第七章體液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)

本章內(nèi)容概要：第二節(jié)體液蛋白質(zhì)測(cè)定第一節(jié)概述1現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四1、掌握血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（前白蛋白、白蛋白）的來(lái)源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的測(cè)定方法和原理。2、熟悉急性時(shí)相反應(yīng)蛋白的概念和種類；血清球蛋白和纖維蛋白原的測(cè)定方法。3、了解其他蛋白質(zhì)的來(lái)源和生理功能；尿液蛋白和腦脊液蛋白的檢測(cè)。本章教學(xué)要求：2現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四第一節(jié)概述3現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四一、血漿蛋白質(zhì)的分類和功能組成：種類：1000種500種200種含量：μgmgg來(lái)源：肝臟是蛋白質(zhì)主要的加工廠（一）血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四①營(yíng)養(yǎng)作用，修補(bǔ)組織蛋白;②維持血漿膠體滲透壓：主要是白蛋白；③作為PH緩沖系統(tǒng)的一部分：酸性或堿性蛋白質(zhì)；④運(yùn)輸作用：作為激素、維生素、脂類、代謝產(chǎn)物、離子、藥物等的載體；⑤體液免疫防御系統(tǒng)：作為免疫球蛋白與補(bǔ)體等免疫分子；⑥催化作用：酶的本質(zhì)；⑦代謝調(diào)控作用；作為底物，酶或中間產(chǎn)物抑制或激活組織蛋白酶；⑧參與凝血與纖維蛋白溶解；：除Ⅳ因子外均可。血漿蛋白質(zhì)的功能5現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四血漿蛋白質(zhì)的分類6分離方法鹽析法：白蛋白/球蛋白（pH7.0半飽和的硫酸銨溶液）電泳法：醋酸纖維素薄膜電泳：6種瓊脂糖凝膠電泳：13種聚丙烯酰胺凝膠電泳：30種SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：300種分辨率增高---+纖維蛋白原醋酸纖維素薄膜6現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：5個(gè)成分清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白分辨率高時(shí)：可有7個(gè)成分有β1和β2α2中也可有兩條聚丙烯酰胺凝膠電泳：可以分出30多種蛋白質(zhì)醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：5個(gè)成分清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白2.電泳分類法是臨床實(shí)驗(yàn)室常用的血漿蛋白質(zhì)電泳方法分辨率高時(shí)：可有7個(gè)成分有β1和β2α2中也可有兩條聚丙烯酰胺凝膠電泳：可以分出30多種蛋白質(zhì)現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四3.功能分類法（1）運(yùn)輸載體類血漿脂蛋白：包括CM、VLDL、LDL、HDL等前清蛋白與清蛋白甲狀腺素結(jié)合球蛋白皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白類固醇激素結(jié)合球蛋白視黃醛結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白觸珠蛋白血色素結(jié)合蛋白銅藍(lán)蛋白8現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四（2）蛋白酶抑制物：包括α1-抗胰蛋白酶、α1-抗糜蛋白酶、 α2-巨球蛋白等6種以上（3）血清酶類：血漿固有酶如LCAT等組織細(xì)胞少量釋放的細(xì)胞內(nèi)酶細(xì)胞破裂而進(jìn)入血循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)酶（4）蛋白類激素：胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素等（5）凝血蛋白類（6）免疫球蛋白類（7）補(bǔ)體蛋白類（2）蛋白酶抑制物：包括α1-抗胰蛋白酶、α1-抗糜蛋白酶、 α2-巨球蛋白等6種以上（3）血清酶類：血漿固有酶如LCAT等組織細(xì)胞少量釋放的細(xì)胞內(nèi)酶細(xì)胞破裂而進(jìn)入血循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)酶（4）蛋白類激素：胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素等（5）凝血蛋白類（6）免疫球蛋白類（7）補(bǔ)體蛋白類還有許多種類的蛋白質(zhì)未被認(rèn)識(shí)還有許多種類的蛋白質(zhì)未被認(rèn)識(shí)2.功能分類法現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四

1.作為運(yùn)載蛋白2.組織蛋白酶抑制物3.在血漿中起催化作用的酶4.參與代謝調(diào)控作用的蛋白質(zhì)和肽類激素5.參與凝血與纖維蛋白溶解6.組成體液免疫防御系統(tǒng)（Ig與補(bǔ)體 ）

所有血漿蛋白質(zhì)能

維持血漿膠體滲透壓組成血液pH緩沖系統(tǒng)（二）血漿蛋白質(zhì)的功能生物化學(xué)現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四急性時(shí)相反應(yīng)（acutephasereaction，APR）：血漿蛋白質(zhì)對(duì)急性炎癥和組織損傷的非特異性反應(yīng)。

此時(shí)許多蛋白質(zhì)：如α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、C4、C3、纖維蛋白原和C-反應(yīng)蛋白等濃度顯著升高或升高，而少數(shù)蛋白質(zhì)如前清蛋白、清蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白則出現(xiàn)相應(yīng)下降。急性時(shí)相反應(yīng)蛋白(acutephasereactive protein，APP)：對(duì)急性炎癥和組織損傷起非特異反應(yīng)從而出現(xiàn)濃度變化的血漿蛋白質(zhì)。增加的蛋白質(zhì)稱為正向APP下降的蛋白質(zhì)稱為負(fù)向APP1. 急性時(shí)相反應(yīng)（三）影響血漿蛋白質(zhì)濃度的因素11現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四機(jī)體哪些情況會(huì)出現(xiàn)急性時(shí)相反應(yīng)？急性細(xì)菌性感染如急性肺炎、鏈球菌感染性腎炎急性非特異性炎癥如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病等急性心肌梗死惡性腫瘤手術(shù)、創(chuàng)傷12現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四APR的機(jī)制炎癥損傷部位釋放的細(xì)胞因子，包括白介素、腫瘤壞死因子α和β、干擾素以及血小板活化因子等，引發(fā)肝細(xì)胞中上述蛋白質(zhì)合成量的改變。正向APP是機(jī)體防御機(jī)制的一個(gè)部分，如：增加的蛋白酶抑制劑控制組織中的酶活性觸珠蛋白保護(hù)從破壞紅細(xì)胞中釋放的HbC反應(yīng)蛋白等可活化補(bǔ)體負(fù)向APP多作為營(yíng)養(yǎng)蛋白，此時(shí)合成減少，可為合成正向APPs提供更多的氨基酸原料。13現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四APR的時(shí)相C-反應(yīng)蛋白：首先升高α1-酸性糖蛋白：12小時(shí)內(nèi)也升高α1-抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、C4和纖維蛋白原然后升高C3和銅藍(lán)蛋白：最后是升高通常在2～5天內(nèi)這些APPs達(dá)到最高值14現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四測(cè)定APP的臨床意義幫助監(jiān)測(cè)炎癥的發(fā)生、變化和觀察治療反應(yīng)，尤其是那些升高最早和最多的蛋白質(zhì)15現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四30二、血清蛋白質(zhì)電泳組分的臨床分析血漿蛋白質(zhì)和血清蛋白質(zhì)有何不同？血漿：為生理狀況血清：為常用檢測(cè)標(biāo)本血漿蛋白質(zhì)和血清蛋白質(zhì)有何不同？血漿：為生理狀況血清：為常用檢測(cè)標(biāo)本現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四31（一）血清蛋白質(zhì)電泳的正常組分及其含量清蛋白： 57％～68％α1球蛋白：1.0％～5.7％α2球蛋白：4.9％～11.2％β球蛋白： 7％～13％γ球蛋白： 9.8％～18.2％醋纖膜電泳正常百分含量清蛋白： 57％～68％α1球蛋白：1.0％～5.7％α2球蛋白：4.9％～11.2％β球蛋白： 7％～13％γ球蛋白： 9.8％～18.2％醋纖膜或瓊脂糖電泳正常區(qū)帶區(qū)帶圖譜掃描圖譜kk現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四1.腎病綜合征2.肝硬化正常圖譜典型的β-γ橋不典型β-γ橋IgG型IgA型3.多發(fā)性骨髓瘤α2β典型的異常電泳圖譜及其掃描曲線現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四（四）γ球蛋白增多與M蛋白?Ig多克隆性增多：γ區(qū)帶呈彌散性升高見(jiàn)于反復(fù)或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細(xì)胞疾病或寄生蟲感染。?Ig單克隆性增多－M蛋白：γ區(qū)帶局部有深染窄帶漿細(xì)胞病、尤其惡性漿細(xì)胞病時(shí)，異常漿細(xì)胞單克隆增殖，產(chǎn)生大量單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段，病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白Ig多克隆性增多：γ區(qū)帶呈彌散性升高見(jiàn)于反復(fù)或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細(xì)胞疾病或寄生蟲感染。Ig單克隆性增多－M蛋白：γ區(qū)帶局部有深染窄帶漿細(xì)胞病、尤其惡性漿細(xì)胞病時(shí)，異常漿細(xì)胞單克隆增殖，產(chǎn)生大量單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段，病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白21現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四二、血漿蛋白質(zhì)（一）前白蛋白（PA）（二）白蛋白（ALB）（三）α1-酸性糖蛋白（AAG）（四）甲胎蛋白(AFP)

（五）結(jié)合珠蛋白(Hp)（六）α2-巨球蛋白(AMG)（七）銅藍(lán)蛋白(CER/CP)（八）轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)（九）β2－微球蛋白(BMG)（十）C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)22現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：MW=54000，四個(gè)相同亞基構(gòu)成的四聚體。理化性質(zhì)：pＩ＝4.7，肝細(xì)胞合成，半壽期12小時(shí)。測(cè)定方法：免疫比濁法／免疫擴(kuò)散技術(shù)。

23現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，載體功能（甲狀腺素／維生素Ａ）。臨床意義：1.作為營(yíng)養(yǎng)不良的早期指標(biāo)；2.作為肝功能不全的指標(biāo)，比Alb更靈敏；3.負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，急性炎癥，惡性腫瘤，肝硬化及腎炎等情況下，PA迅速降低。參考值：0.18～0.45g/L。24現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

25現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四26現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四27現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：585個(gè)aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，MW=66458，含17個(gè)二硫鍵。理化性質(zhì)：pI=4－5.8，肝細(xì)胞合成但不儲(chǔ)存，半衰期為15-19天，占總蛋白的40%－60%，pＨ7.4時(shí)帶負(fù)電。測(cè)定方法：色素結(jié)合法:溴甲酚綠（BCG），溴甲酚紫（BCP）,鹽析等。（二）白蛋白（ALB）急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

28現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：營(yíng)養(yǎng)作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓和正常pＨ值。臨床意義：合成受食物影響，敏感性較低。降低:在營(yíng)養(yǎng)不良，肝功不全，急慢性肝疾病時(shí);增高:少見(jiàn),假性升高。參考值：35-50g/Ｌ29現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：蛋白酶抑制物（具有90％的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的pＨ依賴性。臨床意義：降低：血漿AAT僅見(jiàn)于胎兒呼吸迫綜合癥。升高：炎癥、術(shù)后，某些激素治療后。參考值：0.83－1.99g/L30現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：181個(gè)aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，MW=4萬(wàn)，含45%的糖，其中唾液酸占11%－12%。理化性質(zhì)：pI值2.7－3.5，肝合成，膿毒癥時(shí)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞及某些腫瘤組織也可合成。位于α1-球蛋白區(qū)帶。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法（擴(kuò)散,濁度）,化學(xué)法（間接法），ELISA法等（三）α1-酸性糖蛋白（AAG）急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

31現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：與免疫防御功能有關(guān)，機(jī)制不詳；抑制血小板凝集影響膠原纖維形成；參與脂類運(yùn)輸。臨床意義：升高：急性炎癥，組織損傷，風(fēng)濕，腫瘤，AMI，潰結(jié)時(shí)；降低：營(yíng)養(yǎng)不良降低,嚴(yán)重肝損傷和雌激素作用。參考值：０.25－2.0g/L。32現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：590個(gè)aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，MW=6.5萬(wàn)～７萬(wàn)，含4%的糖。理化性質(zhì)：pI值４.7-４.8，在白蛋白和α1-球蛋白之間。胎兒肝／卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細(xì)胞合成。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法（擴(kuò)散,火箭電泳）,ELISA等（四）甲胎蛋白(AFP)

33現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：胎兒血漿主要蛋白質(zhì)，調(diào)節(jié)肝細(xì)胞生長(zhǎng)和腦細(xì)胞發(fā)育；抑制細(xì)胞和體液的免疫反應(yīng)；維持正常妊娠，防止母嬰排斥。臨床意義：胎兒產(chǎn)前監(jiān)測(cè)（羊水或母血）增高：原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別（80%原發(fā)增高），其他癌癥也可見(jiàn)增高。參考值：20-100μg/L(成人)

<5μg/L(新生兒)

34現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：兩對(duì)肽鏈形成四聚體，有變異體。理化性質(zhì)：肝合成，pI值為4.1，電泳位a2-球蛋白區(qū)帶測(cè)定方法：電泳法，免疫化學(xué)法（擴(kuò)散,濁度）,化學(xué)法等（五）結(jié)合珠蛋白(Hp)

急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

35現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：與紅細(xì)胞中釋出自由Hb結(jié)合,防止Hb從尿中丟失保存鐵,急性溶血后一周再生恢復(fù)。高效的過(guò)氧化物酶。需鐵細(xì)菌的天然抑菌劑。臨床意義：升高：急性時(shí)相反應(yīng)；降低：血管內(nèi)溶血時(shí)；雌激素作用。參考值：0.5-2.2g/L36現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：

MW=62～80萬(wàn),分子量最大，由四個(gè)相同的亞基組成，含糖量約８％。理化性質(zhì)：肝細(xì)胞與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)中合成，半壽期5天。測(cè)定方法：免疫化學(xué)等（六）α2-巨球蛋白(AMG)

不屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

37現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：與多種分子和離子結(jié)合，影響蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護(hù)某些酶的作用）。臨床意義：嬰幼兒及兒童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血癥尤其是腎病綜合征時(shí)，可顯著升高以維持血漿膠體滲透壓；降低：胰腺炎及前列腺癌時(shí)。參考值：38現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：

MW=12-16萬(wàn),1046個(gè)aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，含糖約１０％，每分子銅藍(lán)蛋白可結(jié)合６～８?jìng)€(gè)銅原子。理化性質(zhì)：肝合成,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成少量；pI值為4.4，

具遺傳基因多態(tài)性。測(cè)定方法：免疫化學(xué)（擴(kuò)散或比濁）等（七）銅藍(lán)蛋白(CER/CP)

急性時(shí)相反應(yīng)蛋白

39現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無(wú)毒代謝庫(kù)臨床意義：增加—感染,創(chuàng)傷,腫瘤;降低--營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重肝病及腎綜;協(xié)助診斷Wilson?。ǜ味?fàn)詈俗冃裕﹨⒖贾担?0現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：MW=7.7萬(wàn),單鏈糖蛋白，含糖約６％。理化性質(zhì)：肝細(xì)胞合成，pI值為5.5-5.9,半壽期7天，可逆結(jié)合多價(jià)離子如Fe、Cu、Zn、Co等，一分子TRF可結(jié)合兩個(gè)三價(jià)鐵。測(cè)定方法：免疫擴(kuò)散法，放免法和免疫比濁法等。（八）轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF/Tf)

急性時(shí)相反應(yīng)蛋白41現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：運(yùn)輸鐵。臨床意義：血TRF濃度受鐵供應(yīng)調(diào)節(jié)，缺鐵TRF升高，鐵治療后恢復(fù)?？捎糜谪氀脑\斷（缺鐵性低色素性貧血TRF升高，再障時(shí)TRF正?；蛘呓档停┖蛯?duì)治療的監(jiān)測(cè)。降低:急性時(shí)相反應(yīng)、慢性肝病、營(yíng)養(yǎng)不良及蛋白丟失時(shí)；升高：妊娠或雌激素會(huì)使其降低;缺鐵性低色素貧血。參考值：

2.5--4.3g/L(成人)

1.30--2.75g/L(新生兒)42現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四結(jié)構(gòu)：

MW=11800，100個(gè)aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，分子中含一對(duì)二硫鍵，不含糖。理化性質(zhì)：

pI值為5.7，淋巴細(xì)胞合成，存在細(xì)胞表面，特別是淋巴和腫瘤細(xì)胞。釋放入血循環(huán)。半衰期107分鐘，幾乎由腎小管回收。測(cè)定方法：放射免疫化學(xué)等。

（九）β2－微球蛋白(BMG)

43現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：分子量小，可自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，在腎小管幾乎全部重吸收，可監(jiān)測(cè)腎小管功能；是HLA（人類白細(xì)胞抗原）β鏈的輕鏈部分。

臨床意義：增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時(shí)。參考值：1.0—2.5mg/L（血漿）44現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四性質(zhì)：因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)，可結(jié)合肺炎球菌細(xì)胞壁C-多糖的蛋白質(zhì)而命名。結(jié)構(gòu)：

MW11.5-14萬(wàn)，分子含５個(gè)相同的亞基，亞基間靠非共價(jià)鍵連接成圓盤狀多聚體。理化性質(zhì)：肝合成，pI值為6.2，電泳位于γ區(qū)帶。測(cè)定方法：半定量沉淀法（早），免疫化學(xué)法。（十）C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)急性時(shí)相反應(yīng)蛋白現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四功能：結(jié)合多糖，磷脂和核酸；激活補(bǔ)體，抗凝。臨床意義：第一個(gè)認(rèn)定的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,是急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)敏感指標(biāo)，在ＡＭＩ、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)、腫瘤浸潤(rùn)時(shí)含量迅速升高，達(dá)到正常的2000倍。CRP是非特異性指標(biāo)，需結(jié)合臨床病史。參考值：＜8.0mg/L（血漿）46現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四急性時(shí)相反應(yīng)蛋白分類：升高：其他６種蛋白質(zhì)。降低：前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白47現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四第二節(jié)體液蛋白質(zhì)測(cè)定總蛋白測(cè)定個(gè)別蛋白質(zhì)的測(cè)定蛋白分離測(cè)定技術(shù)發(fā)展趨勢(shì):測(cè)定體液標(biāo)本:血漿：普遍尿液，腦脊液和胸腹水等：有選擇性的組織病變檢查48現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四免疫化學(xué)法特異定量個(gè)別蛋白質(zhì)體液蛋白質(zhì)的測(cè)定方法概括：常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴(kuò)散法，免疫電泳法，微量：放射免疫測(cè)定（RIA），酶免疫測(cè)定法（ELA/ELISA）49現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四電泳測(cè)定：定量化學(xué)測(cè)定TPr，Alb電泳組成圖譜半定量定量染料結(jié)合法，UV法，折光法等50現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四一、血清總蛋白測(cè)定假設(shè)：１、純多肽鏈，含氮量平均為16%２、各種蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑反應(yīng)性一致，僅為相對(duì)定量51現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四測(cè)定依據(jù)：蛋白質(zhì)測(cè)定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)1、元素組成測(cè)定：含N穩(wěn)定；2、重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)：具有多個(gè)肽鍵；3、酪氨酸和色氨酸與Folin-酚試劑反應(yīng)顯色或UV吸收；4、與色素結(jié)合的能力：與染料以離子鍵或共價(jià)鍵連接；5、沉淀后借濁度測(cè)定：光度計(jì)測(cè)定；6、光折射測(cè)定：折射儀測(cè)定。52現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四方法：1.凱氏定氮法－參考方法

2.雙縮脲法(推薦)3.酚試劑法4.散射比濁法5.染料結(jié)合法6.UV法７.折光測(cè)定法53現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四1.凱氏定氮法－參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mgN0.3gpro)消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時(shí)）

蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)；

吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使[H+]

）滴定用已標(biāo)定的無(wú)機(jī)酸滴（使[H+]恢復(fù)），計(jì)算總氮量定蛋白（總氮量-非蛋白氮）×6.25=蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成正比。

原理：54現(xiàn)在是54頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高，精密度高，靈敏度高，是公認(rèn)的參考方法。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，不適合常規(guī)檢測(cè)，血清各蛋白含氮量會(huì)有所變化尤其是疾病時(shí)。

應(yīng)用：標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定及校正其它常規(guī)方法55現(xiàn)在是55頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四2.雙縮脲法原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。條件：至少含兩個(gè)肽鍵（-CONH-）基團(tuán)才能和Cu2+形成絡(luò)合物,氨基酸及二肽無(wú)反應(yīng),三肽以上才能反應(yīng)。雙縮脲生成

加熱＋NH322H－180022222N端C端56現(xiàn)在是56頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，10g-120g/L線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)CV%＜2%，顯色穩(wěn)定。缺點(diǎn)：靈敏度較差，對(duì)蛋白質(zhì)含量低的體液標(biāo)本不適合。

應(yīng)用：常規(guī)推薦方法。手工或上機(jī)使用。57現(xiàn)在是57頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四3.酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，

Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。58現(xiàn)在是58頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μg），適合測(cè)定蛋白含量少的標(biāo)本。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸比例不同，只適合測(cè)定單一蛋白質(zhì)。受一些藥物干擾。

59現(xiàn)在是59頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四4.比濁法原理：

評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。缺點(diǎn)：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應(yīng)溫度，蛋白絮狀沉淀等）

某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀，測(cè)其濁度，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，可求蛋白含量。60現(xiàn)在是60頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四5.染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-NH3+)與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法比色測(cè)定。原理：常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍(lán)等評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點(diǎn)：特異性不高；不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致，標(biāo)準(zhǔn)物不易確定。

61現(xiàn)在是61頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四6.紫外分光光度法

蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質(zhì)溶液在280nm處有一吸收峰?？捎糜跍y(cè)定蛋白質(zhì)但需避免核酸干擾。（1）Lowry-Kalcker公式蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260

（2）Warburg-Christian公式蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=1.55A280-0.76A260

原理：62現(xiàn)在是62頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計(jì)及石英比色皿。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測(cè)定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；導(dǎo)致準(zhǔn)確性和特異性受影響。措施：在220-225nm波長(zhǎng)區(qū)域，用0.15mol/l的NaCl稀釋1000-2000倍可消除干擾。63現(xiàn)在是63頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四7.折光測(cè)定法

溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定波長(zhǎng)和溫度下，光折射率和血清中蛋白質(zhì)含量成正比。原理：評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速，易掌握，重復(fù)性較好，適合臨床急診，體檢篩查和胸腹水蛋白質(zhì)測(cè)定。缺點(diǎn)：準(zhǔn)確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影響，會(huì)由于A/G比值變化而產(chǎn)生誤差。

64現(xiàn)在是64頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四參考范圍：成人60－80g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降低：①丟失過(guò)多

②消耗增加

③白蛋白合成減少

④水腫真性升高：MM、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機(jī)體明顯失水，總蛋白含量相對(duì)升高，A/G幾乎不變65現(xiàn)在是65頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四二、血清白蛋白測(cè)定方法：1.染料結(jié)合法(推薦)

2.鹽析法3.電泳法4.免疫化學(xué)法66現(xiàn)在是66頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四1.染料結(jié)合法(推薦)原理:血清ALB可通過(guò)離子鍵或疏水鍵與包括染料在內(nèi)的各種有機(jī)離子結(jié)合,而GLB很少結(jié)合外源性染料,可在不分離ALB與GLB的情況下直接測(cè)定ALB。染料BCGBCP優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于和非人源性白蛋白結(jié)合與白蛋白結(jié)合特異性較差與非人源性白蛋白結(jié)合力弱與白蛋白結(jié)合特異性好在30秒內(nèi)測(cè)可提高特異性67現(xiàn)在是67頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四應(yīng)用及評(píng)價(jià):嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間的BCG法既適合手工也適合自動(dòng)化分析。臨床上推薦使用。68現(xiàn)在是68頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四原理:

鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質(zhì)的水化膜、中和其所帶的電荷從而使蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀析出。各種蛋白質(zhì)的親水性和帶電荷不同，故鹽析時(shí)所需鹽濃度與pH不同。GLB在生理pH下帶電荷及水化膜比ALB少，可被較低濃度中性鹽沉淀。2.鹽析法中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等69現(xiàn)在是69頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四應(yīng)用及評(píng)價(jià):操作繁瑣，不宜自動(dòng)化，基本不用70現(xiàn)在是70頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四3.電泳法操作：醋纖膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染色分離測(cè)得蛋白組分百分比計(jì)算得出各種蛋白質(zhì)含量半定量定量71現(xiàn)在是71頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血清蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：電泳技術(shù)繁瑣，不易自動(dòng)化；白蛋白與染料親和力高會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏高72現(xiàn)在是72頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),生化檢驗(yàn)用的不多.73現(xiàn)在是73頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四參考范圍:成人35－55g/L.臨床意義：白蛋白升高：白蛋白降低：①丟失過(guò)多

②消耗增加

③白蛋白合成減少

④水腫

⑤先天性ALB缺乏病真性升高：未見(jiàn)假性升高：機(jī)體明顯失水，或治療輸入過(guò)多白蛋白74現(xiàn)在是74頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期四三、血清球蛋白測(cè)定方法：間接法:TP-ALB=GLB直接法:乙醛酸比色法(GLB中的色氨酸遠(yuǎn)大于ALB中的色氨酸含量)色氨酸+乙醛酸紫色化合物H+Hopkins-Cole反應(yīng):參考范圍:成人20－30g/L.