cn.8a含嗜酸乳桿菌的反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料及其制備和應(yīng)用

(19)中民國家知識(shí)

(21)申請?zhí)?/p>

(10)申請公布號 (43)1/201/201/001/001/181/23CCTCCM(71)申請人新通達(dá)生物飼料科技(72)發(fā)明人郭(74)專利機(jī)構(gòu)行之專權(quán)利要求權(quán)利要求1明1411說明書14頁附圖1A功能飼料及其和應(yīng)用屬于生物菌在飼料中應(yīng)LAg12-7A含嗜酸乳桿菌的反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料及其和應(yīng)[0001]本發(fā)明屬于微生物有益菌在飼料中應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株優(yōu)選的嗜酸乳桿[0002]微生態(tài)功能飼料是由多種有益微生物對有關(guān)飼料原料進(jìn)行發(fā)酵處理后的飼料，其 含量達(dá)90.01％2002)，將玉米黃漿水濃縮成含水60％左右的濃縮液稱為玉米黃10～15％。 [0008]國內(nèi)外對利用食品工業(yè)廢棄物生產(chǎn)發(fā)酵飼料已有一些。許劍秋2002年了 LAg12-7菌；本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供含復(fù)合發(fā)酵菌液的反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料，根據(jù)反芻7 本發(fā)明所提供的LAg12-7、（Lactobacillusacidophilus。LAg12-7嗜酸乳桿菌己于2012年8月由中國典型培養(yǎng)大學(xué)（ 存活檢測日期2012年8月7日為：CCTCCM、OD6002.86（低于3.50（見圖2）；該菌對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌的抑菌圈分別是3 一種功能：潤增加42.94％～76.69％11)；10)。養(yǎng)物保藏中心(大學(xué)保藏中心)保藏，其編號為CCTCCM 數(shù)可達(dá)200億/克。 復(fù)合發(fā)酵菌劑組份按重量比LAg127嗜酸乳桿菌凍干粉30.0～60.0枯草20.0～50.0％10.0～30.0％。 上述LAg12-7嗜酸乳桿菌同于由中國典型培養(yǎng)物保藏中心(大學(xué)保藏中心)保藏，其編號為CCTCCM 菌凍干粉購自安琪酵母，其活菌數(shù)為200億/克。[0016] 使用復(fù)合發(fā)酵菌劑對底物進(jìn)行發(fā)酵前需將復(fù)合發(fā)酵菌劑先活化制成合發(fā)酵菌液。合發(fā)酵菌液的方法是按重量比稱取5.0～15.0％的紅糖加入80.0～90.0％的清潔水待紅糖溶化后加入復(fù)合發(fā)酵菌劑0.3～1.0％維生素C0.1～0.4％素2.0～5.0％和磷酸二氫鉀0.1～0.5％攪拌均勻保持溫度和時(shí)間為32℃條件下保溫2～3天保溫期間每天攪拌一次溶液pH值即能降到4.0以下獲得活化好的復(fù)合發(fā)酵菌液。[0017] 3反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料的組成配方和制作方法根據(jù)反芻動(dòng)物營養(yǎng)需要和飼喂特點(diǎn)，先用重量比為75.0～85.0％的發(fā)酵主料與10.0～20.0％的發(fā)酵輔料進(jìn)行混合，再加入2.0～6.0％的復(fù)合發(fā)酵菌液進(jìn)行充分混合制 玉米纖維25.0～45.0％、醬糟20.0～40.0％和木薯渣5.0～15.0％直接混合。 0.5％ 復(fù)合發(fā)酵菌液 [0022]玉米黃漿液的含水量為58～60％噴漿10～12％醬糟的含水量為10～12％；)。)。LAg12-7CCTCCM)。該菌接種于母菌有很好的配使發(fā)酵飼料中pH值在24小時(shí)以內(nèi)迅速降至4.0抑制有害微量纖維素蛋白酶等消化酶。經(jīng)7～20天發(fā)酵即得成品反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料?？裳b載 物飼料成本4％左右。 本發(fā)明的反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料在環(huán)境溫度30℃～40℃條件下保質(zhì)70～90天[0031]1LAg12-7圖2LAg12-7嗜酸乳桿菌的產(chǎn)酸能力圖。MRS培養(yǎng)10.00g酵母膏5.00g牛肉膏10.00g葡萄糖20.00g1000ml，pH6.2～6.4115℃30min。 藏，其編號為CCTCCM [0035]1.3LAg12-7將LAg12-7嗜酸乳桿菌活MRS液體培養(yǎng)37℃條件下一定時(shí)間取樣測定pH以未接種的MRS液體培養(yǎng)基的pH為初始pH。結(jié)果見圖2可見培養(yǎng)36小時(shí)以后，LAg12-7pH3.50。時(shí)間后測定發(fā)酵液pH以未接種的MRS液體培養(yǎng)基的pH為初始pH。結(jié)果表該菌種培養(yǎng)后pH快速下培養(yǎng)36hpH下降趨勢趨培養(yǎng)60hpH3.45.可見培養(yǎng)[0037]1.4LAg12-7MRS22％(V/V)MRS100下放置2小時(shí)后的存活率為69.32％。4個(gè)梯度：0.10.30.5％和0.7以不加膽鹽的培養(yǎng)基為對照。將菌種接種在MRS液體培養(yǎng)基上活化2次，以2％接種量接種于處理樣與對37℃條件下靜置培養(yǎng)2小時(shí)后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。鹽條件下培養(yǎng)2小時(shí)后的存活率為53.60％。室溫下擴(kuò)散30min在37℃條件下培養(yǎng)16-18小時(shí)觀察抑菌圈。結(jié)果如表3所示。 表3LAg12-7嗜酸乳桿菌的抑菌圈直徑(單位mm)該復(fù)合發(fā)酵菌劑的組成和重量比為LAg12-730.050.020.0LAg12-7菌凍干粉和啤酒酵母菌凍干粉在常溫條件下混合均勻就制成反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料用的復(fù)合發(fā)酵菌劑。該復(fù)合發(fā)酵菌劑的組成和重量比為LAg12-760.020.020.0LAg12-7菌凍干粉和啤酒酵母菌凍干粉在常溫條件下混合均勻就制成反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料用的復(fù)合發(fā)酵菌劑。該復(fù)合發(fā)酵菌劑的組成和重量比為LAg12-745.045.010.0LAg12-7菌凍干粉和啤酒酵母菌凍干粉在常溫條件下混合均勻就制成反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料用的復(fù)合發(fā)酵菌劑。該復(fù)合發(fā)酵菌劑的組成和重量比為LAg12-740.030.030.0LAg12-7菌凍干粉和啤酒酵母菌凍干粉在常溫條件下混合均勻就制成反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料用的復(fù)合發(fā)酵菌劑。復(fù)合發(fā)酵菌液的組成及重量紅5.0合發(fā)酵菌劑1.0維生素C0.4％、尿素3.1％0.5％和清潔水90.0％。 復(fù)合發(fā)酵C尿素和磷酸二保持溫度和時(shí)間為32條件下～3天pH值即能降4.0酵菌 復(fù)合發(fā)酵菌液的組成及重量比為糖15.0％、復(fù)合發(fā)酵0.3％、維生C0.1％、復(fù)合發(fā)酵菌液的組成及重量比為：紅8.70、復(fù)合發(fā)酵菌劑0.52、維生素C于實(shí)施例6。反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料中各原料的配方如下：和木薯渣15.0％；氯化鎂1.0％；3.1％0.5％90.0反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料的原料組成和重量比為：發(fā)酵主料75.0 合；合；發(fā)酵菌液；獲得成品反芻動(dòng)物微生態(tài)功或在環(huán)境6～15℃條件5～7天，獲得成[0053]11、反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料的制作方法反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料中各原料的配方如下：和木薯渣5.0％；鈉8.0％3.0％；2.0％0.1％82.5反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料的原料組成和重量比為：發(fā)酵主料85.0 反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料中各原料的配方如下：發(fā)酵主料的組成及重量比為黃漿液25.0％噴漿玉米纖維30.0％、醬糟40.0％和木薯渣5.0％；發(fā)酵輔料的組成及麥600啤酒酵母260碳酸6.0％碳酸氫鈉4.0％4.0％；復(fù)合發(fā)酵菌液的組成及重量比為：紅糖8.70、復(fù)合發(fā)酵菌劑0.52％、維生素C于實(shí)施例6；反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料的原料組成和重量比為：發(fā)酵主料84.0％、發(fā)酵輔 反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料中各原料的配方如下：和木薯渣5.0％；鈉4.0％4.0％；復(fù)合發(fā)酵菌液的組成及重量比為糖13.1％、復(fù)合發(fā)酵1.0％、維生C0.4％、6；[0058]1025％40％的本發(fā)明反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料，可 對照組(基礎(chǔ)精料)為場里I組用本發(fā)明的含嗜酸乳桿菌的反芻動(dòng)物微生態(tài)功能飼料替代基礎(chǔ)精料重量的25II組代基礎(chǔ)精料重量的40％。各處理組精料的重量比配方見表4。每頭肉牛每天飼喂4kg精料和1.7kg的玉米秸稈顆粒飼料自由采食每天記錄每個(gè)試驗(yàn)結(jié)束前三天飼料樣品和糞樣采用4NHCl酸不溶灰分(AIA)法測定蛋白質(zhì)和粗纖維的消化率。AIA法消化率的計(jì)算如下：肉牛屠宰后取瘤胃液，采用RT-PCR絕對定量方法測定瘤胃微生物的數(shù)量，所測定的四種瘤胃微生物為：黃色瘤胃球菌(Ruminococcusflavefaciens)、白色瘤胃球菌(Ruminoloccusalbus)(Lactobacillusspp)和牛鏈球菌(Streptococcusbovis)，其16SrDNAPCR5。頸靜脈血液20ml室溫下靜置半小時(shí)后3000prm離心15分鐘，制得-20℃冰箱保薦待用?？偟鞍?BCA法)、白蛋白(溴甲酚綠法)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(賴氏法)、免疫球蛋白(IgAIgG和IgM總抗氧化能總超氧化物歧化酶和丙二醛濃度均采用試0.30kg13.244.46(P0.05)。各處理組的日增重見表7果表試驗(yàn)期I組和II組每頭肉牛分別比多對照組多增重4.59kg和4.91kg日增重比對照組分別提高7.89％和8.77但各組差異不顯著(P＞0.05)。是瘤胃中主要的乳酸產(chǎn)生菌。從表9可以態(tài)功能飼料增加瘤胃纖維分解菌(黃色瘤胃球菌(R.flavefaciens)和白色瘤胃球菌(R.albus)