位點(diǎn)特異性重組

位點(diǎn)特異性重組第1頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三Introduction保守性位點(diǎn)特異性重組（conservativesite-specificrecombination,CSSR）轉(zhuǎn)座重組（transpositionalrecombination）P319第2頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三P320第3頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）P320第4頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.1重組位點(diǎn)Duringλintergration,recombinationalwaysoccursatexactlythesamenucleotidesequenceswithinthetworecombinationsites,oneonthephageDNAandtheotheronthebacterialDNA.P321第5頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.1重組位點(diǎn)①重組酶識(shí)別序列對(duì)稱分布②交換區(qū)（crossoverregion）重組位點(diǎn)重組位點(diǎn)①①①①②②P321第6頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果①DNA片段的插入P321第7頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果②DNA片段的缺失P321第8頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果③DNA片段的倒位P321第9頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果①DNA片段的插入②DNA片段的缺失③DNA片段的倒位第10頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.3重組酶1.3.1絲氨酸重組酶1.3.2酪氨酸重組酶P322第11頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.保守性位點(diǎn)特異性重組（CSSR）1.3.1絲氨酸重組酶1.3.1.1結(jié)構(gòu)LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.R2R1R3R4第12頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1絲氨酸重組酶1.3.1.2功能①重組酶絲氨酸殘基的-OH攻擊交換區(qū)特定磷酸二酯鍵，重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②另外一個(gè)斷裂DNA的-OH攻擊重組酶與DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA的磷酸二酯鍵，絲氨酸重組酶釋放DNAP322第13頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點(diǎn)重組功能①絲氨酸重組酶的4個(gè)亞基分別切斷2個(gè)DNA分子的4條鏈，并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連P322第14頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點(diǎn)重組功能②重組酶二聚體亞基旋轉(zhuǎn)進(jìn)行DNA片段交換P322第15頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點(diǎn)重組功能②重組酶二聚體亞基旋轉(zhuǎn)進(jìn)行DNA片段交換R2R1R3R4R2R3R1R4LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.P322第16頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點(diǎn)重組功能③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA磷酸二酯，釋放重組酶，完成重組P322第17頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點(diǎn)重組功能①絲氨酸重組酶的4個(gè)亞基分別切斷2個(gè)DNA分子的4條鏈，并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②重組酶二聚體亞基旋轉(zhuǎn)進(jìn)行DNA片段交換③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA磷酸二酯，釋放重組酶，完成重組第18頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三總結(jié)重組位點(diǎn)重組結(jié)果絲氨酸重組酶第19頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.轉(zhuǎn)座第20頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.轉(zhuǎn)座2.1轉(zhuǎn)座因子（transposableelement）或轉(zhuǎn)座子（transposon）從DNA上的一個(gè)地方移位到另外一個(gè)地方的遺傳因子。P337第21頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子

2.2.2LTR(longterminalrepeat)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子P339第22頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子

2.2.1.1自主轉(zhuǎn)座子（autonomoustransposon）

2.2.1.2非自主轉(zhuǎn)座子（nonautonomoustransposon）P340第23頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1.1DNA自主轉(zhuǎn)座子

①反向重復(fù)序列（具有轉(zhuǎn)座酶識(shí)別序列）②轉(zhuǎn)座酶基因第24頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1.2DNA非自主轉(zhuǎn)座子

①反向重復(fù)序列（具有轉(zhuǎn)座酶識(shí)別序列）第25頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子

2.2.1.1自主轉(zhuǎn)座子①反向重復(fù)序列（具有轉(zhuǎn)座酶識(shí)別序列）②轉(zhuǎn)座酶基因

2.2.1.2非自主轉(zhuǎn)座子①反向重復(fù)序列（具有轉(zhuǎn)座酶識(shí)別序列）P340第26頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.2LTR反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子①兩端有LTR(longterminalrepeat)

②LTR中含有反向末端重復(fù)序列③轉(zhuǎn)座酶基因和反轉(zhuǎn)錄酶基因P340第27頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子①5′-UTR:untranslatedregion②3′-UTR(聚腺苷酸序列的A-T堿基對(duì))③ORF1:編碼RNA結(jié)合蛋白o(hù)penreadingframe④ORF2:編碼的蛋白質(zhì)同時(shí)具有反轉(zhuǎn)錄酶和核酸內(nèi)切酶功能P341第28頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機(jī)制

①轉(zhuǎn)座酶識(shí)別并聚集轉(zhuǎn)座子兩端的反向重復(fù)序列，形成轉(zhuǎn)座體

②將DNA轉(zhuǎn)座子從原始位置切除

③DNA單鏈交換，即轉(zhuǎn)座子的3′-OH與靶DNA的5′-P相連④DNA聚合酶和DNA連接酶修復(fù)缺口P341第29頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機(jī)制

①轉(zhuǎn)座酶識(shí)別并聚集轉(zhuǎn)座子兩端的反向重復(fù)序列，形成轉(zhuǎn)座體P341第30頁，共33頁，2023年，2月20日，星期三2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機(jī)制

②將DNA轉(zhuǎn)座子從原始位置切除P341第31頁，共33頁，2023年