第十一章革蘭氏陰性需氧桿菌

重要的革蘭氏陰性需氧桿菌布氏桿菌屬伯克氏菌屬假單胞菌屬波氏菌屬弗朗西斯菌屬現(xiàn)在是1頁\一共有53頁\編輯于星期四第一節(jié)布氏桿菌屬（Brucella）布氏桿菌是多種動(dòng)物和人布氏桿菌病的病原。該菌不僅危害畜牧生產(chǎn)，而且嚴(yán)重?fù)p害人類健康，因此在醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都極為重視?，F(xiàn)在是2頁\一共有53頁\編輯于星期四一、主要生物學(xué)特性

（一）形態(tài)及染色

球桿狀或短桿狀，長0.6～1.5μm，多單在。不形成芽孢和莢膜，無鞭毛不運(yùn)動(dòng)。革蘭氏染色陰性?？率先旧ú际蠗U菌呈紅色，其他菌呈綠色或藍(lán)色?，F(xiàn)在是3頁\一共有53頁\編輯于星期四布氏桿菌現(xiàn)在是4頁\一共有53頁\編輯于星期四（二）生長要求與培養(yǎng)特性

生長要求初代分離營養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)基中常需加入血清、血液、肝湯、葡萄糖或泛酸鈣和赤蘚醇等。需氧，適溫37℃，最適pH6.6～7.4。流產(chǎn)布氏桿菌和綿羊布氏桿菌初代分離時(shí)尚需5％～10％CO2環(huán)境?，F(xiàn)在是5頁\一共有53頁\編輯于星期四培養(yǎng)特性

初次分離時(shí)生長緩慢，需5～10d甚至20～30d才能長出菌落，但實(shí)驗(yàn)室傳代保存的菌株，培養(yǎng)48～72h即可生長良好。肝湯肉湯呈輕微渾濁生長，無菌膜。但培養(yǎng)日久，可形成菌環(huán)。血清肝湯瓊脂形成無色透明、隆起、光滑、濕潤、有光澤、邊緣整齊的圓形小菌落。直徑0.5～1.0mm?，F(xiàn)在是6頁\一共有53頁\編輯于星期四（三）生化反應(yīng)

本菌能分解尿素，能產(chǎn)生硫化氫。根據(jù)不同生物型產(chǎn)生硫化氫的情況、脲酶作用時(shí)間和對(duì)堿性染料抑制作用的敏感性不同，可鑒別不同種型的布氏桿菌?，F(xiàn)在是7頁\一共有53頁\編輯于星期四（四）種和生物型

種

型流產(chǎn)布氏桿菌（Br.abortus）1、2、3、4、5、6、7型

馬爾他布氏桿菌（Br.melitensis）1、2、3型豬布氏桿菌（Br.suis）1、2、3、4、5型綿羊布氏桿菌（Br.ovis）1個(gè)沙林鼠布氏桿菌（Br.neotomae）1個(gè)犬布氏桿菌（Br.canis）1個(gè)田鼠布氏桿菌（Br.microti）？牛布氏桿菌（Br.ovis）？海豹布氏桿菌（Br.pinnipediae）

？海豚布氏桿菌（Br.cetacease）

？現(xiàn)在是8頁\一共有53頁\編輯于星期四（五）抗原性布氏桿菌具有A和M兩種表面抗原，兩者的含量在不同的種型間有差異。流產(chǎn)布氏桿菌以A抗原為主，馬爾他布氏桿菌以M抗原為主，而豬布氏桿菌兩種抗原含量相近。A抗原和M抗原分別能與相應(yīng)的單相抗血清發(fā)生凝集反應(yīng)?？捎媚囼?yàn)鑒別兩種不同的抗原。現(xiàn)在是9頁\一共有53頁\編輯于星期四

二、致病性本菌致布氏桿菌病，可感染60多種動(dòng)物，包括人類、各種家畜、野生哺乳動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物、鳥類、爬蟲類、兩棲類和魚類。細(xì)菌通過皮膚、口腔、眼結(jié)膜、陰道粘膜等部位侵入體內(nèi)。多數(shù)動(dòng)物為隱性感染。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，豚鼠最易感，小鼠和家兔也可感染。現(xiàn)在是10頁\一共有53頁\編輯于星期四本病特征母畜生殖器官和胎盤發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不孕和多種組織的慢性炎癥（如慢性子宮內(nèi)膜炎、乳房炎、關(guān)節(jié)炎等）。公畜睪丸炎、副睪炎幼畜關(guān)節(jié)炎現(xiàn)在是11頁\一共有53頁\編輯于星期四流產(chǎn)母牛從陰道排出污灰色或棕紅色有惡臭的分泌物現(xiàn)在是12頁\一共有53頁\編輯于星期四病母牛流產(chǎn)，產(chǎn)出發(fā)育較為完全的死胎現(xiàn)在是13頁\一共有53頁\編輯于星期四病牛流產(chǎn)，產(chǎn)出發(fā)育不全的胎兒，全身腫脹，有出血斑現(xiàn)在是14頁\一共有53頁\編輯于星期四流產(chǎn)的胎兒及胎衣現(xiàn)在是15頁\一共有53頁\編輯于星期四胎衣水腫增厚，呈膠樣浸潤，子葉上有出血現(xiàn)在是16頁\一共有53頁\編輯于星期四感染羊陰囊脹大、水腫現(xiàn)在是17頁\一共有53頁\編輯于星期四病公豬睪丸腫大現(xiàn)在是18頁\一共有53頁\編輯于星期四病豬睪丸萎縮現(xiàn)在是19頁\一共有53頁\編輯于星期四現(xiàn)在是20頁\一共有53頁\編輯于星期四現(xiàn)在是21頁\一共有53頁\編輯于星期四現(xiàn)在是22頁\一共有53頁\編輯于星期四病豬關(guān)節(jié)腫脹現(xiàn)在是23頁\一共有53頁\編輯于星期四

三、微生物學(xué)診斷布氏桿菌病常表現(xiàn)為慢性或隱性感染，其診斷和檢疫主要依靠血清學(xué)檢查及變態(tài)反應(yīng)檢查。細(xì)菌學(xué)檢查僅用于發(fā)生流產(chǎn)的動(dòng)物和其他特殊情況?，F(xiàn)在是24頁\一共有53頁\編輯于星期四（一）細(xì)菌學(xué)檢查

1、病料

流產(chǎn)胎兒的胃內(nèi)容物、胎盤、羊水、陰道分泌物、乳汁和尿液等。

2、診斷方法病料柯氏染色涂片鏡檢分離培養(yǎng)純培養(yǎng)鑒定豚鼠血清抗體現(xiàn)在是25頁\一共有53頁\編輯于星期四（二）血清學(xué)檢查1、用已知抗體檢測(cè)抗原

用已知抗體檢查病料中的布氏桿菌，或鑒定分離菌是否為布氏桿菌可用：熒光抗體技術(shù)反向間接血凝試驗(yàn)間接炭凝集試驗(yàn)免疫酶組化法現(xiàn)在是26頁\一共有53頁\編輯于星期四2、用已知抗原檢測(cè)抗體

動(dòng)物感染該菌7～15d出現(xiàn)抗體，檢測(cè)抗體是布病診斷和檢疫的主要手段。方法：玻板凝集試驗(yàn)虎紅平板凝集試驗(yàn)乳汁環(huán)狀試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)現(xiàn)在是27頁\一共有53頁\編輯于星期四試管凝集試驗(yàn)

操作按檢疫規(guī)程進(jìn)行。牛、馬、駱駝血清凝集價(jià)1:100時(shí)判為陽性，1:50為可疑。羊、豬、狗等血清凝集價(jià)1:50為陽性，1:25為可疑?？梢刹⌒笥?～4周后采血重檢，如仍為可疑反應(yīng)，牛、羊即可按陽性處理；豬、馬則須視情況而定?，F(xiàn)在是28頁\一共有53頁\編輯于星期四虎紅平板凝集試驗(yàn)取被檢血清和虎紅平板抗原各0.03ml，滴加于玻板上，混勻，在4～10min內(nèi)出現(xiàn)任何程度凝集者即為陽性反應(yīng)。乳汁環(huán)狀試驗(yàn)為檢查新鮮乳汁中抗體的方法，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性較高，常被用于畜群布氏桿菌病的監(jiān)測(cè)。現(xiàn)在是29頁\一共有53頁\編輯于星期四補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)特異性和敏感性均較凝集試驗(yàn)高，是慢性布氏桿菌病一種可靠的診斷方法，已作為世界各國清除病畜的必要手段。規(guī)定1:10被檢血清阻止溶血在50％以上，即為陽性反應(yīng)。因補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的操作方法復(fù)雜，只在特殊情況下才應(yīng)用?，F(xiàn)在是30頁\一共有53頁\編輯于星期四（三）變態(tài)反應(yīng)檢查變態(tài)反應(yīng)現(xiàn)象一般在感染后的20～25d出現(xiàn)，因此不宜作早期診斷。本法適合于動(dòng)物的大群檢疫，主要用于綿羊和山羊，其次為豬。檢測(cè)時(shí)，將布氏桿菌水解素0.2ml注射于羊尾根皺襞部或豬耳根部皮內(nèi)，24及48h后各觀察反應(yīng)一次。若注射部發(fā)生紅腫，即判為陽性反應(yīng)。此法對(duì)慢性病例的檢出率較高?，F(xiàn)在是31頁\一共有53頁\編輯于星期四四、免疫防治我國目前用的疫苗：M5弱毒活菌苗可用于牛、羊和鹿布病的預(yù)防。皮下注射或氣霧免疫。免疫期羊1年半，牛、鹿各為1年。M90弱毒活菌苗同M5弱毒活菌苗。S2弱毒活菌苗可用于豬、羊、牛等動(dòng)物，甚至可以接種懷孕動(dòng)物而不引起流產(chǎn)。免疫方法采用飲水、氣霧和皮下注射3種。免疫期豬為1年，牛和羊均為2年。現(xiàn)在是32頁\一共有53頁\編輯于星期四第二節(jié)伯克氏菌屬（Burkholderia）是新建立的一個(gè)屬，該屬成員來自假單胞菌屬Ⅱ群，現(xiàn)有30多種細(xì)菌，對(duì)人畜致病的主要有鼻疽伯克氏菌及偽鼻疽伯克氏菌?，F(xiàn)在是33頁\一共有53頁\編輯于星期四一、鼻疽伯克氏菌（B.mallei）鼻疽伯克氏菌，原名鼻疽假單胞菌，慣稱鼻疽桿菌，為馬、騾、驢等單蹄獸鼻疽病的病原體，也能感染人及其他家畜和多種野生動(dòng)物。此病可呈急性或慢性經(jīng)過，病變特征為皮膚、鼻腔粘膜、肺臟及其他實(shí)質(zhì)器官形成典型的鼻疽結(jié)節(jié)和潰瘍?，F(xiàn)在是34頁\一共有53頁\編輯于星期四（一）形態(tài)及染色

G－中等大小桿菌，無芽孢、無莢膜、不運(yùn)動(dòng)。單獨(dú)散在。美藍(lán)染色可見異染顆粒，是本菌的形態(tài)特征?，F(xiàn)在是35頁\一共有53頁\編輯于星期四（二）生長要求及培養(yǎng)特性

生長要求專性需氧，普通培養(yǎng)基中生長緩慢，加入適量甘油、血紅蛋白、血液、血清或葡萄糖可促進(jìn)生長，適溫37℃，最適pH為6.4～6.8?，F(xiàn)在是36頁\一共有53頁\編輯于星期四培養(yǎng)特性

甘油肉湯均勻渾濁生長，并逐漸形成灰白色粘稠沉淀，10～15d后液面形成灰白色菌環(huán)或菌膜。甘油瓊脂24～48h后，形成灰白色至灰黃色中等大小菌落，直徑2-3mm。

馬鈴薯瓊脂斜面：48h后，可出現(xiàn)棕黃色蜂蜜樣的粘稠菌苔，隨著時(shí)間的延長色澤逐漸變深?，F(xiàn)在是37頁\一共有53頁\編輯于星期四（三）致病性本菌在自然條件下主要感染馬、騾、驢等單蹄獸，引起鼻疽病。駱駝、犬、貓等家畜以及獅、虎、豹、狼、狐、貂等野獸也可感染。牛、豬、綿羊、山羊及禽類不感染。人類偶爾也可經(jīng)創(chuàng)傷或吸入含菌材料而受感染，并引起致死性疾病?，F(xiàn)在是38頁\一共有53頁\編輯于星期四實(shí)驗(yàn)動(dòng)物貓和倉鼠最易感，豚鼠次之。接種細(xì)菌于雄性豚鼠腹腔后可引起典型的睪丸炎，睪丸腫脹化膿而后破潰，此反應(yīng)稱為：Strauss反應(yīng)，具有一定診斷價(jià)值。

Strauss反應(yīng)現(xiàn)在是39頁\一共有53頁\編輯于星期四（四）微生物學(xué)診斷包括細(xì)菌學(xué)檢查、血清學(xué)檢查和變態(tài)反應(yīng)檢查。在進(jìn)行大規(guī)模檢疫時(shí)主要采用臨床檢查、變態(tài)反應(yīng)和補(bǔ)反相配合的檢查方法，其中任何一種呈陽性，都定為鼻疽病馬。而細(xì)菌學(xué)檢查只有在特殊病例才被應(yīng)用。現(xiàn)在是40頁\一共有53頁\編輯于星期四1、變態(tài)反應(yīng)檢查是鼻疽診斷和檢疫最常用的方法，所用診斷試劑為鼻疽菌素（mallein）。馬感染鼻疽菌后2～3周,對(duì)鼻疽菌素呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，以后隨著病程的發(fā)展反應(yīng)逐漸增強(qiáng)。病馬保持變態(tài)反的時(shí)間有的可達(dá)8～10年，甚至終生。因此，該方法在鼻疽診斷、檢疫和流行病學(xué)調(diào)查上是一種必不可少的手段?，F(xiàn)在是41頁\一共有53頁\編輯于星期四變態(tài)反應(yīng)診斷點(diǎn)眼反應(yīng)眼瞼試驗(yàn)皮下試驗(yàn)皮膚試驗(yàn)噴霧診斷其中以點(diǎn)眼法最為常用。為我國檢疫規(guī)程主要采用方法。現(xiàn)在是42頁\一共有53頁\編輯于星期四點(diǎn)眼法是將鼻疽菌素3～4滴滴入馬匹一則眼結(jié)膜囊內(nèi)，分別于點(diǎn)眼后3、6、9及24h觀察反應(yīng)。如眼結(jié)膜紅腫并排出膿性分泌物，即為陽性反應(yīng)；結(jié)膜無反應(yīng)或輕度潮紅、流淚或有少量的粘性分泌物判為陰性?，F(xiàn)在是43頁\一共有53頁\編輯于星期四點(diǎn)眼法操作簡(jiǎn)便，特異性和檢出率都很高，無論是對(duì)急性、慢性以及開放型和隱性感染的馬匹均可檢出。故此法最適合于畜群大批檢疫，尤其是以5～6d的間隔反復(fù)點(diǎn)眼，檢出率更高。所以點(diǎn)眼一般連續(xù)3次，每次間隔5～6天。點(diǎn)眼法對(duì)騾子的檢出率較低。驢的眼結(jié)膜對(duì)鼻疽菌素不敏感，一般檢不出。此外，1～2的幼馬駒眼結(jié)膜對(duì)鼻疽菌素也不敏感?，F(xiàn)在是44頁\一共有53頁\編輯于星期四馬、騾三次點(diǎn)眼檢出率第一次（%）第二次（%）第三次（%）馬60～709598騾16.960.789.3現(xiàn)在是45頁\一共有53頁\編輯于星期四2、血清學(xué)檢查常用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。此法特異性很高，凡補(bǔ)反呈陽性的馬，剖檢時(shí)95％～99％都有鼻疽病變。但本反應(yīng)檢出率較低，只能檢出大多數(shù)活動(dòng)型鼻疽馬；而對(duì)于點(diǎn)眼陽性但無臨床癥狀的馬只能檢出10％～25％左右。因此，補(bǔ)反只能作為鼻疽菌素點(diǎn)眼的一種輔助診斷方法，用來檢出其中的活動(dòng)型病馬，而不能代替鼻疽菌素點(diǎn)眼試驗(yàn)?，F(xiàn)在是46頁\一共有53頁\編輯于星期四五、免疫防治對(duì)于鼻疽免疫，迄今為止還沒有研制出可供實(shí)用的有效菌苗。一般防制措施是采用全面檢疫，然后將檢出的開放性鼻疽病馬予以撲殺或隔離治療后劃地使役，將檢出的非開放性陽性病馬劃地隔離使役，并培養(yǎng)健康幼駒以更新畜群?，F(xiàn)在是47頁\一共有53頁\編輯于星期四第三節(jié)

假單胞菌屬(Pseudomonas)假單胞菌為專性需氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。本屬細(xì)菌種類繁多，廣泛存在于土壤、水、植物及腐物中，多為條件致病菌，與多種食物的腐敗有關(guān)。與動(dòng)物疾病有關(guān)的主要有銅綠假單胞菌?，F(xiàn)在是48頁\一共有53頁\編輯于星期四一、銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（P.aeruginosa），慣稱綠膿桿菌，因能產(chǎn)生綠色水溶性色素，感染創(chuàng)口時(shí)可形成綠色膿汁而得名。本菌分布廣泛，土壤和水中、人畜