專題二23分解纖維素的微生物的分離課件

分解纖維素的微生物的分離教學(xué)目標(biāo):1、知道纖維素酶的種類及作用2、初步掌握從土壤中分離出分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法閱讀課本27頁(yè)基礎(chǔ)知識(shí)部分第一、二段，回答下列問(wèn)題：1、纖維素在生物圈的分布狀況？2、纖維素酶的組成及作用？

纖維素(C6H10O5)n是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。

復(fù)合酶，三種組分:CX酶、

C1酶和葡萄糖苷酶，一、纖維素和纖維素酶纖維素纖維二糖葡萄糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶

在2支20mL的試管中，分別放入1×6cm的濾紙條，再分別加入pH為4.8、物質(zhì)的量濃度為0.1mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液10mL、11m，在加入10mL緩沖液的試管中加入1mL纖維素酶（70~80U/mL）。將二支試管固定在50mL的錐形瓶中，在搖床上以140r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1h，觀察結(jié)果。1U表示1個(gè)酶活力單位，是指在溫度為25℃，其他反應(yīng)條件，如pH等，均為最適的情況下，在1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1mmol的底物所需的酶量。底物：酶所作用和催化的化合物。

小實(shí)驗(yàn)回答下列問(wèn)題：2、纖維素分解菌的篩選方法1、纖維素分解菌的篩選方法的原理剛果紅染色法：這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的。這樣我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌透明圈

二、纖維素分解菌的篩選兩種剛果紅染色法的比較：方法一中NaCl溶液的作用？思考：

漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。用這方法可以判斷酶活力的大小，實(shí)際上剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)生纖維素酶，能分解這個(gè)多糖底物成為單糖，這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了，氯化鈉溶液就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去，這樣就留下大大小小的透明圈，大的透明圈當(dāng)然分解纖維素的能就強(qiáng)！練一練：1、下列關(guān)于纖維素酶的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是A、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物C、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物D、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說(shuō)明已篩選出了纖維素分解菌土壤取樣取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境。將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右的腐殖土壤中。選擇培養(yǎng)3、操作方法：將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)1～2天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用梯度稀釋按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到106將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上1、制備培養(yǎng)基:參照旁欄中的比例2、涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布在培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)挑選產(chǎn)生透明圈的菌落參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落練一練1、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？（）A、生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)B、生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)C、生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)D、生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)2、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（）①土壤取樣②梯度稀釋③選擇培養(yǎng)④菌懸液涂布平板⑤挑選出單個(gè)菌落A、①②③④⑤B、①③②④⑤C、①②④③⑤D、①④②③⑤3、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（）A、可以增加纖維素分解菌的濃度B、可以減少纖維素分解菌的濃度C、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D、所用培養(yǎng)基是平板培