微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人教選修一

微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人教選修一第1頁/共24頁專題重點(diǎn)專題難點(diǎn)①培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)②培養(yǎng)基對微生物的選擇作用③纖維素酶的種類及作用①無菌技術(shù)的操作②微生物的數(shù)量測定③從土壤中分離出分解纖維素的微生物專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第2頁/共24頁課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

培養(yǎng)基1．概念營養(yǎng)物質(zhì)

人們按照微生物對____________的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。第3頁/共24頁2．營養(yǎng)構(gòu)成碳源特殊營養(yǎng)物質(zhì)

(1)一般都含有水、__________、氮源、無機(jī)鹽。

(2)還要滿足微生物生長對pH、________________以及O2的要求。

3．分類

(1)液體培養(yǎng)基：配制成的液體狀態(tài)的基質(zhì)。

(2)固體培養(yǎng)基：配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)，在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑，如瓊脂，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。第4頁/共24頁無菌技術(shù)1．消毒溫和巴氏

(1)特點(diǎn)：使用較為________的物理或化學(xué)方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。

(2)常用方法：煮沸消毒法、________消毒法、化學(xué)藥劑消毒法。2．滅菌強(qiáng)烈灼燒

(1)特點(diǎn)：使用________的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物。

(2)常用方法：________滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。第5頁/共24頁微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1．配制培養(yǎng)基稱量―→混合―→溶化―→調(diào)pH―→分裝―→包扎2．滅菌加水―→加培養(yǎng)基―→密封―→排冷氣―→維持壓力―→取出倒平板(或擱置斜面)第6頁/共24頁3．接種稀釋涂布平板(1)接種過程：洗凈雙手→點(diǎn)燃酒精燈→接種→貼標(biāo)簽。(2)接種工具：包括____________、涂布器。接種環(huán)(3)接種方法：平板劃線法、____________________法。(4)注意事項(xiàng)：整個(gè)操作過程要在____________旁完成。4．培養(yǎng)酒精燈火焰接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。第7頁/共24頁菌種保藏1．臨時(shí)保藏固體斜面4℃

(1)操作： 采用______________培養(yǎng)基，菌落長成后，放入______冰箱中保藏，以后每3～6個(gè)月，轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基。

(2)缺點(diǎn)： 保存時(shí)間不長，菌種易被污染或產(chǎn)生變異。2．長期保存法甘油管藏采用________________法，放入－20℃的冷凍箱中保存。第8頁/共24頁營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)合成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)①無機(jī)化合物：CO2、NaHCO3

等。②有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物①無機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽。②有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等微生物的營養(yǎng)要素1．微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能第9頁/共24頁營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源生長因子生長必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分牛肉膏、酵母膏、動(dòng)物組織提取液等無機(jī)鹽礦物質(zhì)參與酶的組成；調(diào)節(jié)滲透壓——水——作為溶劑和運(yùn)輸?shù)慕橘|(zhì)；參與生化反應(yīng)——備注：(1)不同種類的微生物，對碳源的需要差別較大。(2)微生物最常利用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(3)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量來源。(4)微生物之所以需要補(bǔ)充生長因子，往往是由于缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限。第10頁/共24頁營養(yǎng)型碳源氮源生長因子舉例自養(yǎng)型微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細(xì)菌異養(yǎng)型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等有些種類需要乳酸菌2.不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求第11頁/共24頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑、如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定培養(yǎng)基的種類第12頁/共24頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途用途選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅－美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌續(xù)表：第13頁/共24頁關(guān)于微生物培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)1．配制培養(yǎng)基時(shí)，按照每個(gè)培養(yǎng)基消耗15～20ml的量來估算總用量。

2．滅菌后，培養(yǎng)基冷卻到55℃后應(yīng)及時(shí)進(jìn)行倒平板操作。如果不能及時(shí)操作，需要將培養(yǎng)基放到55℃左右的電熱箱中保溫，以防止瓊脂凝固。第14頁/共24頁第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束后灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在其他微生物污染培養(yǎng)物殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的菌種，使每次劃線的菌種來自上次劃線的末端殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者3．平板劃線操作時(shí)每次灼燒的目的如下表：4.實(shí)驗(yàn)后，所有用過的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液等都需要統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后再丟棄，否則將會(huì)造成環(huán)境污染。第15頁/共24頁微生物所需的營養(yǎng)要素)【例1】下列關(guān)于微生物營養(yǎng)的說法，正確的是(A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量C．除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽D．無機(jī)氮源也能提供能量第16頁/共24頁

【名師點(diǎn)撥】：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源和能源，如蛋白胨。對于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3

可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3

可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源?！敬鸢浮浚篋第17頁/共24頁【配對練習(xí)1】下列有關(guān)碳源的敘述不正確的是()A．碳源主要用于構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物B．某些碳源可以作為微生物的主要能源物質(zhì)C．蛋白質(zhì)一定不能做碳源D．不同種類的微生物的碳源可能不同解析：蛋白質(zhì)也能做碳源。答案：C第18頁/共24頁培養(yǎng)基的種類【例2】下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確的是()

A．培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)

B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基

C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基

D．微生物在固體培養(yǎng)基上生長時(shí)，可以形成肉眼可見的單個(gè)細(xì)菌第19頁/共24頁

【名師點(diǎn)撥】：培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)。培養(yǎng)基根據(jù)物理形態(tài)分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基；根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，可以分為普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基，因此按照不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，種類也不同。固體培養(yǎng)基是因?yàn)榧尤肓四虅┉傊斐傻模皇且驗(yàn)樗亩嗌?。微生物在固體培養(yǎng)基上生長時(shí)，可以形成肉眼可見的單個(gè)菌落，單個(gè)細(xì)菌用肉眼看不到?！敬鸢浮浚篈第20頁/共24頁【配對練習(xí)2】關(guān)于配制培養(yǎng)基的敘述中，正確的是()

A．制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂

B．加入青霉素可得到放線菌

C．培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源

D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基

解析：固體培養(yǎng)基需加入凝固劑，瓊脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制細(xì)菌和放線菌的生長；發(fā)酵工程一般用液體培養(yǎng)基；自生固氮菌能夠?qū)⒖諝庵械牡€原成氨，故培養(yǎng)基配制時(shí)不需加氮源。

答案：C第21頁/共24頁微生物培養(yǎng)的要點(diǎn))【例3】下列操作與滅菌無關(guān)的是(A．接種前用火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．接種在酒