平板菌落計(jì)數(shù)法

平板菌落計(jì)數(shù)法第1頁/共12頁學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡?頁/共12頁實(shí)驗(yàn)原理微生物的計(jì)數(shù)方法分為直接計(jì)數(shù)和間接計(jì)數(shù)。直接計(jì)數(shù)是通過血球計(jì)數(shù)板將微量體積樣品中的微生物在顯微鏡下數(shù)出（詳見實(shí)驗(yàn)三）。直接計(jì)數(shù)所計(jì)為微生物總數(shù)（包括死細(xì)胞和活細(xì)胞），而且適用于體積較大的微生物如酵母、霉菌的孢子等。第3頁/共12頁實(shí)驗(yàn)原理平板菌落計(jì)數(shù)法是一種典型的間接計(jì)數(shù)法。將一定稀釋度的樣品均勻接種到固體平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)長出單菌落后，可認(rèn)為每個(gè)單菌落由一個(gè)微生物長出，根據(jù)稀釋倍數(shù)可計(jì)算樣品中的微生物濃度。該方法不受微生物的大小的限制，所計(jì)的只是活的可培養(yǎng)微生物，而且可用于混合微生物樣品的計(jì)數(shù)。第4頁/共12頁1．編號取無菌平皿9個(gè)，分別用記號筆標(biāo)明10-4、10-5、10-6（稀釋度）各三套。另取6支試管，加入9ml無菌水，依次標(biāo)明10-1、

10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。三.實(shí)驗(yàn)步驟第5頁/共12頁三.實(shí)驗(yàn)步驟2．稀釋水樣：用無菌吸管取1ml樣品加入含9ml無菌水的10-1試管中，此即為10倍稀釋。將10-1試管振蕩，充分混勻。用另一吸管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml無菌水的10-2試管中，此即為100倍稀釋。其余10-3、10-4、10-5、10-6稀釋依次類推。固體樣品：準(zhǔn)確稱取10g樣品，加入90ml無菌水中，充分混勻后即為10倍稀釋。將10-1試管振蕩，使其充分混勻。用另一吸管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml無菌水的10-2試管中，此即為100倍稀釋。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次類推。第6頁/共12頁3．加樣倒平板：方法一：用不同的滅菌吸管分別吸取10-4、10-5、10-6稀釋液1ml，分別注入3個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中。分別立即傾注約15ml已熔化并冷卻到45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，并立即在桌面上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻（每稀釋度做3個(gè)）。另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基15ml，做空白對照。培養(yǎng)基凝固后，倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)。三.實(shí)驗(yàn)步驟第7頁/共12頁三.實(shí)驗(yàn)步驟方法二：取0.2ml一定稀釋度的樣品，加至冷卻的平板中，用涂布器涂勻后，于37℃溫箱中培養(yǎng)。取10-4、10-5、10-6稀釋液，每個(gè)稀釋度作三個(gè)，培養(yǎng)24-48h后計(jì)數(shù)取平均值。第8頁/共12頁4．計(jì)數(shù)培養(yǎng)24-48h后，取出培養(yǎng)平板，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算：方法一：每毫升中菌落形成單位（cfu）=同一稀釋度的平均菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)方法二：每毫升中菌落形成單位（cfu）=同一稀釋度的平均菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)x5注：一般選擇每個(gè)平板上長有30-300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較適宜。三.實(shí)驗(yàn)步驟第9頁/共12頁三．作業(yè)：計(jì)算菌體含量(單位:c