常見病原菌的滅菌抑菌保藏原理及方法

常見病原菌的滅菌抑菌保藏原理及方法第1頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四常見病原菌的滅菌、抑菌、保藏

原理及方法第2頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四第3頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四消毒滅菌

基本概念消毒（disinfection）：殺死物體上或環(huán)境中的病原微

生物,并不一定殺死細菌芽胞或非病原微生物的方法。

滅菌（sterilization）：殺死物體上所有微生物的方法(包括芽孢)。

第4頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四一、消毒滅菌的方法常用的消毒和滅菌方法可分為：1）物理方法：熱力滅菌法輻射殺菌法濾過除菌法干燥與低溫抑菌法2）化學方法3）生物滅菌法第5頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四熱力滅菌

原理：破壞菌體蛋白質(zhì)與核酸，使其肽鏈斷裂，蛋白質(zhì)變性凝固，核酸解鏈崩解,導致細菌死亡。

火焰灼燒干熱滅菌法烘箱熱空氣滅菌LIH法高溫滅菌巴氏消毒HTST法

常壓下

煮沸消毒

間歇滅菌

濕熱滅菌消毒法

常規(guī)加壓滅菌加壓

連續(xù)加壓滅菌法

第6頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四

種類：常用熱力滅菌法種類方法效果用途干熱焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒灼滅菌接種環(huán)，試管口干烤紅外線干烤箱，熱空氣160-170oC2h電磁波熱效應(yīng)滅菌滅菌玻璃器皿等耐高溫的物品醫(yī)療器械濕熱煮沸法100oC，5-10分鐘，沸水消毒飲水和食具高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器103.4Kpa121.3oC×15-20分鐘滅菌耐高溫耐濕物品第7頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四輻射殺菌法

紫外線（ultravioletray,UV)

:260nm-266nm（最佳殺菌波長）

殺菌原理：使DNA上相鄰的T堿基通過共價鍵結(jié)合成

二聚體，干擾DNA復制與轉(zhuǎn)錄，導致細菌死亡

特點：穿透力弱

適用范圍：適于空氣和物

體表面消毒第8頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四濾過除菌法（filtration）機理：用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去, 以達到除菌目的器具：濾菌器（filter）適用物品：不耐高溫物品（血清、毒素、抗生素）以及 空氣等的除菌第9頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四低溫抑菌法在低溫狀態(tài)下真空抽去水分冷凍真空干燥法：用途：保存菌種干燥與第10頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四（二）化學消毒滅菌法消毒劑殺菌機理：1.使菌體蛋白變性和凝固：酚、醇、酸鹼、醛類，重金屬鹽類（高濃度）2.干擾細菌的酶系統(tǒng)（酶失活）：氧化劑、重金屬鹽類（低濃度） 3.損傷細菌細胞膜酚類（低濃度）、表面活性劑第11頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四殺菌或抑菌，并無絕對界限，常常不易區(qū)分。同一物質(zhì)，濃度高時可殺菌，而濃度低時只能抑菌，作用時間長可殺菌，作用時間短則只能抑菌。另外，由于各種微生物性質(zhì)的不同，同一物質(zhì)對一種微生物具有殺菌作用，而對另一種微生物可能僅有抑菌作用。第12頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四抑菌采用化學或物理方法抑制或妨礙細菌生長繁殖及其活性的過程。第13頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四防腐利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖，即通過制菌作用防止食品、生物制品等對象發(fā)生霉腐的措施第14頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四化療指利用具有高度選擇毒力，即對病原菌具高度毒力而對其宿主基本無毒的化學物質(zhì)來抑制主體內(nèi)病原微生物的生長繁殖，借以達到治療該宿主傳染病的一種措施第15頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四抑菌的方法1、低溫2、缺氧3、干燥4、高滲5、高酸度6、高醇度7、加防腐劑第16頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四抑菌的原理1、低溫：利用4℃以下的各種低溫（0，-20，-70，-196℃等）保藏食物等2、缺氧：采用抽真空、沖氮或二氧化碳、加除氧劑等方法來有效防止食品和糧食等的霉腐、變質(zhì)而達到保鮮的目的3、干燥：采用曬干、烘干或紅外線干燥等方法對糧食、食品等進行干燥保藏在密封條件下，也用生石灰，無水氯化鈣干燥第17頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四抑菌的原理4、高滲：通過鹽腌和糖漬等高滲措施來保護食物，是在民間早就流傳的有效防霉腐方法。5、高酸度：在我國具有悠久歷史的泡菜，就是利用乳酸菌的厭氧發(fā)酵使新鮮蔬菜產(chǎn)生大量乳酸，借這種高酸度而達到抑制雜菌和防霉腐的目的。第18頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四6、高純度：用白酒或黃酒保存食品，在我國有悠久傳統(tǒng)，如醉蟹、醉麩、醉筍和黃泥螺等產(chǎn)品，都是特色風味食品。7、加防腐劑：有些食品、調(diào)味劑、飲料、果汁或工業(yè)器材中，可加入可加入適量的防腐劑或防霉劑來達到防霉腐的目的，如丙酸（0.32%）或乙二酸（0.32%）來做面包等的防腐劑。第19頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四化學因素1、表面消毒劑：隨濃度遞增相繼出現(xiàn)制菌和殺菌作用，形成一個連續(xù)的作用譜2、磺胺類藥物：抗代謝3、抗生素：在低濃度能抑制和干擾他種生物的生命活動第20頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四殺菌抑菌含義消毒劑對微生物的殺滅能力生物制劑抑制妨礙細菌生長繁殖及活性的能力作用時間殺菌時間可為2min、5min、10min、20min相同條件下作用時間越短，殺菌率越低，所以選擇最短的作用時間來檢測殺菌性能更具有代表性抑菌時間可為2min、5min、10min、20min相同條件下作用時間越長，殺菌率越低，所以選擇最長的作用時間來檢測抑菌性能更具有代表性第21頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四殘留消毒劑的去除方法不同中和劑法（化學中合法）稀釋法（酸堿平衡法）評價標準殺菌率≥90%，產(chǎn)品有殺菌作用。抑菌率≥50%~90%，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率≥90%產(chǎn)品有較強的抑菌作用殺菌抑菌第22頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四菌種保藏基本原則1、保藏菌種時首先要選擇它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等，并創(chuàng)造一個低溫、干燥、缺氧、避光和缺少營養(yǎng)的環(huán)境條件，以利于休眠體能較長時間維持其休眠狀態(tài)。2、對于不產(chǎn)孢子的微生物，也要使其新陳代謝處于最低水平，又不會死亡，從而達到長期保藏的目的。第23頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四常用菌種保藏方法1常用的簡易保藏法：斜面?zhèn)鞔２胤?、半固體穿刺保藏法（適用于細菌和酵母菌）、石蠟油封法2甘油保藏法3干燥保藏法4真空冷凍干燥保藏法5液氮超低溫保藏法第24頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1簡易保藏法基本原理：利用低溫來抑制微生物生命活動。通常將在斜面或半固體培養(yǎng)基上生長良好時培養(yǎng)物直接放到2~10℃冰箱中保藏，當培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡后再重新移植到新的培養(yǎng)基上，故又稱定期移植保藏法或傳代培養(yǎng)保藏法。第25頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1簡易保藏法定期移植時間間隔：一般不產(chǎn)芽孢的細菌約2周至1個月；放線菌、酵母菌和絲狀真菌4~6個月；石蠟油封法一般可保藏1年。優(yōu)缺點：操作簡單，可隨時觀察菌種生長狀況，但較費時費力，因經(jīng)常移植傳代，微生物物易發(fā)生變異。第26頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1簡易保藏法定期移植時間間隔：一般不產(chǎn)芽孢的細菌約2周至1個月；放線菌、酵母菌和絲狀真菌4~6個月；石蠟油封法一般可保藏1年。優(yōu)缺點：操作簡單，可隨時觀察菌種生長狀況，但較費時費力，因經(jīng)常移植傳代，微生物物易發(fā)生變異。第27頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1.1斜面?zhèn)鞔２胤ㄙN標簽：菌種菌株接種日期接種：對數(shù)生長期后期成熟的孢子培養(yǎng)：細菌—37℃，18~24h酵母—28~30℃

，36~60h放線菌和絲狀真菌—28℃

，4~7d收藏：管口面塞用牛皮紙包扎，或用融化的固體石蠟封棉塞后置4冰箱保存。第28頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1.2半固體穿刺保藏法貼標簽穿刺接種：將菌種直刺入直立柱中央培養(yǎng)：同傳代保藏法收藏：待菌長好后，用浸有石蠟的無菌軟木塞或橡皮塞代替面塞并塞緊，置4℃冰箱中保藏，保藏0.5~1年。第29頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四1.3石蠟油封法石蠟油滅菌：將石蠟油裝入三角瓶中，裝量不超過總體積的1/3，塞上面塞，外包牛皮紙，加壓蒸汽滅菌（121℃

，30min），連續(xù)滅菌2次。然后在40℃溫箱中放置2周或置105~110℃烘箱中烘2h，除去石蠟油中的水分。培養(yǎng)加石蠟油：以無菌吸管吸石蠟油加至菌種管中，加入量以高出斜面頂端或直立柱培養(yǎng)基表面約1cm為宜。收藏：面塞外包牛皮紙或用無菌橡皮塞，把菌種管直立放置于4℃冰箱中。放線菌、霉菌及產(chǎn)芽孢細菌一般可保2年，酵母菌及不產(chǎn)芽孢細菌可保1年。第30頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四2甘油保藏法期長，保存期間取樣測試方便，在基因工程中常用于保存含質(zhì)粒的菌株，一般可保3~5年。保護劑：40%左右的甘油機理：適當濃度甘油中，少量甘油分子進入細胞，使菌種細胞在冷凍過程中緩解了其由于強烈脫水及胞內(nèi)形成冰晶而引起的破壞。保藏溫度：-20℃左右或-70℃特點:操作簡單，保藏第31頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四2甘油保藏法方法步驟：無菌甘油的制備：80%的甘油在121℃滅菌20min保藏培養(yǎng)物的制備：活化純化性能檢測制備菌種培養(yǎng)物保藏菌懸液的制備：液體法菌苔法-20℃保藏快速冷凍；乙醇-干冰液氮超低溫保藏：-70℃一般細菌、酵母保存期為3~5年。第32頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四3干燥保藏法基本原理：將微生物賴以生存的水分蒸發(fā)掉，使細胞處于休眠和代謝停滯狀態(tài)，從而達到較長期保藏的目的。低溫條件下，保藏期可達數(shù)年至十幾年之久。砂土管保藏法、明膠片保藏法、硅膠保藏法、麩皮保藏法第33頁，共38頁，2023年，2月20日，星期四砂土管保藏法—產(chǎn)生芽孢的細菌及形成孢子的霉菌和放線菌。方法：處理砂土裝沙土管制備菌液加孢子液干燥收藏恢復培養(yǎng)明膠片保藏法—細菌制備菌