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文檔簡介

乙型病毒性肝炎的實驗室檢查報告人:付紅偉檢驗中心2011.1.21我國HBV感染概況一般人群HBsAg攜帶率高達(dá)7.18%;現(xiàn)有慢性HBV感染者約9300萬人,占全世界的1/4;其中慢性乙型病毒性肝炎患者超過

2000萬例,占全世界慢性乙肝患者的1/3;15歲以下兒童HBsAg攜帶率下降顯著,1-4歲組僅為0.96%;1~4歲組HBsAb陽性率由1992年15.75%升至72.25%;抗HBcAb陽性率由1992年30.08%降至3.76%;2HBV基因組HBVDNA是由長鏈L(負(fù)鏈)

和短鏈S(正鏈)

組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA,短鏈的長度相當(dāng)于長鏈的50%~85%。HBVDNA長鏈載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼,有4個開放讀碼框架(ORF),分別稱為S、C、P和X區(qū)。編碼7個蛋白質(zhì)。HBVDNA易發(fā)生變異,特別是前S或S區(qū)基因較易突變。嗜肝DNA病毒的共同特點:內(nèi)含3~3.3kb松散環(huán)狀、部分雙鏈DNA基因組及DNA聚合酶;病毒的復(fù)制需逆轉(zhuǎn)錄過程。3e抗原(HBeAg):是可溶性蛋白質(zhì)只存在于血液中是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志e抗體(抗-HBe):對HBV感染有一定的保護(hù)作用其出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工HBeAg只存在于血清中HBVC基因分泌到細(xì)胞外2.HBeAg和抗-HBe5HBV的三種形態(tài)1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere67HBV自然復(fù)制周期1.乙型肝炎的生物化學(xué)檢測主要指標(biāo):ALT,AST,ASTm,血清白蛋白,血清膽紅素,膽堿酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原時間(PT)及部分凝血因子;9方法學(xué)的發(fā)展ELISA:靈敏性高,成本低,適用于普通病人篩查;膠體金免疫層析法(金標(biāo)法):簡便易行,可用于急診病人快速檢測;化學(xué)發(fā)光法定量檢測:價格昂貴,可用于HBVMs為臨界值的病人的確證;可間接反映宿主HBV的復(fù)制水平,在評價抗病毒治療的病毒學(xué)應(yīng)答、療效和判斷預(yù)后方面有重要意義。新增檢測指標(biāo)Pre–S1、Pre–S2及其相應(yīng)抗體對乙肝兩對半的新認(rèn)識102.HBV血清標(biāo)志物檢測11HBV血清標(biāo)志物檢測方法的成本效果分析(1)13Terminal

proteinSpacerReverse

Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344preS1preS2Ss1s266HBsAgXMutationofS&Pre-SS基因“a”決定簇

G145R

變異,與抗-HBs的親和力降低S基因變異可導(dǎo)致隱匿性HBV感染(occultHBVinfection),表現(xiàn)為血清HBsAg陰性,但仍可有HBV低水平復(fù)制(血清HBVDNA常<104拷貝/ml)獻(xiàn)血員人群,隱匿性HBV感染的檢出率可達(dá)0.19%141517大三陽小三陽vsHBV血清學(xué)標(biāo)志檢測結(jié)果分析1619類型HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb樣本數(shù)(n)構(gòu)成比(%)1+---+40.212+-+-+231.203+--++985.114----+462.405---++683.556-+-++1849.607-+--+633.298-+---47024.539-----96050.10合計1257172335048619161001916例HBV血清標(biāo)志物陽性類型分布模式2122HBVDNA定量檢測病毒復(fù)制水平最可靠,最直接的證據(jù),與傳染性和疾病進(jìn)展密切相關(guān);主要用于HBV感染的判斷,治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。HBV基因分型基因分型的必要性;基因分型的主要方法;HBV耐藥突變的檢測3.HBV分子生物學(xué)診斷慢性HBV感染治療適應(yīng)癥的選擇HBeAg陽性,HBVDNA載量>105copies/ml,ALT>2×ULN;HBeAg陰性,HBVDNA載量>104copies/ml,ALT>2×ULN;HBVDNA持續(xù)陽性,年齡>40歲,ALT大于正常上限,也可給予抗病毒治療;HBVDNA持續(xù)陽性,年齡>40歲,ALT持續(xù)正常,應(yīng)密切隨訪,動態(tài)觀察疾病進(jìn)展,必要時行肝組織檢測,有病變證據(jù)時,可以給予抗病毒治療;23HBVDNA定量檢測試劑盒的性能對比2526同時可以實現(xiàn)對HCV,HIV-1,衣原體,及淋病的一體化檢測BackB型特異性“引物對”的特異度分析B型特異性引物HB(正義鏈):5’-ACCGTGAACGCCCACMGGAA-3’29Back4.HBV臨床藥物治療監(jiān)測乙肝病毒的耐藥性檢測,是精準(zhǔn)治療乙肝的關(guān)鍵??!目前由于治療不夠規(guī)范,造成我國目前超過95%的乙肝患者發(fā)生耐藥、病毒變異、病毒耐藥,變異檢測勢在必行!拉米夫定是第一個被批準(zhǔn)治療慢性乙型肝炎的口服抗病毒藥,已在全世界廣泛應(yīng)用。但其耐藥發(fā)生率高,治療1年時耐藥發(fā)生率為23%,2年為46%,3年為55%,4和5年分別為65%和71%。30耐藥---核苷(酸)類似物(NA)治療失敗最重要原因31拉米夫定LMV阿德福韋酯ADV替比夫定LdT恩替卡韋ETVHBV替諾福韋TDVNAs:抑制病毒復(fù)制長期使用耐藥變異臨床耐藥表型耐藥基因耐藥耐藥研究323334PolymeraseTerminal

proteinSpacerReverse

Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)某些位點變異與耐藥相關(guān)preS1preS2HBsAgs1s266可同時分析:耐藥變異,HBsAg變異,基因型,血清型全長RT區(qū)分析技術(shù)路線HBVDNA提取snPCR擴(kuò)增RT區(qū)PCR產(chǎn)物直接測序生物信息學(xué)分析與數(shù)據(jù)信息挖掘血清與資料收集Neg.BCkb可

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