應(yīng)用高速逆流色譜分離羅布麻花中化學(xué)成分課件

應(yīng)用高速逆流色譜分離羅布麻花中化學(xué)成分課件第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四目錄

一、緒言二、實驗方法三、結(jié)果分析與討論四、結(jié)論五、致謝第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四一、緒言1.1羅布麻花簡介

羅布麻為夾竹桃科野生植物，花中含有種類和含量均十分豐富的黃酮類化合物，不僅在醫(yī)療上有十分廣泛的應(yīng)用，還有美容保健等功效。1.2高速逆流色譜一種新型現(xiàn)代色譜分離技術(shù)，基于液-液分配色譜原理，具有制備量大，樣品無損耗，分離純度高，重現(xiàn)性好，速度快等優(yōu)點第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四二、實驗方法2.1實驗材料與儀器2.1.1實驗材料

羅布麻花藥材采摘自新疆羅布泊地區(qū)，經(jīng)長春師范學(xué)院中心實驗室張語遲鑒定；D101大孔樹脂購自南開大學(xué)化工廠；

提取制備用乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷為分析純試劑(北京化工廠)；色譜用乙腈、乙酸為分析純試劑(美國Fisher公司)；

超純水為本研究部門自制(18.2ΩPa)

第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四2.1.2實驗儀器

Waters2695高效液相色譜,配備Waters2998二極管陣列檢測器(美國Waters公司)；AgilentC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm,美國Agilent公司)；FiniganLCQTM

電噴霧質(zhì)譜

(美國Thermo-FisherScientific公司)；DEMINI型高速逆流色譜儀

(英國DynamicExtractions公司)，內(nèi)有兩個制備性色譜柱，柱體積為135mL；轉(zhuǎn)速范圍為0–2000rpm；SanoriusBSl10S分析天平(十萬分之一，北京賽多利斯有限公司)；

純水器(法國Millipore公司)；

0.45μm濾膜

(美國Agilent公司)；第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四2.2試驗方法

2.2.1溶劑的選擇

各組成溶劑分液漏斗中搖勻，靜止分別取2mL上相和下相溶解少量樣品粉末分別取1mL上下層溶液于不同試管90oC水浴加熱揮發(fā)至干1mL色譜甲醇溶解0.45μm微孔濾膜過濾高效液相色譜檢測第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四2.2.2樣品制備羅布麻花粉末100.002g2000mL60%乙醇溶液200mL水溶解上D-101型大孔樹脂柱制得羅布麻花粗提物，總黃酮回流提取1h(3次)合并濾液，濃縮至干先用5倍柱體積的水洗脫棄去再用5倍柱體積的60%乙醇溶液洗脫收集并濃縮至干第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四2.2.3溶劑系統(tǒng)的配制

按照乙酸乙酯―乙腈―水―乙酸為5:3:5:0.05(v:v:v:v)，分液漏斗中，搖勻，靜止。下層溶液作為流動相，上層溶液作為固定相。2.2.4逆流色譜實驗參數(shù)的設(shè)置

固定相流速：10mL/min

流動相流速：2.5mL/min

柱體積：150mL進樣量：150mg注入樣品量：2mL（從30min時開始接流分）檢測波長：254nm

轉(zhuǎn)速：1400rpm

柱溫：30oC

運行：180min

第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四2.2.5利用高效液相色譜進行純度檢測

二元線性梯度洗脫：

流動相A為0.2%

醋酸溶液，流動相B為乙腈，流動相梯度程序：0-15min,5%B，15-60min，5%-40%B流速:1.2mL/min

樣品進樣量:10μL

檢測波長：254nm

柱溫:28oC

第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四三、結(jié)果分析與討論3.1利用高效液相色譜篩選逆流色譜溶劑體系

第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四

3.2逆流色譜分離

圖1：羅布麻花總黃酮的制備型逆流色譜圖第11頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四3.3.流分純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定

圖2：羅布麻花提取物的高效液相色譜圖提取物中含有13種化學(xué)成分，共有10個化合物通過高速逆流色譜洗脫下來.第12頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分1的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定

圖3：流分1的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為槲皮素–3–O–β–D–葡萄吡喃糖基(2→1)–O–β–D–葡萄吡喃糖苷

(白麻苷)第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分2的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖4：流分2的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為Kaempferol–7–O–β–D–glucopyranosyl(1→4)–β–D–glucopyranoside(山奈酚–7–O–β–D–吡喃葡萄糖基(1→4)–β–D–吡喃葡萄糖苷)第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分3的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖5：流分3的高效液相色譜圖及紫外光譜圖

通過紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為芹菜素–7–O–葡萄糖苷(大波斯菊苷)第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分4的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖6：流分4的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過與對照品進行紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)比對，證明該化合物4為大波斯菊苷同分異構(gòu)體（芹菜素-3-O-半乳糖苷）第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分5的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖7：流分5的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過與對照品進行紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)比對，證明該化合物5為金絲桃苷第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分6的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖8：流分6的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為槲皮素–3–O–葡萄糖苷(異槲皮素)第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分7的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖9：流分7的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過與對照品進行液相色譜保留時間、紫外光譜數(shù)據(jù)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行比對，證明該化合物為香草酸第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分8的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖10：流分8的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為山奈酚–3–葡萄糖苷(紫云英苷)第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分9的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖11：流分9的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過對照品的液相色譜保留時間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行比對，證明該化合物為槲皮素第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四流分10的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定圖11：流分9的高效液相色譜圖及紫外光譜圖通過該化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)，證明該化合物為谷甾醇–3–O–葡萄糖苷(胡蘿卜苷)第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期四四、結(jié)論

以乙酸乙酯―乙腈―水―乙酸為5:3:5:0.05(v:v:v:v)為溶劑系統(tǒng)，應(yīng)用高速逆流色譜對羅布麻花中的總黃酮進行分離，分離得到了純度較好的10個有效成分，經(jīng)高效液相色譜檢測，含有7個黃酮類化合物，1個有機酸類化合物和1個苷類化合物，通過對化合物的液相色譜保留時間、紫外光譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振數(shù)據(jù)進行比對，確定了分離得到的化合物的種類和結(jié)構(gòu)。

第23頁，共24頁，2023年，2月2