人 (Human) 端粒酶 (telomerase) ELISA 檢測(cè)試劑盒 中文

人(Human)端粒酶(telomerase)ELISA檢測(cè)試劑盒用途：人TelomeraseELISA試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、緩沖液中細(xì)胞上清液及各種體液中的Telomerase。本試劑盒可以檢測(cè)天然和重組的Telomerase。本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。試驗(yàn)原理：人Telomerase試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知Telomerase濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Telomerase和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Telomerase的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：40IU/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗Telomerase抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（60ml）1瓶（30ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型自備材料蒸餾水。加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500u、1000lul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室可完全保證此血制品不會(huì)傳染肝炎、AIDS或其它傳染病，依據(jù)當(dāng)?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：40IU/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。20IU/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10IU/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0IU/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5IU/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.25IU/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0IU/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液（20×）的稀釋：蒸餾水20倍稀釋。操作步驟使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育15分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（IU/ml）A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品結(jié)果分析以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的Telomerase標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的Telomerase含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲