并不斷積累經(jīng)驗。（6）伊紅染色時間也要充分，經(jīng)低濃度灑精時應仔細觀察，必要時快速通過，以免過于褪色?，F(xiàn)在是55頁\一共有117頁\編輯于星期五（7）切片致無水酒精后，不要在控干無水酒精時讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進入碳酸二甲苯（也可以進入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（8）切片從二甲苯中取出封固時，切不能讓其干涸，因南方地區(qū)空氣潮濕干涸的切片與空氣接觸，可吸收其水份。這樣的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被著二甲苯，由于它不溶于水起到與水隔絕的作用?，F(xiàn)在是56頁\一共有117頁\編輯于星期五（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當切片干燥時，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導致一半切片沒有被膠封固的結(jié)果。最合適的膠應是滴下成珠?，F(xiàn)在是57頁\一共有117頁\編輯于星期五（10）封固切片時，盛膠的瓶子及瓶蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。因此每次用完后都必須將其擦干凈。當打不開瓶蓋時應放入烤箱中烘烤，即可打開。（11）標簽附貼要認真，不要貼得歪歪斜斜，影響切片的外觀.現(xiàn)在是58頁\一共有117頁\編輯于星期五染液的配制(一）蘇木素的配制1、蘇木素的種類：A、明礬蘇木素（Harris,Mayer,Ehrlich）B、鐵蘇木素（Wiegert,Heidnhain）C、鎢蘇木素（PTAH）D、鉛蘇木素（Soecia）現(xiàn)在是59頁\一共有117頁\編輯于星期五（1）Harris蘇木素的配制（Harris.l900）蘇木素0.5g無水乙醇5ml鉀明礬（硫酸鋁鉀）10g蒸餾水100ml氧化汞0.25g冰醋酸4ml現(xiàn)在是60頁\一共有117頁\編輯于星期五預先把蘇木素溶于無水酒精中配制時，取一三角瓶倒入蒸鎦水，再加入鉀明礬，于電爐上加熱至90℃左右時，拔去電源加入酒精蘇木素，再插上電源繼續(xù)加熱，持續(xù)3~5分鐘，拔去電源，加入氧化汞，此時可產(chǎn)生大量的氣泡，應防止其溢出瓶外。再繼續(xù)通電加熱，煮沸后持續(xù)3~5分鐘，此時溶液表面看呈深紫黑色，即可撤離電源，用備好的冰涼水，將燒瓶迅速的插入水中，讓染液迅速冷卻，中止氧化放入暗處。于第二天過濾后再加入冰醋酸，即可使用，染色時間5－15分鐘?，F(xiàn)在是61頁\一共有117頁\編輯于星期五（2）Mayer氏蘇木素（Mayer,1903）蘇木素0.1g蒸鎦水100ml鉀明礬5g檸檬酸0.1g水合醛5g碘酸鈉20mg現(xiàn)在是62頁\一共有117頁\編輯于星期五將蒸包餾水稍為加溫，加入蘇木素不停地攪拌直至溶解，再加入鉀明礬，令其溶解后再加入碘酸鈉過濾后即可使用，染色時間10－20分鐘，如果先用天表藍為媒染劑，染色時可在2－3分鐘?，F(xiàn)在是63頁\一共有117頁\編輯于星期五配制蘇木素的注意事項1、蘇木素可以配成5%或10%，讓其氧化產(chǎn)生蘇木紅，然后根椐每次配制溶液的量，再決定加入多少。2、在配制蘇木素時，三角燒瓶的選擇也很重要，例如，配制500ml的溶液，應選用1500－2000ml的三角燒瓶，配制1000ml則可選3000ml的燒瓶，這樣溶液在加入氧化汞時，才不會噴出瓶外。現(xiàn)在是64頁\一共有117頁\編輯于星期五3、冰醋酸一定要在溶液過濾后加入如果過濾前加入，則在過濾時溶液很難通過濾紙，這主要是冰醋酸草可造成對濾紙的損害?，F(xiàn)在是65頁\一共有117頁\編輯于星期五(二）伊紅的配制1、1%伊紅灑精的配制伊紅（水溶）5g70%-75%酒精500ml取少許蒸餾水來溶解伊紅或稱曙紅，當完全溶解后，再加入酒精，然后再加入少許冰醋酸，此時溶液即可變?yōu)轷r紅色。注意：冰醋酸一定要加進去如果沒有加入冰醋酸，細胞漿將難以染得鮮艷?，F(xiàn)在是66頁\一共有117頁\編輯于星期五2.切片染完蘇木素后的分化，應該如何控制和注意什么問題？（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會因分化過強而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過淺。（2）對各種組織應視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應分化較長時間等。（3）分化完后，應在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質(zhì)不清楚，則應繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認真操作，細心觀察，不斷總結(jié)?，F(xiàn)在是67頁\一共有117頁\編輯于星期五胃類癌（瘤細胞小而一致）現(xiàn)在是68頁\一共有117頁\編輯于星期五瘤細胞的多形性現(xiàn)在是69頁\一共有117頁\編輯于星期五病理性核分裂像現(xiàn)在是70頁\一共有117頁\編輯于星期五平滑肌、平滑肌瘤和平滑肌肉瘤現(xiàn)在是71頁\一共有117頁\編輯于星期五大腸腺體、腺瘤和腺癌現(xiàn)在是72頁\一共有117頁\編輯于星期五正常鱗狀上皮、乳頭狀瘤和鱗狀細胞癌現(xiàn)在是73頁\一共有117頁\編輯于星期五淋巴管轉(zhuǎn)移癌現(xiàn)在是74頁\一共有117頁\編輯于星期五肺淋巴管轉(zhuǎn)移癌現(xiàn)在是75頁\一共有117頁\編輯于星期五冰凍切片現(xiàn)在是76頁\一共有117頁\編輯于星期五一、種類：1、低溫恒冷箱切片法2、二氧化碳冰凍切片法3、甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法4、半導體冰凍切片法5、氯乙烷冰凍切片法現(xiàn)在是77頁\一共有117頁\編輯于星期五二、冰凍切片的目的1、在手術進行中。突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷不相符合或者懷疑時需要病理給予確定。2、了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定以后的治療措施?，F(xiàn)在是78頁\一共有117頁\編輯于星期五3、對于已確定惡性腫瘤的病人則需要了解其手術范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤細胞。4、在剖腹探查所發(fā)現(xiàn)的腫塊。5、顯示組織中的脂肪類物質(zhì)。6、某些酶的顯示如ATP酶琥珀酸脫氫酶等。7、神經(jīng)病理學中的某些染色法。8、對某些物質(zhì)所進行的免疫熒光的研究?，F(xiàn)在是79頁\一共有117頁\編輯于星期五三、冰凍切片的操作（1）本室現(xiàn)有Shandon-AS620E型冷凍切片機的主要性能。左邊的切片臺可達到-60左右，冷凍箱內(nèi)在0～-30間可任意調(diào)節(jié)，箱面上有電子控制板，裝有急速冷凍，即放上標本啟動該鍵機器馬上進行冷凍工作并持續(xù)10分鐘；有冷凍臺溫度顯示冷凍箱內(nèi)溫度顯示；有即時除霜內(nèi)溫度顯示；現(xiàn)在是80頁\一共有117頁\編輯于星期五有即時除霜鍵，啟動該鍵機器可持續(xù)工作15分鐘，將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉；有照明鍵，啟動該鍵可照明工作間；有消毒鍵當進行一星期的工作后，啟動該鍵可對工作間進行消毒；有工作間面的密鎖鍵啟動鍵可將工作間鎖住，除此之外該機的左邊有四個按鍵兩個為快速自動進退、兩個為微小進退、另有一個手動旋鈕，調(diào)節(jié)修塊時的進退?，F(xiàn)在是81頁\一共有117頁\編輯于星期五（2）切片取末經(jīng)固定的組織不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整。最好24×24×4mm。（3）取出組織支承器，放平擺好組織周邊滴上包埋劑，速放入冷凍臺上冰凍，小組織應先取一組織支承器滴上包埋劑讓其凍成一個小臺再放上細小組織，滴上包埋劑。（4）將冷凍好的組織塊夾緊于切片機上修平切面?，F(xiàn)在是82頁\一共有117頁\編輯于星期五（5）調(diào)好厚度，根椐不同的組織而定，一般在5-10um.（6）調(diào)好防卷板，制作冰凍切片的調(diào)節(jié)，關建在于防卷板的調(diào)節(jié)，這就要求要細心，準確，將其調(diào)校，調(diào)校至適當?shù)奈恢茫藭r切片。冰凍切片在第一時間順利地在刀與防卷板之間通過，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一載片，將其附貼上即可。現(xiàn)在是83頁\一共有117頁\編輯于星期五（7）用于附貼切片的載片，不能存放入冷凍的地方，于室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的溫差，當溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時，由于兩種物質(zhì)溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子間的彼此轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力。使切片與載片牢固地附貼在一起。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生?，F(xiàn)在是84頁\一共有117頁\編輯于星期五（8）應視不同的組織選擇不同冰凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結(jié)組織等，冷凍箱的溫度可調(diào)在-10℃～-15℃左右。切甲狀腺，脾、腎、肌肉等組織,則應調(diào)在-15℃～-20℃左右。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應調(diào)在-25℃左右，如為大量的脂肪組織時，應調(diào)至-30℃。現(xiàn)在是85頁\一共有117頁\編輯于星期五四、冰凍切片時的注意事項1、防卷板和切片及持刀架上的地方應保持干凈經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余及用柔軟的紙張擦。因為包埋劑常常貼在上述的地方。如果不把它們?nèi)コ簦?/p>