微生物檢驗實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則

微生物檢驗實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則第1頁/共28頁微生物檢驗實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則

第2頁/共28頁微生物檢驗實驗室規(guī)范

包括以下幾個方面人員培養(yǎng)基菌種實驗室的布局和運行設(shè)備文件實驗記錄結(jié)果的判斷第3頁/共28頁<一>人員實驗人員在上崗前接受勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)和實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗。檢驗人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。第4頁/共28頁<一>人員實驗室應(yīng)通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等方法客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評估。 所有人員的培訓(xùn)、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄歸檔。第5頁/共28頁<二>培養(yǎng)基培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。第6頁/共28頁<二>培養(yǎng)基1．培養(yǎng)基的制備2.培養(yǎng)基的貯藏第7頁/共28頁1．培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯存條件、促生長試驗的質(zhì)控菌和用途。第8頁/共28頁脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。脫水型培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時，加入后應(yīng)充分混勻。第9頁/共28頁應(yīng)按照規(guī)定的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)。培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證。第10頁/共28頁制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：

容器和蓋子不得破裂

裝量應(yīng)相同

盡量避免形成汽泡

固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪

在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶

不得污染微生物應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查第11頁/共28頁2.培養(yǎng)基的貯藏培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及和水份的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45～50℃的水浴中，不得超過8小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)入培養(yǎng)基中造成污染。第12頁/共28頁<三>菌種工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代（從菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過度的傳代增加表型變化的風(fēng)險。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。第13頁/共28頁<三>菌種實驗室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗以及銷毀的記錄；菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代；每支菌種都應(yīng)適當(dāng)標(biāo)注，注明其名稱、接種日期、所傳代數(shù)等；菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保存的位置和條件；其它需要的程序。第14頁/共28頁<四>實驗室的布局和運行實驗室的布局與設(shè)計應(yīng)充分考慮到良好微生物實驗室操作規(guī)范和實驗室安全的要求。

實驗室布局設(shè)計的基本原則:是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害。合的規(guī)劃及活動區(qū)域的合理區(qū)分將提高微生物實驗室操作的可靠性。第15頁/共28頁實驗室應(yīng)有潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng)，并為上述檢驗配備相應(yīng)的細(xì)菌（真菌）等實驗室、培養(yǎng)室、培養(yǎng)基及實驗用具準(zhǔn)備（包括滅菌）區(qū)、樣品接收和儲藏區(qū)、污染物處理區(qū)和文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域，同時，應(yīng)對上述區(qū)域明確標(biāo)識。第16頁/共28頁實驗室應(yīng)對進(jìn)出潔凈區(qū)域的人和物建立控制程序和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（如更衣程序等），應(yīng)按相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)建立潔凈室（區(qū)）和隔離系統(tǒng)的驗證、使用和清潔維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對可能影響檢測結(jié)果的工作（如潔凈度驗證及監(jiān)測、消毒、清潔維護(hù)等）能夠有效地控制、監(jiān)測并記錄。實驗室對所用的消毒劑應(yīng)定期更換，使用的消毒劑應(yīng)無菌。第17頁/共28頁任何出現(xiàn)微生物生長的培養(yǎng)物不得在實驗室無菌區(qū)域內(nèi)打開。對染菌樣品的有效隔離可以減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。實驗人員不能在實驗室的活菌操作區(qū)域或鄰近區(qū)域進(jìn)行抽樣。應(yīng)采用無菌操作技術(shù)進(jìn)行取樣，防止在取樣過程中使樣品受到微生物的污染而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。因此，實驗設(shè)施應(yīng)設(shè)計成保證樣品在控制條件下抽樣，包括能有效防止微生物污染的無菌設(shè)施及環(huán)境、適宜的無菌服、無菌抽樣器具和合格的操作人員。如果可能，所有的樣品應(yīng)在具有無菌條件的特定抽樣間進(jìn)行無菌抽樣。第18頁/共28頁被檢樣品應(yīng)有傳遞、儲存、處置和識別管理程序。待驗樣品應(yīng)在合適的條件下儲存并能夠保證其完整性而不改變其性狀，應(yīng)明確規(guī)定和記錄儲存條件。實驗室還應(yīng)針對類似于帶菌培養(yǎng)物溢出的意外事件制定處理規(guī)程。如：活的培養(yǎng)物灑出必須就地處理，不得使培養(yǎng)物污染擴(kuò)散。實驗室應(yīng)有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設(shè)施和制度。第19頁/共28頁<五>設(shè)備實驗室應(yīng)配備與檢驗?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備，其類型、測量范圍和準(zhǔn)確度等級應(yīng)滿足檢驗所采用標(biāo)準(zhǔn)的要求。實驗室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，使用要有記錄。應(yīng)定期維護(hù)和期間核查，并保存相關(guān)記錄。第20頁/共28頁重要的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、冰箱等，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，保證其運行狀態(tài)正常和受控，同時應(yīng)有相應(yīng)的備用設(shè)備以保證試驗菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性；對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋等影響實驗準(zhǔn)確性的關(guān)鍵設(shè)備應(yīng)在其運行過程中對關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力）進(jìn)行連續(xù)觀測和記錄，有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置。如果發(fā)生偏差，應(yīng)評估對以前的檢測結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。第21頁/共28頁對于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期進(jìn)行清潔和消毒。對試驗需用的無菌器具應(yīng)實施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識并與非無菌器具加以區(qū)別。第22頁/共28頁<六>文件文件應(yīng)當(dāng)充分表明試驗是在實驗室里按可控的檢查法進(jìn)行的一般包括以下方面：人員培訓(xùn)與資格確認(rèn)；設(shè)備驗收、檢定（或校準(zhǔn)期間核查）和維修；設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)和使用記錄；培養(yǎng)基制備、貯藏、和質(zhì)量控制；檢驗規(guī)程中的關(guān)鍵步驟；數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算的確認(rèn)；質(zhì)量責(zé)任人對試驗報告的評估；數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查。第23頁/共28頁<七>實驗記錄實驗室原始記錄應(yīng)包括以下內(nèi)容：

實驗日期、檢品名稱、實驗材料、實驗人員姓名、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號或方法、實驗結(jié)果、偏差（存在時）、實驗參數(shù)（所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基和批號以及培養(yǎng)溫度等）、主管/復(fù)核人簽名。第24頁/共28頁每一個關(guān)鍵的實驗設(shè)備均應(yīng)記錄在案。設(shè)備溫度（水浴，培養(yǎng)箱，滅菌器）必須記錄和監(jiān)測。實驗記錄寫錯時，用單線劃掉并簽字。原來的數(shù)據(jù)不能抹去或被覆蓋。所有實驗室記錄應(yīng)以文件形式保存并防止意外遺失，正規(guī)的記錄應(yīng)存放在特定的地方并有登記。第25頁/共28頁<八>結(jié)果的判斷微生物試驗的特殊性,實驗結(jié)果分析時,應(yīng)多方面考慮。對實驗結(jié)果進(jìn)行充分和全面的評價引起微生物污染的原因主要有兩個：

1、試驗操作錯誤或產(chǎn)生無效結(jié)果的試驗環(huán)境條件；2、產(chǎn)品本身的微生物污染總數(shù)超過規(guī)定的限度或檢出控制菌。